免疫組化技術(shù)精選(九篇)

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第1篇：免疫組化技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：快速免疫組化技術(shù)；乳腺腫瘤；細(xì)胞學(xué)；應(yīng)用分析；診斷

【中圖分類(lèi)號(hào)】R466.8【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1674-7526（2012）06-0059-02

細(xì)胞學(xué)診斷：細(xì)胞學(xué)診斷是乳腺腫瘤病理診斷中的重要組成部分。細(xì)胞學(xué)診斷的特點(diǎn)是將成塊組織或者是非成塊的組織以及液體標(biāo)本制成涂片，并將所得到的在光鏡下觀察。免疫組化技術(shù)：免疫組織化學(xué)又被叫做免疫細(xì)胞化學(xué)。英文名稱(chēng)為Immunohistochemistry。另外這種免疫組織化學(xué)它是組織化學(xué)的一個(gè)分支。這種技術(shù)一般采用標(biāo)記特異性抗體或者抗原的方法來(lái)對(duì)組織內(nèi)抗原或者抗體的分布，從而來(lái)進(jìn)行組織和細(xì)胞原位的檢測(cè)一項(xiàng)技術(shù)。不過(guò)免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry）這種技術(shù)所花的實(shí)驗(yàn)的時(shí)間比較的長(zhǎng)，一般需要4到20個(gè)小時(shí)，因此這種技術(shù)目前已經(jīng)難以滿(mǎn)足快速的診斷的需求。而采用快速免疫組化技術(shù)來(lái)診斷乳腺腫瘤細(xì)胞顯得尤為重要。對(duì)此我院做出以下研究，研究選取我院在2009年1月至2011年1月收治的乳腺腫瘤患者80例，將這些患者作為研究對(duì)象。（所有患者都自愿接受調(diào)查并服從所有準(zhǔn)則）將其隨機(jī)分為兩組，觀察組和對(duì)照組。觀察組的患者為40例，觀察組采用快速免疫組化技術(shù)來(lái)診斷乳腺腫瘤細(xì)胞學(xué)。對(duì)照組的患者也為40例，對(duì)照組采用常規(guī)免疫組化技術(shù)來(lái)診斷乳腺腫瘤細(xì)胞學(xué)。將兩種效果進(jìn)行分析和比較，并將這些資料進(jìn)行回顧性分析研究?，F(xiàn)將研究成果報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料：選取我院在2009年1月至2011年1月收治的乳腺腫瘤患者80例，將這些患者作為研究對(duì)象。（所有患者都自愿接受調(diào)查并服從所有準(zhǔn)則）將其隨機(jī)分為兩組，觀察組和對(duì)照組。觀察組的患者為40例，觀察組采用快速免疫組化技術(shù)來(lái)診斷乳腺腫瘤細(xì)胞學(xué)。乳腺腫瘤患者的年齡在35～65歲之間，平均年齡為48.2±8.6歲?；颊叩牟↓g為1.5～4年之間，平均病齡為0.7±1.2年。對(duì)照組的患者也為40例，對(duì)照組采用常規(guī)免疫組化技術(shù)來(lái)診斷乳腺腫瘤細(xì)胞學(xué)。乳腺腫瘤患者年齡在35～65歲之間，平均年齡為34.2±9.6歲，患者的病齡為1.5～8年之間，平均病齡為2.5±1.2年。研究中的所有患者均為女性。

1.2快速免疫組化技術(shù)的儀器的選擇：在研究中所有的一抗和相應(yīng)的配套試劑都是向福州邁新生物技術(shù)有限公司購(gòu)買(mǎi)的。另外陽(yáng)性對(duì)照片也是該公司提供的。

1.3快速免疫組化技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞學(xué)圖片的方法：1將脫蠟切片并放到水中，并使用PAS 沖洗，沖洗次數(shù)為2到3次，每次為15分鐘。 2.在封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶中使用新配置的濃度為0.3%的 H2O2[1]，放在23°的地方，持續(xù)時(shí)間為30 分鐘。 3.降低非特異性著色的使用，并將正常血清稀釋到原來(lái)濃度的1/20，將稀釋后的血清放在溫度為23°的地方，持續(xù)時(shí)間為30分鐘。 4 增加聚合物增強(qiáng)劑，將其放在溫度為37°的地方，持續(xù)時(shí)間為5分鐘。并使用PBS 沖洗，沖洗次數(shù)為2到3次，每次為15分鐘。5 增加酶標(biāo)抗鼠聚合物，將其放在溫度為37°的地方，持續(xù)時(shí)間為5分鐘。并使用PBS 沖洗，沖洗次數(shù)為2到3次，每次為15分鐘。6使用DAB顯示劑，將其放在溫度為37°的地方進(jìn)行染色，持續(xù)時(shí)間為1分鐘。并使用新配置的濃度為0.3%的 H2O2來(lái)沖洗，沖洗次數(shù)為2到3次，每次為5分鐘。7使用Mayer 蘇木精復(fù)染胞核15分鐘，并將其放在溫度為45°的水中，等到顏色變?yōu)樗{(lán)色即可。

第2篇：免疫組化技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤；臨床病理；免疫組化

中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤（central neurocytoma，CNC）在1982年由Hassoun首次報(bào)道和命名，被認(rèn)為是起源于腦室內(nèi)的良性神經(jīng)元腫瘤[1]。CNC是好發(fā)于年輕人腦室內(nèi)的良性腫瘤，較少發(fā)生于腦室外。2007年新版WHO神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)將發(fā)生于腦室內(nèi)外的CNC定義為WHOⅡ級(jí)，生物學(xué)行為屬于低度惡性。本文回顧性分析24例CNC患者的臨床資料、病理組織形態(tài)學(xué)和免疫組化染色結(jié)果，以提高對(duì)該腫瘤的認(rèn)識(shí)，減少漏診和誤診。

1臨床資料

收集武漢同濟(jì)醫(yī)院病理科2012年～2014年間診斷為中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤的標(biāo)本25例。所以標(biāo)本均經(jīng)過(guò)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，3切片，HE染色，免疫組化采用EnVision法，一抗包括Syn、GFAP、NF、CgA、nestin、NeuN、Oligo-2、Ki-67，所以抗體均購(gòu)自北京中杉金橋公司。染色操作步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，DAB顯色，每次均設(shè)有陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

2結(jié)果

2.1一般資料 24例患者中男性14例，女性10例，年齡從14～47歲，平均年齡為31歲。全部病例均進(jìn)行了CT和MRI檢查，腫瘤境界清楚，3例出現(xiàn)鈣化灶，其中23例位于腦室，1例位于腦室外。腫瘤最大6.5×6×6，最小3.5×2×2。臨床癥狀主要有頭痛、惡心、嘔吐等顱內(nèi)壓增高癥狀，3例出現(xiàn)記憶力下降，1例出現(xiàn)視力障礙，病程1個(gè)月～3年。其中6例患者隨訪至今無(wú)復(fù)發(fā)。

