雞禽白血病與雞白痢凈化檢測的關系

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禽白血病(avianleukosis，AL)是由反轉錄病毒科的禽白血病病毒(avianleukosisvirus，ALV)引起的禽類腫瘤性疾病之一。近年來，AL在我國的地方品系的雞群中廣泛流行［1］，發病率呈逐漸上升趨勢，給養雞場帶來了巨大的經濟損失;雞白痢(plorumdiseasePD)是由雞白痢沙門菌所引起的一種常見的傳染病［2］，是嚴重危害我國養雞業發展的傳染病［3－4］。研究表明，母雞感染了雞白痢沙門氏菌后，會嚴重影響種蛋的孵化率及雛雞的成活率［5］，對此病的防治應引起高度重視。禽白血病和雞白痢都具有水平傳播及經蛋垂直傳播的特點，迄今為止，尚無有效疫苗及藥物可用于防治，只有通過種群凈化，淘汰陽性雞，才能有效地控制這兩種疾病的傳播。作為全國地方雞品種資源最為豐富的省份之一，近年來廣西部分養殖公司近年來已陸續開展禽白血病和雞白痢疾病凈化工作。本實驗主要通過對廣西兩家養殖公司雞正處在凈化初始階段的3個地方優質雞進行“兩白”(禽白血病和雞白痢)檢測結果比較，找出在這兩種疾病在凈化中二者的相關性。

1材料與方法

1．1材料

1．1．1主要儀器酶標儀(ThermoScientific，型號:Mti-skanFC);洗板機(Thermo，型號:ScientificWellwash);生物潔凈安全柜(上海，型號:BHC－1300IIA/B3);－80℃超低溫冰箱(型號:DW-HL340);CO2培養箱(Panasonic，型號:WCO－18AC);倒置顯微鏡(上海巴托，型號:XSP－17C)。

1．1．2主要試劑雞白痢－雞傷寒多價染色抗原，購自北京中海動物保健科技公司;禽白血病P27抗原檢測試劑盒，購自美國IDEXX公司;胎牛血清、DMEM培養基，購自GIBCO公司;DF－1細胞由本實驗室保存。

1．1．3樣品本實驗所需的樣品，血清、蛋清和血漿，均采集自進行凈化中的母雞，血清用于雞白痢－雞傷寒多價凝集抗原進行的平板凝集試驗，蛋清用于ALV-P27抗原d的ELISA檢測，血漿則用于接種DF－1細胞進行的病毒分離以及隨后的ALV-P27抗原的ELISA檢測。

1．2方法

1．2．1技術線路對廣西兩家養殖公司地方優質雞黃雞、麻雞及瑤雞開產或留種前首先進行雞白痢的檢測，挑選出檢測結果陽性的雞集中隔離飼養，對雞白痢陰性雞及部分陽性雞分別集其蛋清及采集其血漿進行ALV的分離培養及其P27抗原的檢測，然后分析對比相關的檢測結果。見圖1。

1．2．2血清樣品的雞白痢檢測地方優質雞黃雞開產前(24W)，麻雞、瑤雞留種前(40W)采血(未加抗凝劑)，無菌分離血清，其中黃雞6068份、麻雞2871份、瑤雞345份，將樣品血清應用雞白痢－雞傷寒多價染色抗原進行雞白痢平板凝集試驗，操作步驟:試驗前保持操作環境在20℃～25℃室溫狀態;將抗原回溫后搖勻，吸取25μL抗原滴于潔凈玻片上，再取25μL待檢血清置于抗原滴上，輕輕與抗原混勻并慢慢涂散開成直徑約2cm的薄層，輕輕晃動玻片，2min內觀察結果并做好記錄。每次試驗都要設陽性、陰性血清對照。試驗結果判定:必須同時符合在陽性對照血清液體出現100%凝集以及陰性對照血清液體完全無凝集現象的前提下，判定結果為有效;2min內出現明顯顆粒狀或塊狀凝集現象，判為陽性，在2min內不出現凝集，或出現均勻一致的極微小顆粒，或在液體邊緣處由于臨干前顯絮狀等現象，均判為陰性，有別于上述反應，不易判為陰性或陽性反應的，可判為可疑反應。

1．2．3樣品的禽白血病檢測(1)蛋清樣品P27抗原ELISA檢測。將雞白痢檢測結果為陰性和陽性的雞群隔離飼養后，分別對黃雞、麻雞雞白痢陰性雞及部分雞白痢陽性雞集蛋，無菌采集蛋清，反復凍融3次后，使用IDEXX公司禽白血病病毒抗原檢測試劑盒(AvianLeukosisVirusAntigenTestKit)對蛋清進行P27抗原ELISA檢測，操作步驟參照試劑盒說明書。結果判斷:陽性對照A(650)平均值－陰性對照A(650)平均值＞0.2，陰性對照A(650)平均值≦0.15，則實驗有效;樣品S/P＞0.2，為陽性;樣品S/P≦0.2，為陰性。(2)血漿樣品病毒分離及其檢測。將瑤雞雞白痢檢測結果為陰性和陽性的雞群隔離飼養后用一次性抗凝管(含有抗凝劑)及采集針采血，無菌分離血漿，將血漿接種到已長有70%～80%單層DF－1細胞的48孔細胞板中培養，每孔120，同時設兩孔DMEM培養液對照，放37℃5%CO2細胞培養箱中浸染，2個小時后吸棄次細胞板內的血漿，更換250含1%FBS的DMEM培養基繼續培養，9天后收集細胞及細胞培養液，反復凍融3次后用IDEXX公司禽白血病病毒抗原檢測試劑盒進行P27抗原ELISA檢測。操作方法及結果判定同(1)。

