硝基呋喃類代謝物快速檢測研究
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摘要：水產品中硝基呋喃類代謝物殘留會通過食物鏈富集作用對人體健康產生危害，我國規定在動物源性食品中不得檢出硝基呋喃類代謝物，但數據統計顯示仍有人為利益而使用該類藥物。為保證百姓餐桌安全，避免大型儀器檢測的滯后性，建立有效、簡便、適合現場操作的快速檢測技術十分必要。對水產品中硝基呋喃類代謝物快速檢測技術進行探討，以期為水產品快速檢測發展提供技術支持。
關鍵詞：水產品；硝基呋喃類代謝物；快速檢測技術；應用
硝基呋喃類藥物是一類人工合成的具有5－硝基呋喃環的廣譜抗生素，常見的有以下4種：呋喃唑酮（AOZ）、呋喃它酮（AMOZ）、呋喃西林（SEM）和呋喃妥因（AHD）。我國農業部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中規定在動物源性食品中不得檢出硝基呋喃類代謝物，美國、日本、韓國和歐盟等國家同樣規定在動物源性食品中不得檢出。但到目前為止，仍有水產品中檢出硝基呋喃類藥物及其代謝物的報道出現。這不僅危害人類身體健康，也影響水產養殖業的健康發展，同時給國家水產品出口帶來巨大經濟損失。為了保障百姓餐桌安全，維護國家利益，建立現行有效、方便現場操作的檢測技術十分必要。本文主要對水產品中硝基呋喃類代謝物快速檢測技術進行探討，為今后快速檢測發展提供技術支持。
1硝基呋喃類代謝物的危害及作用原理
硝基呋喃類藥物作用于微生物酶系統，通過抑制乙酰輔酶A，干擾微生物糖類的代謝，起到抑菌作用，可殺滅大多數革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、真菌和原蟲等病原體，因而曾經廣泛應用于畜禽及水產養殖業［1］。研究發現，硝基呋喃類代謝物可使試驗動物誘發癌變和基因突變［2］。硝基呋喃類藥物對光敏感，半衰期很短，在動物體內能迅速代謝，原型藥物很快就降至檢出限以下；而其與蛋白結合態的代謝產物則可穩定存在數月，常用的食品烹飪方法如蒸煮、烘烤和微波加熱等均無法使代謝物降解。所以，殘留檢測以代謝物作為指示該類藥物殘留的標識物。硝基呋喃類物質均為性質穩定的黃色粉末，無味或微苦味。AOZ幾乎不溶于水和乙醇；SEM難溶于水，微溶于乙醇；AHD幾乎不溶于水，微溶于乙醇。硝基呋喃類原型藥物在生物體內代謝迅速，其代謝產物3－氨基－2－惡唑烷基酮（AOZ）、5－甲基嗎啉－3－氨基－2－惡唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）和1－氨基－2－內酰脲（AHD）能與蛋白質結合，形成比原藥化合物更穩定的蛋白結合物，故常利用代謝物的檢測來反應硝基呋喃類藥物的殘留狀況。此類蛋白結合物可以在弱酸性條件下水解，從蛋白質中釋放出來被人體吸收，進而對人體造成危害［3］。
2水產品快速檢測技術研究的意義
硝基呋喃類代謝物常用的檢測方法有色譜分析法和免疫分析法。色譜分析法包括高效液相色譜法和液—質聯用法，具有靈敏度高、重復性和準確性好等優點，但是前處理過程相對復雜，時間較長，對人員要求較高，而且儀器設備價格高昂，普及難度大，存在滯后性，不適合日常監管。免疫分析法包括酶聯免疫法和膠體金免疫層析法，操作相對簡單，而且用時較短，技術便于掌握，缺點是容易出現假陽性，適用于大批量樣品的初篩工作。目前，我國水產行業規模較大，分布零散，難于集中管理，水產品中的硝基呋喃類代謝物等藥物殘留并不能通過肉眼直接辨別出來，如果能在現場進行快速檢測，初篩出疑似樣品，然后將疑似樣品通過色譜技術進一步驗證，可以縮短檢測周期，提高工作效率，促進政府部門對水產品行業及時有效的監管。
3水產品硝基呋喃代謝物快速檢測技術原理
3．1酶聯免疫法酶聯免疫法（ELISA）是一種將抗原抗體免疫反應的特異性和酶的高效催化作用有機結合的一種應用技術，可進行定性和定量檢測。ELISA可快速檢測水產品中AOZ和AMOZ［4］，在相關研究報道中，由于硝基呋喃代謝物分子量較小、免疫原性較低，已報道的硝基呋喃代謝物的實際樣品檢測大多基于衍生檢測方法。
3．2膠體金免疫層析法目前最常用于快速檢測4種硝基呋喃類代謝物（AOZ，AMOZ，SEM，AHD）的技術是膠體金免疫層析法，國內已有多家生物技術公司研制生產膠體金試紙條快速檢測試劑盒產品［5］。其靈敏度高，操作簡便，檢測快速，缺點是不能實現在線檢測和多殘留同時檢測，且會存在假陽性和假陰性。膠體金免疫層析法是膠體金標記技術和免疫層析技術結合的應用形式，以膠體金作為示蹤物，應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。若待測樣品中含有硝基呋喃代謝物（抗原物質），則與金標抗體相結合，阻止金標抗體與纖維素膜上的偶聯物結合，使T線顯色較弱，甚至不顯色，結果為陽性；若待測樣品中沒硝基呋喃代謝物（抗原物質），則不能阻止金標抗體與纖維素膜上的偶聯物結合，從而T線顯色較強，呈紅色，結果為陰性。
4快速檢測技術展望
隨著百姓餐桌日益豐富，食品安全問題已經成為重中之重。快速檢測技術具有用時短、耗材少、易掌握等優點，將其應用于市場監管必然會成為今后的發展趨勢。據報道，快速檢測技術在上海已經開始實施應用，并成立了首個食品快速檢測站，對消費者免費開發，對快速檢測中發現的不合格樣品，將進行追蹤溯源和抽樣復檢。劉歡等人對市場現有的3種硝基呋喃類代謝物快速檢測產品進行試驗，其中一種產品對AOZ，AMOZ，SEM，AHD檢出率為100％，且兩個不同批次產品的檢測結果一致；另外兩種產品存在假陽性，且不同批號間產品的穩定性有差異。因此，用快速檢測技術檢測水產品中硝基呋喃類代謝物時，有必要對其最低檢出限、假陽／陰性率、穩定性等參數進行驗證，確保產品符合標準后，方能用于批量樣品檢測工作，以便更好地服務于日常監管工作。
參考文獻
［1］戴欣，李改娟．水產品中硝基呋喃類藥物殘留的危害、影響以及控制措施［J］．吉林水利，2011（9）：61－62．
［2］蘇榮茂．硝基呋喃類藥物殘留的危害及管理對策［J］．福建農業，2006（12）：24．
［3］劉歡，邢麗紅，宋懌，等．水產品中硝基呋喃類代謝物殘留快速檢測產品質量分析和評價［J］．中國漁業質量與標準，2013，3（2）：73－79．
［4］王習達，陳輝，左健中，等．水產品中硝基呋喃類藥物殘留的檢測與制空［J］．現代農業科技，2007（18）：152－155．
［5］劉歡，李晉成，吳立東，等．現場快速檢測在水產品藥物殘留監管中的應用及發展建議［J］．食品安全質量檢測學報，2014，5（8）：2302－2307．
作者:張瑩瑩 單位:沈陽市農業監測總站