羊用采精器的運(yùn)用思考
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本文作者：王公金、徐小波、于建寧、陳哲、潘孝青 單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所
材料與方法
1材料
(1)器材與藥品試劑主要試驗(yàn)器材:普通硅膠管(外徑26mm，壁厚3mm);醫(yī)用無毒天然硅膠管(外徑19mm，內(nèi)徑11mm，壁厚4mm;執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn):Q/STXI－2004);人用天然膠乳橡膠避孕套［簡稱避孕套，超薄型，型號規(guī)格:(52±2)mm］;普通生物顯微鏡，保溫瓶(0．5～1．0L);載玻片與蓋玻片;輸精槍(不銹鋼或玻璃);全套常規(guī)假陰道采精器。主要藥品試劑:海綿陰道栓和氯前列烯醇為上海計(jì)劃生育研究所產(chǎn)品;促卵泡素(FSH)、孕馬血清促性腺激素(PMSG)和促黃體素釋放激素A3(LHRH－A3)均為寧波第二激素廠產(chǎn)品;PVP30(AR)、檸檬酸三鈉(AR)、葡萄糖(AR)、青霉素(醫(yī)用針劑)、鏈霉素(醫(yī)用針劑)、70%乙醇(AR)、生理鹽水(獸用)以及凡士林等不限生產(chǎn)商，隨意采購;卵黃液(臨用前從新鮮雞蛋中分離)。
(2)試驗(yàn)地點(diǎn)與試驗(yàn)動(dòng)物本項(xiàng)研究主要在南京市六合區(qū)竹鎮(zhèn)鎮(zhèn)江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)羊場、溧陽養(yǎng)羊合作社羊場、浙江湖州練市鎮(zhèn)志盛羊場和江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所附屬的茅山鎮(zhèn)江市農(nóng)牧科技示范園內(nèi)羊場實(shí)施。試驗(yàn)羊群(♀、♂)群體數(shù)量達(dá)3000只，涉及種群為波爾山羊、波雜山羊、徐淮白山羊、杜泊綿羊、杜湖和杜寒雜交F1代綿羊、湖羊、小尾寒羊(年齡8月齡至4周歲，體重≥30kg)，其中母羊約2500只，公羊約500只。所有試驗(yàn)羊群均按照常規(guī)舍飼模式飼養(yǎng)管理。
2方法
(1)內(nèi)置式采精器簡易制作與裝配制作方法:將普通硅膠管剪切成10或12cm長度管段作為假陰道套管(簡稱套管)，并在距一端1．3cm處環(huán)繞外表面刻出深度為1mm的凹槽。取醫(yī)用無毒天然硅膠管剪取成10cm或12cm管段作為假陰道內(nèi)襯管(簡稱內(nèi)襯管)，將套管和內(nèi)襯管清洗干凈后按常規(guī)高溫消毒方法消毒，備用。將避孕套數(shù)只完全展開，置于適量70%乙醇溶液中浸泡、漂洗數(shù)次，以除去其內(nèi)外表面涂敷的油漬，然后于50℃蒸餾水中反復(fù)漂洗，最后置于盛有50mL含雙抗(160萬單位青霉素和80萬單位鏈霉素)生理鹽水的具塞塑料試管中保存，備用。裝配方法從生理鹽水浸泡液中取出避孕套，擠壓出套內(nèi)大部分生理鹽水，爾后將內(nèi)襯管裝入避孕套開口端，使內(nèi)襯管一端開口與避孕套開口端平齊，形成內(nèi)襯管和避孕套組合體。將組合體裝入套管內(nèi)腔中，使組合體開口端與帶有外表面凹槽的套管開口端保持一致方向，并使組合體暴露出套管內(nèi)腔外約2cm長度，然后將組合體開口端內(nèi)腔向外翻卷，套在套管外表面上，最后用橡皮筋在套管圓柱體外壁凹槽處扎緊組合體，并在套管端口橡皮筋插入1枚回形針(其頂端與套管開口端平齊)，裝配成一套簡易的羊用內(nèi)置式采精器裝置，保持清潔，備用。
(2)采精操作方法與步驟在內(nèi)置式采精器試驗(yàn)組(簡稱內(nèi)置采精組)中，將裝配好的簡易內(nèi)置式采精器開口用橡皮塞封住，整體浸入30～40℃溫水中保溫片刻，取出后除去橡皮塞，并在其開口處及深達(dá)處23cm內(nèi)腔和套管另一端外表面涂上少許凡士林。在羊舍內(nèi)選擇1只發(fā)情母羊或未發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)母羊(四肢健壯，體型中等，體重≥25kg)作為臺羊，在自然站立保定情況下，清洗其外陰部，手持采精器裝置(開口端朝外)推入母羊陰道內(nèi)，使采精器開口端處于臺羊陰道口內(nèi)深約1cm為止。選擇擬采精種公羊與已置入采精器的臺羊，在其保定或自由活動(dòng)情況下與公羊自然交配。