硝基呋喃類代謝物快速檢測研究
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摘要：水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留會通過食物鏈富集作用對人體健康產(chǎn)生危害，我國規(guī)定在動物源性食品中不得檢出硝基呋喃類代謝物，但數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示仍有人為利益而使用該類藥物。為保證百姓餐桌安全，避免大型儀器檢測的滯后性，建立有效、簡便、適合現(xiàn)場操作的快速檢測技術(shù)十分必要。對水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物快速檢測技術(shù)進(jìn)行探討，以期為水產(chǎn)品快速檢測發(fā)展提供技術(shù)支持。
關(guān)鍵詞：水產(chǎn)品；硝基呋喃類代謝物；快速檢測技術(shù)；應(yīng)用
硝基呋喃類藥物是一類人工合成的具有5－硝基呋喃環(huán)的廣譜抗生素，常見的有以下4種：呋喃唑酮（AOZ）、呋喃它酮（AMOZ）、呋喃西林（SEM）和呋喃妥因（AHD）。我國農(nóng)業(yè)部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中規(guī)定在動物源性食品中不得檢出硝基呋喃類代謝物，美國、日本、韓國和歐盟等國家同樣規(guī)定在動物源性食品中不得檢出。但到目前為止，仍有水產(chǎn)品中檢出硝基呋喃類藥物及其代謝物的報(bào)道出現(xiàn)。這不僅危害人類身體健康，也影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，同時(shí)給國家水產(chǎn)品出口帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。為了保障百姓餐桌安全，維護(hù)國家利益，建立現(xiàn)行有效、方便現(xiàn)場操作的檢測技術(shù)十分必要。本文主要對水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物快速檢測技術(shù)進(jìn)行探討，為今后快速檢測發(fā)展提供技術(shù)支持。
1硝基呋喃類代謝物的危害及作用原理
硝基呋喃類藥物作用于微生物酶系統(tǒng)，通過抑制乙酰輔酶A，干擾微生物糖類的代謝，起到抑菌作用，可殺滅大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、真菌和原蟲等病原體，因而曾經(jīng)廣泛應(yīng)用于畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)［1］。研究發(fā)現(xiàn)，硝基呋喃類代謝物可使試驗(yàn)動物誘發(fā)癌變和基因突變［2］。硝基呋喃類藥物對光敏感，半衰期很短，在動物體內(nèi)能迅速代謝，原型藥物很快就降至檢出限以下；而其與蛋白結(jié)合態(tài)的代謝產(chǎn)物則可穩(wěn)定存在數(shù)月，常用的食品烹飪方法如蒸煮、烘烤和微波加熱等均無法使代謝物降解。所以，殘留檢測以代謝物作為指示該類藥物殘留的標(biāo)識物。硝基呋喃類物質(zhì)均為性質(zhì)穩(wěn)定的黃色粉末，無味或微苦味。AOZ幾乎不溶于水和乙醇；SEM難溶于水，微溶于乙醇；AHD幾乎不溶于水，微溶于乙醇。硝基呋喃類原型藥物在生物體內(nèi)代謝迅速，其代謝產(chǎn)物3－氨基－2－惡唑烷基酮（AOZ）、5－甲基嗎啉－3－氨基－2－惡唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）和1－氨基－2－內(nèi)酰脲（AHD）能與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成比原藥化合物更穩(wěn)定的蛋白結(jié)合物，故常利用代謝物的檢測來反應(yīng)硝基呋喃類藥物的殘留狀況。此類蛋白結(jié)合物可以在弱酸性條件下水解，從蛋白質(zhì)中釋放出來被人體吸收，進(jìn)而對人體造成危害［3］。
2水產(chǎn)品快速檢測技術(shù)研究的意義
