艾滋病抗體檢測(cè)醫(yī)學(xué)科技論文
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1.材料及方法
1.1材料
高質(zhì)量的質(zhì)控物：為保證質(zhì)控物的良好質(zhì)量，首先，質(zhì)控物要求在220℃的環(huán)境下保存；其次避免反復(fù)凍融。購于衛(wèi)生部臨檢中心。ELISA檢測(cè)抗HIV試劑盒：北京萬泰HIV（1+2型）ELISA抗體診斷試劑盒。96孔洗板機(jī)(芬蘭丹尼公司)；MK-2型酶標(biāo)儀(芬蘭丹尼公司)；移液器等。
1.2方法
有關(guān)質(zhì)控血清的制備，應(yīng)在無菌條件下用含有10%小牛血清PBS緩沖液將陽性對(duì)照血清稀釋成低值弱陽性,然后將稀釋后的血清以每管0.5ml進(jìn)行分裝,并將其置20℃環(huán)境下保存?zhèn)溆?。為?shí)現(xiàn)對(duì)質(zhì)控血清的精密性檢測(cè)，在檢測(cè)樣品的同時(shí)，還應(yīng)對(duì)抗-HIV質(zhì)控血清進(jìn)行檢測(cè)，將同時(shí)檢測(cè)到的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，以比較其精密性。洗板：洗板所用的洗液先用蒸餾水進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐渲靡员ＷC其PH值正常。要求浸泡時(shí)間多余45s，洗板后殘液不得超過2μl，也即人工扣板墊紙不濕。稀釋方法：由于抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)所加樣品僅需10μl，少加或者多加都會(huì)造成不同程度的誤差，而影響到抗體檢測(cè)的質(zhì)量。由此，移取精準(zhǔn)的樣品的移液器在獲取樣品量方面十分重要。因此，應(yīng)確保以下幾點(diǎn)：一保證移液器和移液頭間連接的嚴(yán)密性；二取樣時(shí)為避免移液器粘帶血清，應(yīng)保證移液頭恰與液面接觸；三為避免對(duì)灰?guī)^(qū)的誤判，在稀釋樣品液時(shí)不能使用滴瓶，而采用移液器進(jìn)行樣品的滴加，以保證抗體檢測(cè)質(zhì)量的穩(wěn)定。基于以上要點(diǎn)，在板中加入100μl稀釋液再加10μl標(biāo)本,同時(shí)吹吸3次混勻。顯色：ELISA反應(yīng)中最佳的色原底物是TMB。但在加入終止液15min后濃度過高的就會(huì)產(chǎn)生灰褐色絮狀沉淀。因此，處理嚴(yán)格按照使用說明書來控制顯色的溫度、時(shí)間等外在因素，以避免人為因素所造成的吸光度等的升降外，還應(yīng)在加入終止液的15min內(nèi)及時(shí)進(jìn)行比色。
2.結(jié)果
2.1穩(wěn)定性試驗(yàn)
使用制備的質(zhì)控品對(duì)艾滋病抗體每隔一個(gè)月進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)S/CO波動(dòng)范圍未超出質(zhì)控范圍，也即實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性檢測(cè)屬真。
2.2制作質(zhì)控圖
在使用ELISA質(zhì)量控制方法來控制艾滋病抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量時(shí)，為保證在實(shí)際中獲得良好的效果，首先應(yīng)做好OCV及RCVK來確定失控的標(biāo)準(zhǔn)，然后利用Westgard規(guī)則判定失控，使用生化L2J圖進(jìn)行。由于采用ELISA方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的目的在于檢測(cè)艾滋病抗體，故而，應(yīng)確保這一方法的敏感性。可采用許斌提出的臨界值血清界定法，試劑所設(shè)陰陽對(duì)照為內(nèi)對(duì)照,另設(shè)臨界值、高值陽性和2份正常人陰性對(duì)照,作為外對(duì)照與標(biāo)本同時(shí)檢測(cè),臨界值S/CO>1,高值陽性S/CO>10,正常人陰性對(duì)照A值在01050～01100，當(dāng)其中所存在的各項(xiàng)中有一項(xiàng)不符合標(biāo)準(zhǔn)即為失控。臨界值為敏感度監(jiān)控、陰性對(duì)照為特異性監(jiān)控、高值為“HOOK”監(jiān)控，由此可見，臨界值血清界定既反映ELISA的靈敏度又兼顧特異性。
3.討論
ELISA方法檢測(cè)HIV的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，可用吸光度值來表示，還可以使用S/CO值來表示。當(dāng)前，艾滋病抗體檢測(cè)一般使用ELISA法，這一方法具有靈敏度較高的特點(diǎn)，非常適于當(dāng)前眾多血站系統(tǒng)對(duì)HCV、抗2HIVHBsAg等的檢測(cè)。本人依據(jù)多年的指控監(jiān)測(cè)工作經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，在使用較強(qiáng)陽性的質(zhì)控物進(jìn)行作圖時(shí)，以上兩種方法都會(huì)產(chǎn)生較好的實(shí)驗(yàn)效果；但是，對(duì)于一些中性、弱陽性的質(zhì)控物進(jìn)行作圖時(shí)，S/CO值的表示方法更為科學(xué)、準(zhǔn)確。但是在實(shí)際的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，也存在著眾多影響這一方法有效運(yùn)用的不利因素，因此，加強(qiáng)艾滋病抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制具有現(xiàn)實(shí)性的意義。