一般情況下，公羊與發(fā)情臺羊交配不需要保定，而未發(fā)情臺羊需要在保定狀態(tài)下進(jìn)行。當(dāng)觀察到公羊爬跨臺羊，并完成典型射精動(dòng)作后，立即隔離公羊，保定被交配后的臺羊，用帶手套的食指和拇指探入臺羊陰道內(nèi)抽出系在采精器端口外側(cè)的回形針，連帶取出該采精裝置。從采精器套管上剝離出組合體，直立狀態(tài)下從組合體開口端加入2mL生理鹽水，爾后從避孕套上抽出內(nèi)襯管，封閉避孕套開口端，輕輕上下翻轉(zhuǎn)數(shù)次，混勻避孕套內(nèi)精液，進(jìn)而保持開口端向上垂直片刻，使避孕套內(nèi)精液匯集于儲精囊內(nèi)。量取避孕套內(nèi)精液體積，取少許稀釋精液于載玻片上，壓上蓋玻片，置生物顯微鏡上觀察精子活力和密度，以便進(jìn)一步稀釋和冷藏處理，制備人工授精工作液。為了比較本內(nèi)置式采精器與常規(guī)假陰道采精器兩者采精操作優(yōu)缺點(diǎn)，本研究另外設(shè)置了常規(guī)假陰道采精試驗(yàn)組(簡稱常規(guī)采精組)，采精操作實(shí)施過程中均使用相同的公羊和臺羊，其采集精液稀釋、品質(zhì)鑒定方法與內(nèi)置式采精器相同。上述采精操作于一年四季，分別在使用發(fā)情臺羊或未發(fā)情臺羊、室內(nèi)或露天、白晝或夜晚(有光照或無光照)以及雨雪等條件下進(jìn)行，由采精技術(shù)人員和隨機(jī)選擇的無采精操作經(jīng)驗(yàn)人員實(shí)施，分別統(tǒng)計(jì)在各種環(huán)境條件下的采精效果(持續(xù)時(shí)間、難易以及成功率等)，綜合檢驗(yàn)2種采精方式的操作效果。
(3)簡易采精技術(shù)在同期發(fā)情與人工授精中的應(yīng)用在2007—2011年5年期間春季和秋季配種季節(jié)，分別對大、中、小型山羊和綿羊養(yǎng)殖場舍飼母羊群進(jìn)行了分期分批同期發(fā)情技術(shù)推廣示范。其間，分別利用內(nèi)置式采精器和常規(guī)假陰道采精器采集波爾山羊、當(dāng)?shù)匕咨窖颉⒍挪淳d羊、雜交杜湖綿羊以及湖羊種公羊精液，采用石永忠［1］和聶曉偉等［8］方法制備精液工作液，分別進(jìn)行相同品種發(fā)情母羊人工授精，并于配種后觀察記錄妊娠率(以配種后2個(gè)月內(nèi)，即3個(gè)發(fā)情周期內(nèi)未見返情者判定為妊娠，反之判定為未妊娠)。統(tǒng)計(jì)評價(jià)2種方式采集精液的配種效果。
結(jié)果與分析
1不同操作人員和動(dòng)物品種采精效果比較
經(jīng)5年來在全省大、中、小型羊場現(xiàn)場對江蘇現(xiàn)有山羊和綿羊種群采精示范比較試驗(yàn)證明，對于任一品種羊群而言，未經(jīng)采精技術(shù)培訓(xùn)人員和經(jīng)過專門采精技術(shù)訓(xùn)練的專門采精員在良好環(huán)境和輔助設(shè)施條件下使用內(nèi)置式采精器采精成功率未顯示出明顯差異，均達(dá)到極高的采精成功率(93．1%以上)。而兩者使用傳統(tǒng)采精器則表現(xiàn)出顯著差異，采精成功率明顯下降，且未經(jīng)專門采精技術(shù)培訓(xùn)人員使用傳統(tǒng)采精器采精成功率顯著低于專門采精員(表1)。與傳統(tǒng)采精器相比較，上述結(jié)果證明內(nèi)置式采精器具有具有明顯的優(yōu)勢，基本不存在對采精操作技術(shù)(技巧)的依賴性，易于掌握使用，達(dá)到高效采精目的。
2不同環(huán)境氣候和設(shè)施條件下2種采精方法采精效果綜合評價(jià)
根據(jù)表2所列2種采精裝置使用評估數(shù)據(jù)分析，本羊用內(nèi)置式采精器裝置在12項(xiàng)評價(jià)指標(biāo)中，除采精量和采精密度2項(xiàng)沒有差異外，其余10項(xiàng)評價(jià)指標(biāo)［裝置結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、制造成本、操作人員技術(shù)水平要求、安裝調(diào)試耗時(shí)、發(fā)情臺羊需要與否、采精公羊調(diào)教程度、操作程序簡便性、應(yīng)激反應(yīng)、環(huán)境和設(shè)施條件限制(光照、溫度以及室外雨雪等氣候)依賴性以及最佳條件下采精成功率］均顯著優(yōu)于傳統(tǒng)假陰道采精器。對于內(nèi)置式采精器而言，利用未發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)母羊亦可輕松實(shí)現(xiàn)采精。