2.2組織學(xué)形態(tài) CNC的組織學(xué)結(jié)構(gòu)典型且相對(duì)一致，腫瘤由一致的細(xì)胞成分構(gòu)成，腫瘤細(xì)胞與少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤相似，呈一致的圓形或橢圓形，胞漿少，可出現(xiàn)核周空暈[見(jiàn)圖1]，細(xì)胞核圓形或稍有分葉，染色質(zhì)細(xì)斑狀。瘤細(xì)胞呈片狀或巢狀排列，有些區(qū)域細(xì)胞排列呈線狀或圍繞血管呈漩渦狀。CNC的特征性結(jié)構(gòu)是致密纖維性基質(zhì)形成的無(wú)核島[見(jiàn)圖2]。腫瘤由纖細(xì)的血管間質(zhì)分隔，無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞增生。24例均無(wú)明顯壞死出現(xiàn)。

2.3 免疫組化 24例CNC均表達(dá)Syn[圖3]，20例NeuN陽(yáng)性[見(jiàn)圖4]，見(jiàn)表1。netin5例陽(yáng)性，GFAP4例間質(zhì)反應(yīng)性增生的星形細(xì)胞陽(yáng)性，NF、CgA和Oligo-2陰性。

3討論

中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤是腦室內(nèi)的神經(jīng)元腫瘤，比較罕見(jiàn)，發(fā)病率占所有原發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的0.25～0.5%[2]。CNC好發(fā)于側(cè)腦室，典型者位于Monro孔區(qū)域，很少發(fā)生于第Ⅳ腦室，多見(jiàn)于年輕人，無(wú)明顯的性別差異[3]。發(fā)生于腦室外的CNC很少見(jiàn)，近幾年國(guó)內(nèi)外可見(jiàn)相關(guān)的病例報(bào)道[4，5]。腦室外的CNC與腦室內(nèi)的CNC形態(tài)相似，但是前者更復(fù)雜，且會(huì)有變異。CNC臨床上一般無(wú)明顯的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，當(dāng)瘤體較大阻礙Monro孔、第Ⅲ腦室或中腦導(dǎo)水管引起腦積水，出現(xiàn)頭痛、嘔吐等顱內(nèi)壓增高的癥狀。本組資料22例位于側(cè)腦室，1例位于第Ⅳ腦室，1例位于腦室外。年齡14～47歲，平均年齡31歲，男性稍多于女性，無(wú)明顯性別差異。送檢的腫瘤組織多呈灰白色，部分可見(jiàn)出血。

中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤是分化好的良性腫瘤，鏡下可見(jiàn)腫瘤由小至中等大的一致性小圓形或卵圓形瘤細(xì)胞組成，核圓形或卵圓形，染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀或點(diǎn)彩狀，偶見(jiàn)核仁，核分裂罕見(jiàn)。胞漿少，可見(jiàn)核周空暈，呈蜂窩狀，形態(tài)與少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤相似。瘤細(xì)胞呈片狀或巢狀排列，瘤細(xì)胞間可見(jiàn)致密纖維性基質(zhì)形成的無(wú)核島區(qū)，即神經(jīng)氈樣結(jié)構(gòu)。間質(zhì)血管有纖細(xì)的分枝狀薄壁血管，部分病例血管壁有玻璃樣變，但血管內(nèi)皮沒(méi)有增生。可伴有出血囊性變及鈣化，缺乏壞死。本組研究部分病例可見(jiàn)出血囊性變，3例可見(jiàn)鈣化灶，全部病例均未見(jiàn)壞死，1例伴部分膠質(zhì)細(xì)胞分化。

免疫組化Syn是CNC特征性的診斷指標(biāo)，NeuN在CNC也可以彌漫表達(dá)[6，7]。GFAP、NSE及nestin也可陽(yáng)性，但不是特征性的指標(biāo)。本組資料Syn100%陽(yáng)性，NeuN20例陽(yáng)性，nestin5例陽(yáng)性，GFAP4例見(jiàn)大血管周?chē)⒃诘拿?xì)胞樣細(xì)胞和星網(wǎng)狀細(xì)胞陽(yáng)性，可能為間質(zhì)反應(yīng)性增生的星形細(xì)胞。Ki-67呈低增殖活性，表明該腫瘤生物學(xué)行為屬于良性或低度惡性，因有部分復(fù)發(fā)病例的報(bào)道WHO將其定義為Ⅱ級(jí)。

中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤應(yīng)與腦室內(nèi)少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤、室管膜瘤等相鑒別。免疫組化是簡(jiǎn)單有效的鑒別方法，中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤Syn、NeuN陽(yáng)性，NSE也可以陽(yáng)性但是特異性不強(qiáng)，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤Syn陰性，GFAP陽(yáng)性，Oligo-2陽(yáng)性，室管膜瘤GFAP陽(yáng)性，NSE及S100也可陽(yáng)性。通過(guò)本組資料研究，中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤Syn、NeuN高表達(dá)，Oligo-2和GFAP低表達(dá)，可與少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤和室管膜瘤相區(qū)別。但是診斷中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤必須同時(shí)結(jié)合臨床病史、鏡下所見(jiàn)及免疫組化結(jié)果綜合考慮才能做出正確的診斷。

中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤可以出現(xiàn)間變，但是對(duì)預(yù)后的影響仍然不清楚。本組研究有兩例出現(xiàn)間變，Ki-67指數(shù)升高，完整切除后又做了術(shù)后放療，隨訪至今未見(jiàn)復(fù)發(fā)。所以伴有間變的中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤是否具有更高的復(fù)發(fā)率仍不清楚。Rades等提出MIB-1（Ki-67）指數(shù)大于3%則腫瘤局部病變?nèi)菀讖?fù)發(fā)和總體生存期較差。

中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤病程緩慢，治療方案首選手術(shù)完整切除，完整切除后能獲得較好的治療效果。然而對(duì)于不完全或次全切除的病例，術(shù)后可輔以放射治療。本組資料6例其中包括伴有間變的2例隨訪至今未見(jiàn)復(fù)發(fā)，但隨訪時(shí)間較短會(huì)繼續(xù)隨訪下去，復(fù)發(fā)與Ki-67指數(shù)的關(guān)系有待近一步證實(shí)。

