酶聯(lián)免疫吸附試驗實驗教學(xué)思考

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【摘要】酶聯(lián)免疫吸附試驗是廣泛應(yīng)用于臨床檢驗診斷的免疫學(xué)檢驗技術(shù)，實驗教學(xué)中采用該技術(shù)檢測“乙肝兩對半”。為適應(yīng)中職生教育人才培養(yǎng)模式的教學(xué)改革，使學(xué)生符合具有“理論知識適度、技術(shù)應(yīng)用能力強”的要求，我們對實驗教學(xué)內(nèi)容和方法進行改革，從適用性角度選題，通過實驗操作考核，采取以考促學(xué)的手段，加強酶聯(lián)免疫吸附試驗的訓(xùn)練力度，提高學(xué)生實驗操作能力，培養(yǎng)學(xué)生獨立工作的能力。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附試驗；免疫學(xué)檢驗；實驗；考核

酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme－linkedimmunosorbentassay，ELISA)是廣泛應(yīng)用于臨床檢驗診斷的免疫學(xué)檢驗技術(shù)。該技術(shù)集基本理論、基本技能為一體，能使學(xué)生能對前期所學(xué)的理論知識及技能進一步加強和提高，是一個能為學(xué)生進人臨床實習(xí)打好基礎(chǔ)的系統(tǒng)實訓(xùn)。目前該技術(shù)的臨床檢測多采用商品化的ELISA試劑盒，實驗步驟較少，操作簡單。然而，參與反應(yīng)的成分很多，如抗原抗體濃度、酶結(jié)合物濃度以及試劑的質(zhì)量控制等等，影響因素眾多。傳統(tǒng)的實驗教學(xué)中，實驗材料的準備、儀器的準備及調(diào)試、標本及試劑的處理等工作基本上是由教師包辦。實驗的許多環(huán)節(jié)學(xué)生沒有親自做，因而在實驗完成后，部分學(xué)生對實驗還是一知半解，更談不上能力的鍛煉和培養(yǎng)［1］。為適應(yīng)中職生教育人才培養(yǎng)模式的教學(xué)改革，使學(xué)生符合具有“理論知識適度、技術(shù)應(yīng)用能力強”的要求，對免疫學(xué)檢驗實驗教學(xué)內(nèi)容和方法進行改革勢在必行。為此我們通過實驗技能操作考核，采取以考促學(xué)的手段，加強了酶聯(lián)免疫吸附試驗內(nèi)容的訓(xùn)練力度，也收到了一定的效果，以下談?wù)勎覀兊淖龇靶Ч?/p>

1精選考核內(nèi)容，以適應(yīng)臨床實踐的需要

考核內(nèi)容的選擇上以圍繞臨床實際進行選擇，真正使學(xué)生做到學(xué)以致用。不但要讓學(xué)生了解、掌握先進的免疫學(xué)檢驗技術(shù)和操作方法，還必須著重培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)造性思維和綜合分析問題的能力，從而全面提高學(xué)生素質(zhì)［2］。ELISA由于操作簡單、靈敏度高、可定性定量，在臨床檢驗診斷中應(yīng)用最為廣泛。常用于如病毒性肝炎、艾滋病、皰疹等傳染性疾病的檢測診斷，還常用于補體、免疫球蛋白和腫瘤標志物的檢測。要想在有限的課時里完成諸多的內(nèi)容訓(xùn)練，顯然是不現(xiàn)實的。因此我們僅選擇了最具有代表性的“乙肝兩對半”檢測作為該技術(shù)的訓(xùn)練及考核內(nèi)容?！耙腋蝺蓪Π搿惫灿形屙棛z測項目，即HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，實驗中所需要的實驗器材均能由檢驗實驗室提供，易于準備，給學(xué)生提供了選擇和發(fā)揮的空間。實驗過程中所需要的待測血清標本為陽性或陰性標準物，不具傳染性，保證了學(xué)生實驗的安全性。學(xué)生只要掌握了“乙肝兩對半”的檢驗程序和檢驗方法，其他在臨床上需要用ELISA技術(shù)檢測的常見項目則觸類旁通，能起到事半功倍的效果，至于少見的、較為復(fù)雜的檢測項目可以在日后的實習(xí)及工作中繼續(xù)學(xué)習(xí)。

