免疫多糖對(duì)幼魚性能的影響
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本文作者：屈亮1 劉立鶴2 譚斌1 齊志華1 王斌1 作者單位：1.安琪酵母股份有限公司 2.武漢工業(yè)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院
草魚是當(dāng)前我國養(yǎng)殖量最大的淡水養(yǎng)殖品種之一，年產(chǎn)量超過400萬t，在草魚的飼養(yǎng)過程中，苗種階段的飼養(yǎng)至關(guān)重要，該階段幼魚處在生長發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，且這時(shí)期水溫逐漸升高，水體中病原微生物復(fù)雜多變，幼魚病害較多（腸炎、出血、爛鰓和白頭白嘴病等），病死率高。為了提高該時(shí)期苗種的成活率，養(yǎng)殖戶通常會(huì)采取一些預(yù)防性措施，比較常規(guī)的措施就是在該時(shí)期的幼魚餌料中適量加入一些抗生素藥物來降低病害的發(fā)生率，然而隨著當(dāng)前抗生素藥物的使用逐漸受到限制，一些免疫增強(qiáng)劑逐漸被人們關(guān)注。免疫增強(qiáng)劑是一個(gè)有著廣闊應(yīng)用前景的新興領(lǐng)域，水產(chǎn)中較常用的免疫增強(qiáng)劑主要有合成化學(xué)劑類、微生物類衍生物、動(dòng)植物提取物、維生素和乳鐵蛋白等，它們的生物相容性好、可降解、不會(huì)造成環(huán)境污染且對(duì)人類安全，并且能顯著提高細(xì)胞吞噬活性和溶菌酶活性，增強(qiáng)機(jī)體清除超氧化陰離子的能力。免疫增強(qiáng)劑主要通過非特異性免疫因子來達(dá)到防病和抗病目的，雖然不產(chǎn)生免疫記憶，但卻能夠在短期內(nèi)顯著提高機(jī)體的抗病能力。酵母免疫多糖就是一種富含β-葡聚糖和1,3-甘露寡糖的天然免疫增強(qiáng)劑，由于其使用方便而日漸受到人們的青睞。文章就酵母免疫多糖在草魚苗種中的應(yīng)用試驗(yàn)來探討酵母免疫多糖對(duì)草魚生長性能及免疫功能的改善，從而為提高苗種階段草魚的成活率提供一種新的思路和理論依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)飼料配方及試驗(yàn)設(shè)計(jì)
基礎(chǔ)飼料1為含4%魚粉的實(shí)用飼料，基礎(chǔ)飼料2不含魚粉，其組成及營養(yǎng)成分含量見表1。飼料原料全部經(jīng)粉碎，過60目篩，微量成分采取逐級(jí)擴(kuò)大法添加，與大宗原料混合均勻后，加工成直徑為1.5mm的顆粒，經(jīng)600℃烘干、破碎和過篩，最終篩選出直徑在0.3~0.45mm的顆粒置于-20℃冰箱備用。根據(jù)不同的酵母免疫多糖添加量，分組進(jìn)行試驗(yàn)，其中2個(gè)對(duì)照組，7個(gè)試驗(yàn)組，共9個(gè)處理，分別為含有4%魚粉試驗(yàn)組的4個(gè)處理（0、0.5、1和2g/kg酵母免疫多糖）和不含4%魚粉的試驗(yàn)組的5個(gè)處理（0、0.5、1、2和5g/kg酵母免疫多糖）。
1.2試驗(yàn)魚的飼養(yǎng)管理
試驗(yàn)共設(shè)9個(gè)處理，每處理組設(shè)4個(gè)平行，相應(yīng)安排36個(gè)水族箱（70cm×35cm×95cm），每個(gè)水族箱容水量為200L，靜水，氧氣頭不間斷增氧，每天換掉1/3的水并及時(shí)加注新水。飼養(yǎng)試驗(yàn)在安琪酵母公司當(dāng)陽試驗(yàn)場進(jìn)行，試驗(yàn)用魚為草魚幼魚，試驗(yàn)魚從魚塘取出時(shí)先經(jīng)藥液浸浴消毒后，暫養(yǎng)在水族箱中，用基礎(chǔ)飼料馴化2周，待魚安定并習(xí)慣后開始試驗(yàn)。每箱放養(yǎng)30尾，試驗(yàn)開始時(shí)幼魚平均體質(zhì)量（4.10±0.10）g，試驗(yàn)魚規(guī)格整齊且健康活潑，隨機(jī)分配到各水族箱中，每天投飼量約占體質(zhì)量的2%，日投喂4次（早上07：00、中午11：00、下午15：00和晚上19：00），每次投餌時(shí)做到少量多次，讓幼魚盡量飽食，幼魚不搶食時(shí)停止投食。每周定期消毒2次，養(yǎng)殖試驗(yàn)期間水溫（27±2）℃，溶解氧>5.0mg/L、NH3-N<0.3mg/L，晝夜持續(xù)供氣，飼養(yǎng)時(shí)間2010年8月20日至10月1日，共40d。
1.3樣品收集和分析