參考文獻(xiàn)：

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第3篇：免疫組化技術(shù)范文

【關(guān)鍵詞】 脫鈣條件；骨組織；免疫組織化學(xué)染色；抗原性

【Abstract】 Objective To analyze influence by different decalcification conditions on bone tissue antigenicity in immunohistochemical staining. Methods Decalcification was made through 8% nitric acid under microwave， light wave， light wave + microwave Ⅰ and light wave + microwave Ⅱ in bone tissue. Decalcification under room temperature （20℃） was taken as control group. Labelled streptavidin biotin method （LSAB） immunohistochemical staining was applied to analyze and compare stain effects. Results Decalcification time under microwave， light wave， light wave + microwave Ⅰ and light wave + microwave Ⅱ were all shorter than control group， and their immunohistochemical staining effects were all better than control group （P

【Key words】 Decalcification condition； Bone tissue； Immunohistochemical staining； Antigenicity

目前， 免疫組化染色技術(shù)是臨床病理鑒別及診斷的重要手段， 骨組織由于含有豐富的鈣鹽， 因此其免疫組織化學(xué)染色自然與常規(guī)石蠟切片有所區(qū)別， 通常需要先去除鈣鹽后才可制成比較薄的切片， 然后再進(jìn)行常規(guī)脫水、透明處理等操作[1]。本研究旨在分析探討不同脫鈣條件對(duì)骨組織免疫組化染色抗原性的影響， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 選取2012年4月～2015年8月骨外科送檢的人骨組織， 脫鈣液為硝酸10 ml+蒸餾水190 ml制成的硝酸液。Panasonic NN-DF382M光波/微波爐1臺(tái)， 微波額定輸入功率為1400 W， 光波額定輸入功率為1050 W， 微波額定輸出功率為900 W， 額定輸出頻率為2450 MHz， 輸出功能共分為微波、光波及光波+微波組合Ⅰ、光波+微波組合Ⅱ。微波輸出功率為5個(gè)調(diào)節(jié)檔， 光波輸出功率為單一光波管發(fā)光， 光波+微波組合Ⅰ為微波輸出時(shí)間的30%+光波輸出時(shí)間的70%， 光波+微波組合Ⅱ?yàn)槲⒉ㄝ敵鰰r(shí)間的55%+光波輸出時(shí)間的45%。

1. 2 方法 將1.0 cm×0.5 cm×0.3 cm的骨組織分別用8%硝酸分別于微波、光波及光波+微波組合Ⅰ、光波+微波組合Ⅱ的條件下進(jìn)行脫鈣。將脫鈣后的骨組織常規(guī)制成切片， 經(jīng)復(fù)合酶消化石蠟切片后， 運(yùn)用LSAB免疫組化進(jìn)行免疫酶細(xì)胞化學(xué)染色。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P

2 結(jié)果

微波、光波、光波+微波組合Ⅰ及光波+微波組合Ⅱ的脫鈣時(shí)間顯著低于對(duì)照組， 且免疫組化染色效果顯著優(yōu)于對(duì)照組（P

3 討論

骨組織含有大量的鈣， 質(zhì)地堅(jiān)硬， 一般不可直接進(jìn)行制片染色， 需要經(jīng)過(guò)脫鈣處理的特殊工序。對(duì)病理活檢蘇木精-伊紅染色（HE染色）的效果不會(huì)構(gòu)成比較大的影響， 但是在很大程度上會(huì)影響到免疫組化染色抗原性[2]。近些年， 微波輻射技術(shù)逐步深入應(yīng)用到骨組織脫鈣、免疫組化染色、抗原修復(fù)等， 且效果突出， 特別是EDTA快速脫鈣、微波-低溫硝酸等技術(shù)對(duì)最大化地保留脫鈣組織的抗原性做出了重要的貢獻(xiàn)[3， 4]， 而光波+微波脫鈣到底對(duì)免疫組化染色抗原性的實(shí)際影響在文獻(xiàn)報(bào)道中鮮見(jiàn)。

本組研究中光波-微波組合Ⅱ脫鈣時(shí)間在集中脫鈣方法中是最短的， 而室溫下的骨組織與切片呈現(xiàn)出淡黃色， 脫鈣時(shí)間最長(zhǎng)。就免疫組化染色效果來(lái)說(shuō)， 室溫條件下的脫鈣組織最差， 微波、光波條件下的脫鈣組織相對(duì)較好， 光波+微波組合Ⅰ、光波+微波組合Ⅱ條件下的脫鈣組織最好， 主要是因?yàn)槲⒉ㄅc光波的雙重作用促使了骨組織的鈣鹽的反應(yīng)速度進(jìn)一步加快， 使得過(guò)去的常規(guī)脫鈣方法少至數(shù)小時(shí)多則幾天的反應(yīng)時(shí)間大大縮短以致在短時(shí)間內(nèi)便可完成， 因而最大化地保留了抗原性， 提高了免疫組化染色的效果。

在光波+微波-硝酸脫鈣的應(yīng)用過(guò)程中應(yīng)注意如下幾方面：①微波與光波的雙重作用會(huì)使得脫鈣液溫度在短時(shí)間內(nèi)迅速升高， 因此結(jié)合預(yù)冷降溫措施可很好地減輕溫度對(duì)抗原性的影響[5]。②不宜使用金屬容器盛裝脫鈣液， 且要保證充足的脫鈣液量， 通常情況上要達(dá)到標(biāo)本的20～30倍左右， 并要更換1～2次新液。③骨組織厚薄適宜， 5 mm左右為最宜， 以防脫鈣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而損及組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、影響染色效果。

綜上所述， 8%硝酸光波+微波組合脫鈣時(shí)間要明顯短于微波、光波及室溫脫鈣， 且具有良好的免疫組化染色效果。

參考文獻(xiàn)

[1]楊傳紅， 賴(lài)晃文， 唐云， 等.微波快速脫鈣及其脫鈣液的選擇. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志， 2010， 12（4）：357-358.

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第4篇：免疫組化技術(shù)范文

[關(guān)鍵詞] 肺癌；體腔積液；薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查；抗原修復(fù)；退色；免疫組化

[中圖分類(lèi)號(hào)] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2013）10（a）-0017-03