2調(diào)整考核內(nèi)容，可行性及針對性強

酶聯(lián)免疫吸附試驗教學(xué)內(nèi)容在學(xué)時安排上有6課時，理論與實驗課課時之比為1．1。以往的教學(xué)形式為先理論授課，教師講解實驗的原理及檢驗程序，實驗教學(xué)中教師講解后進行示范教學(xué)，學(xué)生照葫蘆畫瓢的再做實驗;實驗操作考核只設(shè)HBsAg項目的考核，考核項目單一、形式單一。學(xué)生只需完成實驗操作，報告結(jié)果即可。而現(xiàn)行的考核內(nèi)容是“乙肝兩對半”的共五項檢測項目，各個項目的檢驗過程如標本的稀釋、試劑選擇、加樣順序有所不一。從限制考核時間的角度考慮，學(xué)生在考核時隨機抽考其中的一個項目，由考生自主選擇所需物品進行實驗操作，這樣增加了考試的隨機性和靈活性。雖然抽考使得考核難度增加，但能強化學(xué)生對ELISA檢測乙肝兩對半操作步驟的理解。當學(xué)生抽到題目后，在熟悉操作步驟的基礎(chǔ)上，只要懂得該項目檢測時需注意的細節(jié)，如檢測HBcAb需將血清稀釋50倍，HBeAb的檢測需加入中和試劑，學(xué)生在對離心機、水浴箱及微量移液器的使用相當熟悉的基礎(chǔ)上，不難將標本中的結(jié)果如實地檢測出來。

3考核的形式

學(xué)生重理論、輕實驗的現(xiàn)象普遍存在，有的學(xué)生每操作一步就看一下筆記，或者是詢問其他同學(xué)，有的學(xué)生甚至希望教師能一步步的教，因而學(xué)生對酶聯(lián)免疫吸附試驗缺乏系統(tǒng)的認知。我們將考核的形式設(shè)計有理論測試(占30分)和操作考核(占70分)。通過調(diào)整考核內(nèi)容，將能力培養(yǎng)貫穿于整個訓(xùn)練過程，將單純理論教學(xué)融合于實驗教學(xué)中，能把理論知識激活，也強化了學(xué)生的實驗操作能力及解決問題、分析問題能力。理論測試采用本教研室的計算機交互平臺進行，根據(jù)教學(xué)內(nèi)容特點，理論測試我們進行這樣的設(shè)計，首先收集乙肝兩對半檢測相關(guān)試題，建立題庫，內(nèi)容涉及實驗原理、操作、材料、結(jié)果觀察及臨床意義。如(1)乙肝兩對半檢測涉及ELISA的哪些原理?分別檢測什么項目?(2)通過各反應(yīng)孔顯色，判斷疫苗接種者、病毒攜帶者、“大三陽”、“小三陽”;(3)手工洗滌有何要求;(4)加終止液的目的是什么;(5)ELISA常用的酶是哪種?其底物是什么。共組10套試題，學(xué)生抽簽后通過計算機交互平臺指向性地試題、進行考試?？紤]到學(xué)生對理論考試容易產(chǎn)生畏難情緒，在題型的設(shè)計上，設(shè)有填充題，標示題、連線題及填空題等，內(nèi)容直觀、清晰，學(xué)生“寓考于樂”，在輕松愉快的心理環(huán)境下地完成理論測試。

4考試評分嚴謹，設(shè)計合理

理論考核從試題集中抽取出6道題組卷，每題5分，共30分。操作考核的評分項目包括:專業(yè)素質(zhì)(衣著儀表、考試態(tài)度、紀律)5分;實驗準備(實驗用品、試劑的預(yù)處理、標本處理、標記記錄)5分;實驗步驟(加樣、微量移液器的使用、孵育、洗滌、顯色)35分，結(jié)果觀察10分;操作后清場(試劑、器材歸位、實驗臺面清理)5分，綜合評價(規(guī)定時間完成、實驗后清場、消毒等)10分，共70分。評分標準于考試前告知學(xué)生，給學(xué)生能充分地復(fù)習(xí)和準備，注意操作細節(jié)，提高考試質(zhì)量?？荚嚂r每個學(xué)生獨立完成試驗，教師全程監(jiān)考，及時對出錯環(huán)節(jié)扣分，評出總分。