在此情況下，傳統(tǒng)采精器是較難完成采精的。內(nèi)置式采精器采精過程基本是在自然本交過程中實(shí)現(xiàn)的，因此只要種公羊具備正常本交能力，即可成功采精，相比之下，利用傳統(tǒng)采精器采集未調(diào)教公羊精液是非常困難的。利用傳統(tǒng)采精裝置采精效率往往在很大程度上依賴于操作環(huán)境和設(shè)施條件優(yōu)劣，而內(nèi)置式采精器采精操作基本上不受環(huán)境和設(shè)施條件限制，甚至可在無光照、露天雨雪和低溫等環(huán)境氣候條件下成功采精，特別適于在基層羊養(yǎng)殖場簡陋條件下廣泛推廣應(yīng)用。顯然，由于內(nèi)置式采精器采精過程是在模擬自然本交的過程中完成的，故種畜和臺羊一般不會(huì)出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，操作安全性也較高。
3同期發(fā)情與人工授精的受胎率
采用內(nèi)置式采精器和常規(guī)假陰道采精器采集的精液精子密度和活力沒有發(fā)現(xiàn)任何區(qū)別，2種采精途徑獲得的精液采用相同的精液稀釋方法制備授精工作液，共進(jìn)行了30余批次(30～100只/批)同期發(fā)情山羊和綿羊人工授精，不同來源的精液工作液分別對任一相應(yīng)品種同期發(fā)情山羊或綿羊母羊群發(fā)情15h后一次性人工授精處理。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析表明，在發(fā)情后2個(gè)月(3個(gè)發(fā)情周期)內(nèi)所有母羊群妊娠率為71．2%～82．1%，對于同一種群母羊而言，不同來源的精液輸精后妊娠率未表現(xiàn)出顯著差異。這說明對于諸種山羊和綿羊種群而言，使用內(nèi)置式采精器和傳統(tǒng)的假陰道采精器獲得的精液品質(zhì)相互間沒有差別，均可相互替代推廣應(yīng)用于山羊和綿羊繁育科研和生產(chǎn)領(lǐng)域。
小結(jié)與討論
本文介紹的內(nèi)置式采精裝置可以在基層羊場簡陋條件下全天候使用，如露天雨雪環(huán)境、環(huán)境溫度較低以及晚上光照條件較差甚至黑暗條件下，皆可實(shí)施采精操作，整個(gè)操作過程基本不依賴于采精技巧水平。理論上講，只要種公畜具有正常本交能力，即可達(dá)到成功采精的目的。相比之下，傳統(tǒng)采精器成功采精與否則往往依賴于操作人員采精技術(shù)(技巧)水平發(fā)揮狀態(tài)，這體現(xiàn)了內(nèi)置式采精器獨(dú)特的“傻瓜式”采精操作特點(diǎn)。在規(guī)模化養(yǎng)羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展過程中，該套內(nèi)置式采精裝置及其方法適于與同期發(fā)情和人工授精技術(shù)相結(jié)合，有效地解決種公畜基因資源的高效和合理利用難題，可望通過中試試驗(yàn)進(jìn)一步改進(jìn)與完善，廣泛應(yīng)用于養(yǎng)羊業(yè)科研與生產(chǎn)領(lǐng)域。在將內(nèi)置式采精器安裝于臺羊陰道內(nèi)時(shí)偶爾會(huì)發(fā)生安裝困難或安裝后易于脫落等意外現(xiàn)象。出現(xiàn)該類現(xiàn)象的主要原因是臺羊選擇不當(dāng)，一般來講要盡可能選擇經(jīng)產(chǎn)母羊或發(fā)情母羊作為臺羊，其陰道收縮和擴(kuò)張狀況良好，這樣就不會(huì)發(fā)生安裝困難或脫落問題。如果在采精操作現(xiàn)場沒有發(fā)情母羊的情況下，應(yīng)盡可能選擇體型較大的山羊或綿羊作為臺羊，這樣采精器安裝比較容易，也不會(huì)傷害母羊陰道內(nèi)壁，采精之際最好在人工保定狀態(tài)下進(jìn)行，以確保采精成功。
一些缺乏本交經(jīng)驗(yàn)和未經(jīng)調(diào)教的種羊采精過程中會(huì)出現(xiàn)爬跨后陰莖不能正確插入已裝入采精器的臺羊陰道的現(xiàn)象。解決的辦法是待公畜爬跨后伸出陰莖時(shí)采精人員可用手輕輕地在其包皮囊處把握，輔助調(diào)整陰莖伸出方向，使其對準(zhǔn)臺羊陰道口，從而成功導(dǎo)入，射精。對于那些體型較小的公畜采精時(shí)，應(yīng)適當(dāng)利用地勢高低環(huán)境條件，將臺羊保定于較低處，引導(dǎo)公畜處于地勢較高處爬跨，通常易于采精成功。