在養(yǎng)殖試驗(yàn)開始前及結(jié)束后，將各處理組的幼魚稱質(zhì)量，統(tǒng)計(jì)各處理組的增質(zhì)量情況，試驗(yàn)期間每天統(tǒng)計(jì)各組魚的采食量。試驗(yàn)結(jié)束后，魚禁食1d后稱質(zhì)量，每個(gè)試驗(yàn)水箱隨機(jī)取出3尾魚用MS-222麻醉后從尾鰭靜脈取血，血樣放置在4℃冰箱中保存約3h，待血清充分析出后，在3000r/min下離心15min，分離出上層血清轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中，用日立HITACHI7600-120全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血液生化指標(biāo)測定。
1.4測定指標(biāo)與方法
試驗(yàn)開始后，每天統(tǒng)計(jì)各試驗(yàn)組幼魚的死亡情況，死魚及時(shí)撈出并測定其體質(zhì)量，并以此來矯正試驗(yàn)結(jié)束時(shí)該試驗(yàn)組的總增質(zhì)量。餌料系數(shù)=總投飼量（g）／（末質(zhì)量-初質(zhì)量）（g）；病死率=試驗(yàn)幼魚死亡數(shù)／試驗(yàn)初魚尾數(shù)×100%
1.5數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)方法
試驗(yàn)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理分析，數(shù)據(jù)先用單因素方差分析進(jìn)行處理，百分?jǐn)?shù)需經(jīng)過平方根反正弦轉(zhuǎn)換，若組間有差異，再用Duncan氏多重比較法檢驗(yàn)不同酵母免疫多糖添加量下草魚幼魚的生長性能、病死率及血液各項(xiàng)指標(biāo)間的差異顯著性，P<0.05為顯著性水平。
2試驗(yàn)結(jié)果分析
2.1草魚幼魚存活率
從表2和表3可見：經(jīng)過40d飼養(yǎng)，在含有魚粉的飼料中添加酵母免疫多糖能減低幼魚的病死率，0.5‰~2‰不同梯度多糖添加對(duì)幼魚的存活率影響不大，且隨著添加量的增加，累計(jì)病死率逐漸降低。而在不含有魚粉的草魚幼魚飼料中添加酵母免疫多糖對(duì)病死率影響較大，對(duì)照組40d試驗(yàn)期間累計(jì)病死率達(dá)到20.83%，是所有處理組中病死率最高的，在不含魚粉的飼料中添加酵母免疫多糖后，與該對(duì)照組相比草魚幼魚的成活率有較大幅度的提升，并隨著添加量的增加各組幼魚病死率有逐漸降低的趨勢，5‰添加組在整個(gè)試驗(yàn)周期未見幼魚死亡。
2.2草魚幼魚生長性能的變化
從表2和表3可見：在含有魚粉或不含魚粉的草魚飼料中不同比例添加酵母免疫多糖能有效降低餌料系數(shù)，其中在含有魚粉的飼料中添加0.5‰酵母免疫多糖降低餌料系數(shù)的比例最大，與魚粉對(duì)照組相比降幅達(dá)12.4%，不同酵母免疫多糖添加量間的餌料系數(shù)沒有表現(xiàn)出顯著差異，0.5‰多糖組表現(xiàn)出最佳的生長性能，幼魚病死率低，增質(zhì)量最明顯。在不含魚粉的飼料中使用酵母免疫多糖也能顯著降低餌料系數(shù)，其中5‰多糖組的生長狀況最佳，整個(gè)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)未出現(xiàn)死亡情況且增質(zhì)量最明顯。魚粉添加組幼魚的生長性能普遍好于未添加魚粉組，從表3可見：酵母免疫多糖的添加極大地改善了無添加魚粉組幼魚的生長性能。
2.3草魚血液生化指標(biāo)的變化
從表4可見：血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性及免疫球蛋白含量，隨著酵母免疫多糖添加量的增加有降低的趨勢，其中2‰多糖組的以上2指標(biāo)顯著低于其他低劑量組（0.5‰多糖組和1‰多糖組）和對(duì)照組1，而0.5‰多糖組、1‰多糖組和對(duì)照組1三者間在這2項(xiàng)指標(biāo)上不存在顯著性差異；血清中免疫球蛋白含量和堿性磷酸酶活性隨著酵母多糖添加量的增加有逐漸增加的趨勢，其中1‰多糖組及2‰多糖組血清中堿性磷酸酶活性顯著高于對(duì)照組1及0.5‰多糖組。從表5可見，2‰多糖組及5‰多糖組血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于對(duì)照組2和酵母免疫多糖低劑量添加組，血清中免疫球蛋白含量及堿性磷酸酶活性有隨酵母免疫多糖添加量的提高而增加的趨勢，特別是多糖添加組血清中堿性磷酸酶活性均顯著高于對(duì)照組2。
3討論