2實驗結果

2．1樣品雞白痢的檢測結果

廣西地方優質雞黃雞，開產前(24W)采集血清進行雞白痢檢測，廣西地方品種麻雞、瑤雞留種前(40W)采集血清進行雞白痢檢測。檢測結果見表1，黃雞、麻雞、瑤雞雞白痢陽性率分別為48.17%、18.88%、37.10%，雞白痢感染較嚴重。

2．2雞白痢陰性雞與陽性雞的禽白血病檢測結果

將雞白痢檢測結果為陰性和陽性的雞群隔離飼養后進行禽白血病檢測，檢測結果見表2。黃雞雞白痢陰性雞3150只，檢出禽白血病陽性562份，陽性率17.84%，雞白痢陽性雞100羽，檢出禽白血病陽性26只，陽性率26.00%;麻雞雞白痢陰性雞2256只，檢出禽白血病陽性17只，陽性率0.38%，雞白痢陽性雞100只，檢出禽白血病陽性1份，陽性率1.00%;瑤雞雞白痢陰性雞217只，檢出禽白血病陽性19只，陽性率8.76%，雞白痢陽性雞128只，檢出禽白血病陽性15只，陽性率11.72%。如圖2，黃雞、麻雞、瑤雞雞白痢陽性雞的禽白血病陽性率均高于雞白痢陰性的雞。

3小結與討論

禽白血病和雞白痢在我國地方品種雞中感染已相當普遍［6－8］，必須引起高度的重視。我國農業部已將禽白血病和雞白痢陽性感染率作為一項硬性指標正式列入種雞健康標準中。有研究表明，種雞場開展禽白血病和雞白痢的凈化可顯著提高雞群的產蛋率、降低死淘率和料蛋比，從而提高養雞經濟效益，對促進養雞業的健康和發展，做好地方品種雞的保種和選育工作具有一定的實際意義［9－10］。本研究發現，廣西兩家養殖公司地方優質雞黃雞、麻雞、瑤雞凈化雞群開產前或留種前雞白痢陽性率分別為48.17%、18.88%、37.10%，可見，雞白痢感染都比較嚴重，這3個地方優質雞正處于雞白痢凈化初始階段，堅信通過嚴格的實驗檢測，及堅持做好生物安全措施，經過幾個世代的凈化后一定能降低陽性率。將雞白痢檢測結果為陰性和陽性的雞群隔離飼養后進行禽白血病檢測，黃雞、麻雞、瑤雞雞白痢陰性雞禽白血病陽性率分別為17.84%、0.38%、8.76%，雞白痢陽性雞禽白血病陽性率分別為26.00%、1.00%、11.72%。顯而易見，3個地方優質雞雞白痢陽性雞群中禽白血病陽性率都高于雞白痢陰性雞，說明雞白痢陽性的雞感染禽白血病病毒要比雞白痢陰性的雞要高，其中特別是黃雞的差異最明顯。目前平板凝集試驗作為檢測雞白痢最常用的方法，具有操作簡單，反應速度快，陽性檢出率高，也不影響種雞的按時開產等優點［11］。種雞進行雞白痢檢測首次普檢時間一般為17W～20W，此段時間種雞處在性成熟階段，而且也是禽白血病排毒高峰期。從檢測結果數據看，在檢測禽白血病前進行雞白痢檢測，在淘汰雞白痢陽性雞的同時也將一部分的禽白血病陽性雞淘汰了。因為禽白血病的檢測成本遠遠大于雞白痢檢測成本，這將在一定程度上來說也降低了檢測成本，即開產及留種前，在禽白血病檢測前先進行雞白痢檢測淘汰陽性雞的方法是非常有價值的。

參考文獻

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［2］韋平，崔治中．地方品種雞禽白血病和雞白痢的危害及凈化防控的實踐［J］．中國家禽，2015，37(9):1－4．

［3］張璞，任芳．雞白痢的流行特點及防治措施［J］．畜牧與飼料科學，2011，32(11):120．

［4］張賀楠，周寶貴，張妹，等．蛋種雞場雞白痢的凈化及其綜合防控措施［J］．中國家禽，2011，33(15):53－58．

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［11］徐家芳．三種雞白痢－雞傷寒多價染色抗原的比較和雞場沙門氏菌的分離與鑒定［D］．廣西大學，2013．

作者：陸喬娥 高延利 石夢雅 李敏 李秋紅 鄧喬木 韋平 單位：廣西大學養禽與禽病學研究所