薄層液基細(xì)胞技術(shù)（thin-layer cytology test，TCT）是20世紀(jì)90年代興起的一項(xiàng)新技術(shù)，最早應(yīng)用于婦科宮頸細(xì)胞學(xué)檢查，并獲得了良好的效果[1]。隨后人們不斷將此項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用到非婦科細(xì)胞學(xué)檢查[2-4]，并與傳統(tǒng)脫落細(xì)胞學(xué)涂片比較，具有薄層、背景清晰、面積小、血液成分少、利于顯微鏡觀察等優(yōu)點(diǎn)，但在癌性體腔積液TCT檢查中存在癌細(xì)胞比較散在或細(xì)胞團(tuán)不如傳統(tǒng)涂片立體感強(qiáng)等不足。經(jīng)蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色癌細(xì)胞與間皮細(xì)胞的鑒別有時(shí)很困難，對(duì)癌細(xì)胞來(lái)源及分類(lèi)更一籌莫展。體腔積液多數(shù)混有間皮細(xì)胞，常常需要免疫組化（immunohistochemistry，IHC）染色與癌細(xì)胞加于鑒別，并對(duì)癌細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)。IHC染色如果不先經(jīng)HE染色，則不清楚TCT涂片中是否存在癌細(xì)胞或可疑癌細(xì)胞（目標(biāo)細(xì)胞）或者TCT涂片是否合格，如果經(jīng)HE染色而采取不同退色方法，會(huì)造成不同結(jié)果。有報(bào)道使用鹽酸、高錳酸鉀及草酸等對(duì)傳統(tǒng)涂片和組織切片HE染色進(jìn)行退色[5-6]。筆者曾在組織切片上采用抗原熱修復(fù)方法退色，效果較好[7]。胸水TCT涂片IHC染色，由于每張TCT涂片中的細(xì)胞排列是隨機(jī)的，常規(guī)IHC染色針對(duì)性較差，往往造成診斷困難，為了準(zhǔn)確鑒別間皮細(xì)胞與癌細(xì)胞以及對(duì)癌細(xì)胞進(jìn)行詳細(xì)分類(lèi)從而達(dá)到確診目的，本小組采用雙重免疫組化（double immunohistochemistry，DIHC）染色，即在一張TCT涂片上，同時(shí)顯示兩種抗原成分[8]，來(lái)彌補(bǔ)一些抗體敏感性雖高而特異性低的不足，收到良好效果，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 材料

收集2009年3月～2012年3月秦皇島市第二醫(yī)院病理科肺癌伴胸水轉(zhuǎn)移送檢病例68例，年齡45～70歲，中位年齡63歲，64排CT均顯示肺內(nèi)占位病變，伴縱隔淋巴結(jié)腫大及胸腔積液。其中9例有鎖骨上窩淋巴結(jié)腫大、質(zhì)硬。經(jīng)氣管鏡、穿刺活檢或切取鎖骨上腫大淋巴結(jié)等手段，獲取組織學(xué)標(biāo)本，并及時(shí)經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟切片，經(jīng)HE染色和IHC染色確定診斷為：鱗狀細(xì)胞癌13例，腺癌40例，腺鱗癌6例，神經(jīng)內(nèi)分泌癌9例；同時(shí)獲取新鮮胸水每例500 mL，采用TCT制片。TCT制片設(shè)備為康柏液基細(xì)胞制片機(jī)及配套耗材，由湖南長(zhǎng)沙康柏恩醫(yī)療科技公司提供。免疫組化染色抗體選為：TTF-1，CK7，CK14，CK18，P63，P40，CgA，Syn，CR1（檸檬酸修復(fù)），CR2（EDTA修復(fù)），Vimentin，CEA和MC，常規(guī)IHC染色采用ElivisionTMPlus，DIHC染色采用Dou MaxVision，細(xì)胞通透劑為X-100，所選試劑均購(gòu)于福州邁新公司。

1.2 方法

1.2.1 制片

將每例活檢組織選一蠟塊進(jìn)行切片，厚約4 μm，分別切12張，裱于防脫載玻片上，60℃烤2 h，經(jīng)二甲苯、梯度乙醇脫蠟，入水沖洗干凈。每個(gè)病例抽取新鮮胸腔積液500 mL，立即制片，分取10 mL液體，放入一次性塑料試管，每例取36管，放入低速離心機(jī)，1500 r/min，離心10 min，吸取上清液放入潔凈試管中留作沖洗液，將沉渣逐一轉(zhuǎn)移到TCT保存液當(dāng)中，震蕩1 min，用制片機(jī)制片，肉眼見(jiàn)細(xì)胞層較厚時(shí)，用同例胸水離心上清液稍加沖洗，使細(xì)胞涂層變薄，立即風(fēng)干固定于95%乙醇液中15 min，取出在60℃烤箱烤15 min，每例制36張TCT涂片。

1.2.2 分組及染色

將每例胸腔積液36張TCT涂片隨機(jī)平均分成B、C、D三組，每組12張TCT涂片。

1.2.2.1 A組 為活檢石蠟切片，一抗選擇TTF-1、CK7、CK14、CK18、P63、P40、CgA、Syn、CR1（檸檬酸修復(fù)）、Vimentin、CEA和MC，設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照片，按ElivisionTM Plus操作方法完成免疫組化染色，DAB顯色。

1.2.2.2 B組 先經(jīng)HE染色，顯微鏡下選擇合格涂片：細(xì)胞排列均勻、基本單層、目標(biāo)細(xì)胞核-漿-膜結(jié)構(gòu)清晰。然后去掉蓋玻片，經(jīng)二甲苯脫膠，梯度乙醇（由高濃度至低濃度）脫二甲苯，最后入水清洗。再將B組分成B1、B2組：要求EDTA修復(fù)的為B1組，其余為B2組?，F(xiàn)配EDTA液（pH=9.0）按1∶50配置（一份原液和50份蒸餾水混合）適量，放入潔凈高壓鍋中，去蓋先加熱至沸騰，將B1組TCT涂片放入沸騰的EDTA中，加蓋繼續(xù)加熱至噴氣2 min，自然冷卻；再將配制好的檸檬酸液（pH=6.0±0.1），放入潔凈高壓鍋內(nèi)適量，開(kāi)蓋加熱至沸騰，放入B2組TCT涂片，加蓋繼續(xù)加熱至噴氣1 min，自然冷卻。安全取出抗原修復(fù)的涂片，用PBS沖洗。通過(guò)EDTA和檸檬酸高壓加熱修復(fù)，HE染色TCT涂片徹底退色。DIHC染色前滴加過(guò)氧化物酶阻斷劑，以防止由于抗原修復(fù)導(dǎo)致的內(nèi)源性生物素與抗體產(chǎn)生非特異性結(jié)合。在滴加一抗前，用X-100細(xì)胞通透劑進(jìn)行處理，增加細(xì)胞的通透性，有利于抗原抗體結(jié)合。DIHC染色是采用不同顏色的顯色劑，顯示不同抗原成分，顯色遵循先深后淺，胞膜、胞核著深色，胞質(zhì)著淺色，選擇好抗體搭配。本組一抗搭配：MC-Syn，MC-CgA，MC-P40，MC-CK181，MC-CK7或MC-CK14，CR2-P40，CR1-TTF1，CR1-P63。染色采用DouMaxVision方法，BCIP/NBT/AEC顯色，其步驟按照DIHC染色要求，設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照片。