5效果分析

在酶聯(lián)免疫吸附試驗的實驗教學(xué)中，采用考核方式，取得了以下成效。

5．1利于調(diào)動學(xué)生的主觀能動性，激發(fā)起學(xué)習(xí)的熱情

實驗操作考核綜合反映出學(xué)生的實驗預(yù)習(xí)、實驗過程和實驗態(tài)度等各方面的表現(xiàn)。考核成績占期末總成績的30%，將學(xué)生實驗考核計入課程總成績后，學(xué)生上實驗課的目的性增強，課上都搶著做實驗，從以往實驗缺乏主動性，不預(yù)習(xí)，不復(fù)習(xí)，變?yōu)榉e極思考，認真準備。實驗報告抄襲現(xiàn)象也明顯減少，改變了重理論輕實踐的現(xiàn)象［3］。從學(xué)生提出的問題，如溶血標本可以檢測“乙肝兩對半”嗎?如果用溶血標本檢測，會有什么影響，會影響什么試劑?從這些問題的提出可以看出，學(xué)生懂得對實驗進行思考，也懂得遇到問題主動和老師商量，學(xué)生不斷發(fā)現(xiàn)問題、思考問題、解決問題的能力得到提高。

5．2獨立工作能力的培養(yǎng)

獨立工作能力是一個醫(yī)學(xué)檢驗工作者最基本素質(zhì)，中職生畢業(yè)后就業(yè)單位多是基層醫(yī)院，基層醫(yī)院的檢驗科可能只有1至2名檢驗員，每天的檢驗工作任務(wù)都要獨立完成。因而學(xué)生在就學(xué)期間即應(yīng)注重獨立工作能力培養(yǎng)。在實驗考核過程中，實驗物品的選擇、擺放，實驗結(jié)束后操作臺的清理等，是學(xué)生自己準備和獨立完成。學(xué)生在考核時需考慮到考核時間的限制，因此只有熟悉基本的理論知識、熟練基本操作，才能在規(guī)定時間內(nèi)完成實驗，得出正確的結(jié)果，考試前不做好準備實驗將無法順利完成。

5．3實驗基本技能的訓(xùn)練

由于酶聯(lián)免疫吸附試驗涉及環(huán)節(jié)多，通過考試能綜合考核學(xué)生的基本實驗技術(shù)，如移液管的準確吸樣，血清等倍稀釋的方法;能考察學(xué)生對常用儀器設(shè)備如離心機、恒溫孵育箱、酶標儀、洗板機的操作;在對血清標本進行檢測時，使用過的物品如棉簽、試管、注射器的正確處置，能增強學(xué)生的無菌操作技術(shù)和觀念。

5．4學(xué)生的評價及反饋

此考核方案在2013、2014兩屆學(xué)生進行了實施，通過操作考核，學(xué)生們得到較為系統(tǒng)的訓(xùn)練，對ELISA檢測乙肝兩對半的整個流程有了較為深刻的認識。有必要開展，通過考核能更好地將理論與實踐相結(jié)合，學(xué)生能自如地、成功地檢測出標準物血清標本的正確結(jié)果，同時也很有成就感，增強了對實習(xí)及將來的工作的信心。在對2013級的學(xué)生進行實習(xí)情況跟蹤、訪談中得知，學(xué)生普遍認為，ELISA技術(shù)在臨床免疫檢驗診斷中應(yīng)用廣泛，用此技術(shù)檢測的項目多，工作量較大。由于在操作考核強化了技能，在實習(xí)老師的指導(dǎo)下，能很快地進入角色，增強了工作自信心。對學(xué)生進行實驗考核的同時，也對教師提出了更高要求。教師準備的理論測試問題在內(nèi)容上需與臨床免疫檢驗接軌，使考核更科學(xué)合理化。規(guī)范實驗教學(xué)，嚴謹、規(guī)范示作好示教。學(xué)生操作過程中，巡視督查，及時糾正學(xué)生的錯誤。以考促學(xué)法強化酶聯(lián)免疫吸附試驗的實驗教學(xué)，補充和完善了免疫學(xué)檢驗實驗教學(xué)的內(nèi)容和方法，也希望能以此提高學(xué)生對其他課程學(xué)習(xí)的主動性及激發(fā)起學(xué)習(xí)的熱情。

參考文獻:

［1］鄧念華，沈富兵．臨床免疫學(xué)檢驗實驗教學(xué)及考核改革初探［J］．衛(wèi)生職業(yè)教育，2011，29(22):103～104．

［2］翟繼，李振江．王書偉免疫學(xué)檢驗實驗教學(xué)改革探討［J］．河南職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012，5:704～706．

［3］潘麗紅，吳珍珍．病原生物與免疫學(xué)實驗考核評價體系構(gòu)建與實踐［J］．河北聯(lián)合大學(xué)學(xué)報，2013，15(3):437～438．

作者：秦靜英 單位：南寧市衛(wèi)生學(xué)校