酵母免疫多糖是酵母細(xì)胞壁的重要組成部分，占酵母細(xì)胞壁干質(zhì)量的40%，因提取方式的不同，其組成也有所變化，其主要成分為β-葡聚糖和甘露寡糖。酵母細(xì)胞壁多糖能激發(fā)和增加機(jī)體的免疫力和抗病力，對(duì)細(xì)菌、真菌和病毒引起的水產(chǎn)動(dòng)物疾病及運(yùn)輸、分塘、氣候變化和養(yǎng)殖水環(huán)境變化等引起的應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生非特異性免疫力，從而降低由應(yīng)激導(dǎo)致的疾病發(fā)生率。
3.1酵母免疫多糖對(duì)草魚幼魚病死率及生長性能的影響
通過試驗(yàn)可見，在草魚飼料當(dāng)中適當(dāng)添加酵母細(xì)胞壁多糖確實(shí)能提高草魚幼魚的生長性能，降低幼苗階段的病死率。尤其是對(duì)于沒有添加魚粉的飼料組來說，酵母免疫多糖的添加不僅有效降低成本，而且顯著降低了餌料系數(shù)，促進(jìn)了幼魚的快速生長。酵母免疫多糖能提高草魚苗種的成活率和生產(chǎn)性能，可能主要由于酵母免疫多糖的添加激活了幼魚自身免疫系統(tǒng)，從而提高了幼魚對(duì)周圍應(yīng)激及養(yǎng)殖病害的抵抗能力，一方面減少養(yǎng)殖病害的發(fā)生，另一方面減少了機(jī)體在應(yīng)對(duì)病原菌方面的能量消耗進(jìn)而間接促進(jìn)了生長性能的提高，與李海燕對(duì)豐產(chǎn)鯽的研究結(jié)果相一致。酵母免疫多糖的添加增加了飼料的適口性，進(jìn)而增強(qiáng)了幼魚采食餌料的主動(dòng)性并提高采食量。在日常投飼過程中我們也發(fā)現(xiàn)添加了酵母免疫多糖的餌料明顯具有誘食作用，草魚幼魚表現(xiàn)出集群和搶食等現(xiàn)象，而沒有添加酵母免疫多糖的對(duì)照組幼魚采食不積極。推測主要是因?yàn)樵摻湍该庖叨嗵侵羞€含有未被完全分離的酵母抽提物，而酵母抽提物中含有豐富的氨基酸和核苷酸能顯著改善飼料原料的適口性，促進(jìn)動(dòng)物采食。Brunt等2005年也報(bào)道了用含酵母免疫多糖（2.5‰的添加量）的飼料作為虹鱒幼苗的開口餌料能顯著提高幼苗的攝食量，最終提高幼魚的成活率及體長和體質(zhì)量。
3.2酵母免疫多糖對(duì)草魚幼魚血液生化指標(biāo)的影響
關(guān)于酵母免疫多糖對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫效果的影響，以前已經(jīng)做過一些試驗(yàn)，試驗(yàn)表明：酵母免疫多糖對(duì)提高水產(chǎn)動(dòng)物的免疫能力效果明顯。試驗(yàn)也再次驗(yàn)證了這一結(jié)論，表明在草魚幼魚飼料中添加酵母免疫多糖，對(duì)提高攝食量和增質(zhì)量及降低病死率和料重比有明顯的效果。試驗(yàn)結(jié)果表明：在飼料中添加一定質(zhì)量濃度的酵母免疫多糖，能夠顯著降低病死率和料重比，同時(shí)增加草魚的攝食量，對(duì)草魚的肝功能也有一定改善效果，這與異育銀鯽的研究結(jié)果相一致。血清中酶活性主要來源于肝膽系統(tǒng)，試驗(yàn)顯示，飼料中添加酵母多糖能顯著降低谷丙谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性，預(yù)示著具有保護(hù)肝組織結(jié)構(gòu)完整性和改善肝功能的作用。堿性磷酸酶是一種重要的代謝調(diào)控酶，與DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等的代謝有關(guān)，對(duì)水生動(dòng)物的生長有重要意義，也是溶菌體酶的重要組成部分，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用，試驗(yàn)中與對(duì)照組相比酵母免疫多糖的添加提高了堿性磷酸酶活性，使機(jī)體處于良好的生理狀態(tài)，維持機(jī)體旺盛的代謝功能，草魚幼魚從而表現(xiàn)出良好的生長狀態(tài)，機(jī)體非特異性免疫力也有所提高。
4結(jié)論
酵母免疫多糖具有提高存活率和促生長作用，同時(shí)能減少抗生素類藥物的用量，是控制水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物特別是甲殼類動(dòng)物傳染性病害的有效途徑，有利于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。是一種安全、可靠且能廣泛應(yīng)用的免疫增強(qiáng)劑，一般來說在疾病預(yù)防期或萌發(fā)期使用最為有效，隨著研究的深入和認(rèn)識(shí)的加深，它必將成為控制水產(chǎn)動(dòng)物疾病的有效工具。