1.2.2.3 C組 經(jīng)HE染色，顯微鏡選擇合格涂片，去掉蓋玻片，經(jīng)二甲苯脫膠，梯度乙醇（由高濃度至低濃度）脫二甲苯，最后入水清洗。用0.5%鹽酸及草酸溶液常溫退色10 min，入水沖洗。一抗選擇TTF-1、CK7、CK14、CK18、P40、CgA、Syn、CR1、Vimentin、CEA和MC，設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照片，在滴加一抗前，應(yīng)先用X-100細(xì)胞通透劑進(jìn)行處理，按IHC染色ElivisionTMPlus操作方法完成，DAB顯色。

1.2.2.4 D組 不經(jīng)HE染色直接做IHC染色，一抗選擇TTF-1、CK7、CK14、CK18、P40、CgA、Syn、CR、Vimentin、CEA和MC，設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照片，在滴加一抗前，應(yīng)先用X-100細(xì)胞通透劑進(jìn)行處理，按ElivisionTMPlus操作方法染色，DAB顯色。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

免疫組化染色結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：著色部位正確，無(wú)背景著色，著色對(duì)比鮮明，即使有一個(gè)細(xì)胞著色也視為陽(yáng)性。B、C、D三組免疫組化染色結(jié)果與組織病理A組結(jié)果比較，B組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；C組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

近年來(lái)TCT檢查廣泛應(yīng)用于臨床，包括宮頸液基細(xì)胞檢查、體腔腔積液、氣管鏡刷片及灌洗液、腫瘤穿刺液、尿液及腦脊液等。對(duì)腫瘤的診斷、鑒別診斷及腫瘤分類(lèi)起著重要的作用。肺癌伴胸水轉(zhuǎn)移的患者，一般失去手術(shù)機(jī)會(huì)，多采用化療和放療。但首先要明確是否伴胸水轉(zhuǎn)移以及腫瘤的詳細(xì)分類(lèi)。如果能獲得活檢組織病理診斷為最佳，但取活檢受多方面因素影響，往往很困難，只有通過(guò)胸水檢查來(lái)明確診斷和分類(lèi)。前言提到TCT檢查較傳統(tǒng)涂片有其優(yōu)缺點(diǎn)，不論TCT涂片還是傳統(tǒng)涂片，雖經(jīng)HE染色診斷，但常需要借助免疫組化染色才能與間皮細(xì)胞鑒別和明確腫瘤細(xì)胞來(lái)源及分類(lèi)。每張TCT涂片中存在多種形態(tài)各異的細(xì)胞，包括反應(yīng)性增生的間皮細(xì)胞，有時(shí)形似癌細(xì)胞，免疫組化染色時(shí)間皮細(xì)胞不但表達(dá)CR和MC，還可表達(dá)某些角蛋白CK等多種抗原成分。在一張TCT涂片上只用一種抗原如CK（特異性低），不能區(qū)分間皮細(xì)胞和癌細(xì)胞。CR和MC敏感性雖高但特異性不高，文獻(xiàn)報(bào)道二者敏感性可達(dá)100%，Murugan等[9]報(bào)道38例反應(yīng)性間皮細(xì)胞增生病例中CR敏感度為100%，特異度為92.31%。Betta等[10]認(rèn)為CR的敏感性為98%，陳穎等[11]的研究認(rèn)為CR的特異性為69.5%，趙維聰?shù)萚12]報(bào)道CR及MC敏感性為100%，特異性分別為82.1%和17.9%。普遍認(rèn)為CR和MC的敏感性高，而特異性相對(duì)較低且不一致。若一張TCT涂片上的不同細(xì)胞分別表達(dá)不同抗原或一個(gè)細(xì)胞不同部位同時(shí)表達(dá)兩種不同抗原，就可以大大增強(qiáng)抗原表達(dá)的特異性和敏感性，這就是免疫組化雙重染色與常規(guī)免疫組化染色的區(qū)別。郗彥鳳等[8]利用BSAP/CD30標(biāo)記經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤中的R-S細(xì)胞是石蠟切片，林秋霞等[12]用PCNA+NF-160的免疫雙標(biāo)記證明培養(yǎng)細(xì)胞中分裂神經(jīng)元是否為成熟神經(jīng)元是培養(yǎng)細(xì)胞，也有報(bào)道利用原位雜交和免疫組化進(jìn)行細(xì)胞雙標(biāo)記[13-14]，均取得了良好效果。但DIHC染色同時(shí)采用抗原熱修復(fù)退色技術(shù)在TCT中的應(yīng)用未見(jiàn)報(bào)道。通過(guò)對(duì)TCT涂片免疫組化研究，發(fā)現(xiàn)HE染色檸檬酸或EDTA修復(fù)退色做雙重免疫組化染色效果最好、確診率高，而用鹽酸退色常規(guī)免疫組化染色次之，未經(jīng)HE染色的較差。分析其原因，前兩種方法，都使用了HE染色，顯微鏡觀察，選出了合格的TCT涂片，期中B組采用抗原熱修復(fù)方法退掉HE染色，既不損傷抗原成分，又無(wú)染料分子阻礙抗原抗體結(jié)合；C組經(jīng)HE染色后選用鹽酸和草酸退色，抗原成分遭到一定程度破壞[6]，造成部分假陰性，導(dǎo)致確診率下降；D組是未經(jīng)HE染色，顯微鏡下無(wú)法選擇合格涂片，存在不合格涂片，導(dǎo)致確診率降低。通過(guò)對(duì)68例有組織學(xué)對(duì)照的癌性胸水做TCT檢查，旨在探討液基細(xì)胞HE染色聯(lián)合DIHC染色對(duì)癌性胸水進(jìn)行診斷、鑒別診斷及分類(lèi)診斷的價(jià)值，結(jié)果顯示抗原修復(fù)退色聯(lián)合DIHC染色為最佳方法，在體腔積液TCT診斷中起者重要的作用，尤其適用于數(shù)量很有限的TCT涂片，值得借鑒。

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第5篇：免疫組化技術(shù)范文

[關(guān)鍵詞]微波；超聲；牙齒；脫鈣方法；免疫組化

[中圖分類(lèi)號(hào)]R783.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2012）06-0955-03