硝基呋喃類代謝物常用的檢測方法有色譜分析法和免疫分析法。色譜分析法包括高效液相色譜法和液—質(zhì)聯(lián)用法，具有靈敏度高、重復(fù)性和準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，但是前處理過程相對復(fù)雜，時(shí)間較長，對人員要求較高，而且儀器設(shè)備價(jià)格高昂，普及難度大，存在滯后性，不適合日常監(jiān)管。免疫分析法包括酶聯(lián)免疫法和膠體金免疫層析法，操作相對簡單，而且用時(shí)較短，技術(shù)便于掌握，缺點(diǎn)是容易出現(xiàn)假陽性，適用于大批量樣品的初篩工作。目前，我國水產(chǎn)行業(yè)規(guī)模較大，分布零散，難于集中管理，水產(chǎn)品中的硝基呋喃類代謝物等藥物殘留并不能通過肉眼直接辨別出來，如果能在現(xiàn)場進(jìn)行快速檢測，初篩出疑似樣品，然后將疑似樣品通過色譜技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證，可以縮短檢測周期，提高工作效率，促進(jìn)政府部門對水產(chǎn)品行業(yè)及時(shí)有效的監(jiān)管。
3水產(chǎn)品硝基呋喃代謝物快速檢測技術(shù)原理
3．1酶聯(lián)免疫法酶聯(lián)免疫法（ELISA）是一種將抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合的一種應(yīng)用技術(shù)，可進(jìn)行定性和定量檢測。ELISA可快速檢測水產(chǎn)品中AOZ和AMOZ［4］，在相關(guān)研究報(bào)道中，由于硝基呋喃代謝物分子量較小、免疫原性較低，已報(bào)道的硝基呋喃代謝物的實(shí)際樣品檢測大多基于衍生檢測方法。
3．2膠體金免疫層析法目前最常用于快速檢測4種硝基呋喃類代謝物（AOZ，AMOZ，SEM，AHD）的技術(shù)是膠體金免疫層析法，國內(nèi)已有多家生物技術(shù)公司研制生產(chǎn)膠體金試紙條快速檢測試劑盒產(chǎn)品［5］。其靈敏度高，操作簡便，檢測快速，缺點(diǎn)是不能實(shí)現(xiàn)在線檢測和多殘留同時(shí)檢測，且會存在假陽性和假陰性。膠體金免疫層析法是膠體金標(biāo)記技術(shù)和免疫層析技術(shù)結(jié)合的應(yīng)用形式，以膠體金作為示蹤物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。若待測樣品中含有硝基呋喃代謝物（抗原物質(zhì)），則與金標(biāo)抗體相結(jié)合，阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上的偶聯(lián)物結(jié)合，使T線顯色較弱，甚至不顯色，結(jié)果為陽性；若待測樣品中沒硝基呋喃代謝物（抗原物質(zhì)），則不能阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上的偶聯(lián)物結(jié)合，從而T線顯色較強(qiáng)，呈紅色，結(jié)果為陰性。
4快速檢測技術(shù)展望
隨著百姓餐桌日益豐富，食品安全問題已經(jīng)成為重中之重?？焖贆z測技術(shù)具有用時(shí)短、耗材少、易掌握等優(yōu)點(diǎn)，將其應(yīng)用于市場監(jiān)管必然會成為今后的發(fā)展趨勢。據(jù)報(bào)道，快速檢測技術(shù)在上海已經(jīng)開始實(shí)施應(yīng)用，并成立了首個食品快速檢測站，對消費(fèi)者免費(fèi)開發(fā)，對快速檢測中發(fā)現(xiàn)的不合格樣品，將進(jìn)行追蹤溯源和抽樣復(fù)檢。劉歡等人對市場現(xiàn)有的3種硝基呋喃類代謝物快速檢測產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)，其中一種產(chǎn)品對AOZ，AMOZ，SEM，AHD檢出率為100％，且兩個不同批次產(chǎn)品的檢測結(jié)果一致；另外兩種產(chǎn)品存在假陽性，且不同批號間產(chǎn)品的穩(wěn)定性有差異。因此，用快速檢測技術(shù)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物時(shí)，有必要對其最低檢出限、假陽／陰性率、穩(wěn)定性等參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，確保產(chǎn)品符合標(biāo)準(zhǔn)后，方能用于批量樣品檢測工作，以便更好地服務(wù)于日常監(jiān)管工作。
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作者:張瑩瑩 單位:沈陽市農(nóng)業(yè)監(jiān)測總站