牙體組織結(jié)構(gòu)較為特殊，其硬組織中含有大量鈣鹽（洛氏硬度值達(dá)340）[1]，是全身最堅(jiān)硬的組織，不易切片極易脫片，因此在病理制片過(guò)程中首先要脫去其中的鈣鹽再進(jìn)行制片，而位于牙體硬組織中心的牙髓為柔軟的結(jié)締組織，在制片過(guò)程中易受擠壓、牽拉而至變形、分離甚至脫落流失，脫鈣不佳也會(huì)影響組織細(xì)胞染色效果或使組織抗原丟失[2]，從而影響對(duì)病變組織的病理診斷或科學(xué)研究工作。因此合適的脫鈣方法成為牙體組織制片，進(jìn)行免疫組化染色實(shí)驗(yàn)首先要解決的難題。本實(shí)驗(yàn)中對(duì)微波、超聲、微波-超聲聯(lián)合脫鈣法的脫鈣效果，及不同脫鈣方法對(duì)牙體組織免疫組化染色抗原的影響程度進(jìn)行了初步檢測(cè)，旨在尋找出更適合牙體組織免疫組化染色實(shí)驗(yàn)的脫鈣方法。

1 材料和方法

1.1 材料：收集因正畸拔除的健康人前磨牙40顆,患者年齡17～25歲,牙齒完好。經(jīng)生理鹽水沖洗后,入4%多聚甲醛溶液固定24h。

1.2 儀器試劑：微光波爐（WG700TL20Ⅱ-k6,廣東格蘭仕集團(tuán)有限公司）；KQ118型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Ⅰ型膠原蛋白抗體(武漢博士德公司)；纖維粘連蛋白抗體(武漢博士德公司)；SABC試劑盒(武漢博士德公司)。

1.3 脫鈣液配制：10% EDTA脫鈣液：EDTA-2Na 100g，NaOH 10g，加雙蒸水1000ml于容量瓶中,微加溫溶解，調(diào)pH值至7.2～7.4[3]。

1.4 方法：40顆牙隨機(jī)分成四組：微波組（Ⅰ），超聲組（Ⅱ），微波-超聲聯(lián)合組（Ⅲ），常溫對(duì)照組（Ⅳ）。將四組牙分別放入四只250 ml小燒杯內(nèi)，各加入脫鈣液150～200ml。按下列四種方法脫鈣：Ⅰ組：將小燒杯放入加有冷水的500ml大燒杯內(nèi)；置于微波爐中（低檔，輸出功率150W），脫鈣10min后，取出降溫5min再進(jìn)行下一次脫鈣，每日脫鈣24次。Ⅱ組：將小燒杯放入超聲波清洗器中（35℃，150W），脫鈣10min，取出降溫5min再進(jìn)行下一次脫鈣，每日脫鈣24次。Ⅲ組：將小燒杯放入超聲清洗器中脫鈣10min（條件同Ⅱ組），再放入微波爐中脫鈣（條件同Ⅰ組）進(jìn)行第二次脫鈣，如此反復(fù)進(jìn)行，每日脫鈣24次。Ⅳ組：將小燒杯放于室溫下靜置脫鈣。注意各組脫鈣過(guò)程中脫鈣液溫度以不超過(guò)50℃為宜，各組每日更換新脫鈣液一次，直至脫鈣完成（以大頭針無(wú)阻力可刺入組織為脫鈣完成的標(biāo)志）。牙齒脫鈣完成后,常規(guī)石蠟包埋，唇舌向切片數(shù)張。進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。

1.5 免疫組化染色：石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水,蒸餾水洗5min×3次；3% H2O2室溫孵育10min,蒸餾水洗5 min×3次；室溫下復(fù)合消化酶消化10 min,PBS洗2 min×3次；滴加BAS封閉液,室溫20 min,甩去多余液體；分別滴加一抗（兔抗人Ⅰ型膠原抗體，抗體滴度1∶50；兔抗人纖維粘連蛋白抗體，抗體滴度1∶150），4℃過(guò)夜；PBS洗2 min×3次；生物素化二抗室溫孵育20 min,PBS洗2 min×3次；SABC液室溫作用20 min,PBS洗5min×4次；顯微鏡監(jiān)控下DAB顯色,蘇木素輕度復(fù)染,脫水、透明、樹(shù)膠封片,顯微鏡下觀察。陰性對(duì)照片用PBS代替一抗，其余步驟同上。

1.6 圖像分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用HPIAS-2000高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)，運(yùn)用Image-Pro-Plus圖像分析軟件進(jìn)行平均光密度值（integral optical density，IOD）測(cè)定，取其平均值。圖像分析結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (x±s)形式表示。運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所測(cè)得的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OD值之間進(jìn)行Dunnett-t檢驗(yàn)。各實(shí)驗(yàn)組OD值之間進(jìn)行SNK-q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 四種脫鈣方法完成脫鈣所需時(shí)間的比較 (見(jiàn)表1) 。

2.2 免疫組化染色結(jié)果：四種不同脫鈣方法免疫組化染色效果存在差異，兩種不同抗體染色結(jié)果均表明：微波-超聲聯(lián)合組免疫組化染色效果佳，好于其它各組(P

3 討論

免疫組織化學(xué)染色技術(shù)是用已知的標(biāo)記的特異性抗體或抗原對(duì)組織內(nèi)相應(yīng)抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量檢測(cè)，從而了解抗原或抗體結(jié)合部位和含量的一門(mén)新興檢測(cè)技術(shù)[4]。在探討疾病的病因?qū)W、發(fā)病機(jī)制及科研工作中起到了不可估量的作用。免疫組化染色過(guò)程環(huán)節(jié)較多，而組織的脫鈣方法是牙體組織免疫組化染色的最關(guān)鍵的步驟之一。如果脫鈣不徹底可導(dǎo)致切片破碎甚至無(wú)法制片，脫鈣方法不佳導(dǎo)致組織抗原丟失影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，如何快速有效脫鈣至關(guān)重要。

目前，有研究表明，與其他強(qiáng)酸(如硝酸、鹽酸、甲酸等)相比EDTA-2Na是科研中較理想的脫鈣劑，尤其是免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)，而微波-EDTA聯(lián)合脫鈣時(shí)，則可以明顯提高脫鈣速度[2,4,10]。也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，超聲振動(dòng)可加增加相互碰撞機(jī)會(huì)，提高分子平均能量，加劇分子運(yùn)動(dòng)降低反應(yīng)活化能，從而提高化學(xué)反應(yīng)速度，甚至改變化學(xué)反應(yīng)機(jī)理，啟動(dòng)新的反應(yīng)渠道[5-6]。使用超聲波對(duì)骨組織進(jìn)行脫鈣，也可取得較好的脫鈣效果[7-8]。但超聲用于免疫組化實(shí)驗(yàn)中牙齒脫鈣的相關(guān)報(bào)道較少。

本研究中，用EDTA脫鈣液，采用微波、超聲、微波-超聲聯(lián)合及常溫下對(duì)牙體組織的脫鈣情況以及不同脫鈣方法對(duì)免疫組化染色的影響程度進(jìn)行了比較。對(duì)兩種抗體的檢測(cè)結(jié)果均表明：在四種脫鈣方法中微波-超聲聯(lián)合組脫鈣效果最好，免疫組化染色效果最佳。其原因可能是因?yàn)樵谖⒉姶艌?chǎng)作用下，使脫鈣組織中排列混亂的極性分子快速轉(zhuǎn)向，并定向排列，在運(yùn)動(dòng)、摩擦、碰撞過(guò)程中產(chǎn)熱使脫鈣速度加快；超聲輻射所產(chǎn)生的能量可以使反應(yīng)體系破碎、分散、霧化混合,增加反應(yīng)界面，打開(kāi)化學(xué)鍵，反應(yīng)的進(jìn)行同時(shí)也可引起加熱效應(yīng)等來(lái)促進(jìn)化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)行。另外超聲波的作用使絡(luò)合產(chǎn)物和中間體及時(shí)離開(kāi)反應(yīng)界面，類(lèi)似高效的機(jī)械攪拌[9]。因此可能是當(dāng)微波-超聲聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，通過(guò)超聲將牙體表面磷酸鈣晶體溶解，形成EDTA-2Na和鈣的螯合物，超聲振動(dòng)，將牙體表面鈣團(tuán)洗脫，打開(kāi)更多通道與脫鈣液接觸，進(jìn)而更加利于微波脫鈣，從而使脫鈣時(shí)間縮短。另外分析可能是因?yàn)镋DTA-2Na有萃取某些基質(zhì)蛋白的作用[11],常溫組脫鈣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)降低了抗原的免疫反應(yīng)性。而微波組和超聲組可能是由于在脫鈣時(shí)間上沒(méi)有明顯的差別，因此其免疫組化染色強(qiáng)度無(wú)顯著差異（P＞0.05）。微波-超聲聯(lián)合組由于脫鈣時(shí)間的縮短，減輕了脫鈣液對(duì)脫鈣組織的破壞，使組織中的抗原以及細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)得到了較好的保護(hù)，因此免疫組化染色更強(qiáng)。并且，可能是因?yàn)樵摲撯}更為均勻徹底[3]，更進(jìn)一步提高了制片的質(zhì)量。

總之，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，采用微波-超聲聯(lián)合脫鈣，且注意實(shí)驗(yàn)中各環(huán)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)化操作，可縮短脫鈣時(shí)間，獲得較滿(mǎn)意的染色效果，提高制片質(zhì)量。但本實(shí)驗(yàn)中僅對(duì)Ⅰ型膠原蛋白、FN兩種抗體的某一選定濃度進(jìn)行了檢測(cè)，尚未對(duì)其它濃度及更多抗原進(jìn)行測(cè)定，仍存在不足之處，對(duì)微波-超聲聯(lián)合法脫鈣的化學(xué)反應(yīng)機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

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第6篇：免疫組化技術(shù)范文

由于骨髓組織含有大量的鈣鹽而非常堅(jiān)硬，不能直接進(jìn)行石蠟制片，而經(jīng)過(guò)脫鈣處理后，才能進(jìn)行切片、HE染色、特殊染色和免疫組化染色。脫鈣過(guò)度或不當(dāng)均可影響上述染色。因此，脫鈣時(shí)間和脫鈣液的選擇十分重要。傳統(tǒng)的方法用14%硝酸脫鈣液脫鈣常出現(xiàn)脫鈣過(guò)度或不足，難以掌握，常造成組織切片不完整、組織結(jié)構(gòu)破壞、細(xì)胞模糊不清，以致醫(yī)生閱片時(shí)診斷困難甚至誤疹。為此，近一年來(lái)，筆者用4%鹽酸脫鈣液，代替原有14%硝酸脫鈣液，進(jìn)行骨髓組織脫鈣，取得到了比較好的效果，也避免了用塑料包埋切片后，不能進(jìn)行免疫組化染色的不足?，F(xiàn)將方法介紹如下。

1 材料和方法

1．1 材料 中山一院2007年全年骨髓活檢標(biāo)本480例。

1．2 方法 第1天：新鮮的骨髓標(biāo)本立即置于10%甲醛液固定（過(guò)夜）。第2天：08：00上班，立即置于4%鹽酸脫鈣（3．5～4 h）：稍水洗。11：30置于70%乙醇30 min；12：00流水沖洗2．5 h，然后轉(zhuǎn)入10%甲醛液補(bǔ)充固定。17：30分將骨髓標(biāo)本與當(dāng)天標(biāo)本一起放入全封閉自動(dòng)脫水機(jī)中脫水。第3天：石蠟包埋、切片、染色、出片交醫(yī)生發(fā)報(bào)告。

2 結(jié)果

與以往用14％硝酸脫鈣相比，骨髓切片完整，細(xì)胞形態(tài)保存良好，染色鮮艷，核質(zhì)對(duì)比清晰，并且免疫組化染色得到的效果較好。見(jiàn)圖1~4。將骨髓組織，在固定充分的情況下進(jìn)行14％硝酸與4％鹽酸脫鈣的比較，見(jiàn)表1。

3 討論

過(guò)去，骨髓組織制片多采用甲基丙烯酸乙基（HEMA）等特殊包埋劑包埋，不需經(jīng)脫鈣處理可進(jìn)行切片HE染色，但操作類(lèi)煩瑣也不能作免疫組化染色，因此， 筆者這樣脫鈣處理進(jìn)行石蠟切片的技術(shù)方法，以滿(mǎn)足臨床病理診斷免疫組化輔助的需要。常規(guī)骨組織脫鈣主要采用14％硝酸脫鈣，但硝酸對(duì)骨髓組織破壞極大，免疫組化染色效果不佳。

實(shí)踐證明，過(guò)去用的14%硝酸對(duì)骨髓組織脫鈣，具有作用快，脫鈣能力強(qiáng)的特點(diǎn)，但由于硝酸是強(qiáng)酸，往往對(duì)骨髓組織脫時(shí)間不易控制（以大頭針能刺入骨髓組織無(wú)阻力感為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)衡量脫鈣時(shí)間），常出現(xiàn)脫鈣不足或脫鈣過(guò)度等狀況。脫鈣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，骨髓組織破壞，結(jié)構(gòu)模糊不清或者無(wú)法制片；脫鈣時(shí)間過(guò)短，脫鈣不充分，骨髓組織較硬，以致無(wú)法制造出完整的切片。

醫(yī)院早上送來(lái)的骨髓組織，往往是剛剛穿刺的新鮮標(biāo)本，固定時(shí)間還不夠。需要進(jìn)上步固定過(guò)夜，這樣做與當(dāng)天穿刺當(dāng)天取材制片的比較，切片完整，厚薄均勻，細(xì)胞結(jié)構(gòu)保存良好，免疫組化、特染染色效果較好。相反，固定時(shí)間不夠的骨髓組織，無(wú)論在切片、HE染色、特殊染色和免疫組化中，染色效果都不理想。以致病理醫(yī)生難以作出診斷，拖延了病理報(bào)告發(fā)出的時(shí)間，甚至造成誤診。

由于骨髓組織富含鈣鹽、纖維支架少，組織具有硬、脆、疏松的特點(diǎn)，4%鹽酸脫鈣液酸度比硝酸脫鈣液酸度比硝酸脫鈣液濃度較低，因此采取延長(zhǎng)脫鈣時(shí)間的做法，使脫鈣過(guò)程緩慢而較持久地進(jìn)行（脫鈣時(shí)間一定不能少于4 h，以大頭針能穿過(guò)無(wú)阻力為準(zhǔn)，骨髓組織脫鈣才算完成）。流水沖洗一定要充分，如果沖洗時(shí)間不夠，骨髓組織帶有酸性，HE染色時(shí)胞核著色偏淺，核質(zhì)對(duì)比不清晰，免疫組化假陽(yáng)性率高。因此流水沖洗時(shí)間不能少于2．5 h。

鹽酸會(huì)使組織膨脹，而酒精對(duì)組織具有收縮作用。因此，脫鈣后將組織放入70％乙醇作用30 min，以減低鹽酸對(duì)組織影響。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的反復(fù)比較和實(shí)踐，用4％鹽酸脫鈣的方法能使骨組織切片、HE染色、特殊染色和免疫組化染色達(dá)到較穩(wěn)定的效果，達(dá)到優(yōu)質(zhì)骨髓切片標(biāo)準(zhǔn)有助于診斷，得到到廣大病理醫(yī)生的認(rèn)同。值得大力推廣。

參考文獻(xiàn)

第7篇：免疫組化技術(shù)范文

【關(guān)鍵詞】 外周原始神經(jīng)外胚葉腫瘤(pPNET)；免疫組織化學(xué)；臨床病理

【中圖分類(lèi)號(hào)】R361

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】 1673-7555[2007]01-0003-03

外周原始神經(jīng)外胚葉腫瘤(peripheral primitiveneuroectodennal tumor，pPNET)，是一類(lèi)向神經(jīng)方向分化的惡性小圓細(xì)胞腫瘤。由于其發(fā)病率低，腫瘤細(xì)胞分化程度差，多呈原始未分化狀態(tài)，常規(guī)切片上病理診斷有一定困難，已越來(lái)越引起臨床及病理醫(yī)生的重視。本文通過(guò)對(duì)10例pPNET的臨床特點(diǎn)、病理改變及免疫組化表型的分析，為I臨床病理診斷提供幫助。

1材料與方法

1．1標(biāo)本來(lái)源及處理 10例標(biāo)本均來(lái)自我院1996年～2006年的活檢標(biāo)本。所有標(biāo)本均經(jīng)10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色和免疫組織化染色，顯微鏡下觀察。

1．2臨床資料 10例pPNET中男、女各5例，平均年齡34歲。病變部位：腹股溝2例，腹腔、腹膜后、股骨遠(yuǎn)端、左肩胛下、右小腿、右下臂、腰部和背部各1例，無(wú)特征性臨床表現(xiàn)，多為偶然發(fā)現(xiàn)或體檢發(fā)現(xiàn)。

2結(jié)果

2．1大體檢查　送檢均為手術(shù)切除標(biāo)本，腫塊呈圓形或橢圓形，大小不一，體積由2．0cm×2．0cm×1．0cm～7．0cm×5．0cm×3．0cm。切面實(shí)，灰白及灰紅色，質(zhì)軟細(xì)膩如魚(yú)肉樣。部分區(qū)域有出血壞死及囊性變，與周?chē)M織境界較清，但未見(jiàn)明顯包膜。

2．2顯微鏡下觀察　鏡下腫瘤組織主要由小圓形細(xì)胞組成，部分為梭形細(xì)胞，胞漿極少，部分腫瘤細(xì)胞有少許嗜酸性胞漿，細(xì)胞境界不清(見(jiàn)圖A)。核圓形或卵圓形，核染色質(zhì)顆粒狀，核仁不明顯，核分裂象多見(jiàn)。瘤細(xì)胞密集成巢，由數(shù)量不等的纖維結(jié)締組織分隔成小葉狀，部分瘤細(xì)胞呈放射狀排列，形成Homer Wright菊形團(tuán)(見(jiàn)圖B)，或不成熟的假性菊形團(tuán)。腫瘤組織內(nèi)血管豐富，常見(jiàn)出血壞死及囊性變。

2．3免疫組化結(jié)果　10例腫瘤細(xì)胞CD99均陽(yáng)性，表現(xiàn)為細(xì)胞膜及胞漿呈現(xiàn)棕黃色(見(jiàn)圖c)。此外其他神經(jīng)性標(biāo)記物NSE陽(yáng)性6例(見(jiàn)圖D)，sv陽(yáng)性3例，CgA7例陽(yáng)性，Vim陽(yáng)性5例。

3討論

3．1組織發(fā)生原始神經(jīng)外胚葉腫瘤(primitive neu－roectodermal tumor，PNET)是一組起源于神經(jīng)嵴胚胎殘留組織，有多種分化潛能的小圓細(xì)胞惡性腫瘤。最早是Stout描述，1973年由Hart提出原始神經(jīng)外胚葉腫瘤(PNET)的概念。1993年版修訂的WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的組織學(xué)分類(lèi)中，首次將原始神經(jīng)外胚葉腫瘤列入其中，并歸入神經(jīng)上皮源性胚胎性腫瘤之列。原始神經(jīng)外胚葉腫瘤分中樞型(cPNET)和外周型(pPNET)，cPNET主要為發(fā)生于小腦的髓母細(xì)胞瘤；pPNET發(fā)生于軟組織、骨、腹膜后、盆腔、胸壁和肺等，包括骨內(nèi)、外尤文瘤、胸肺區(qū)Askin’s瘤和嬰兒色素性神經(jīng)外胚層瘤。2000年WHO新分類(lèi)將其歸屬于神經(jīng)系統(tǒng)胚胎類(lèi)腫瘤，組織學(xué)[2]分級(jí)為Ⅳ級(jí)，生物學(xué)行為為高度惡性。以往cPNET十分少見(jiàn)，但隨著近年來(lái)免疫組化檢測(cè)水平的不斷提高和分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，該病的臨床報(bào)道正在逐漸增多。

3．2臨床病理特點(diǎn) 外周原始神經(jīng)外胚葉腫瘤(pPNET)可發(fā)生于任何年齡，好發(fā)于兒童及青年，一般在35歲之內(nèi)，本組平均年齡34歲，無(wú)性別差異。病變部位有沿身體長(zhǎng)軸分布的特點(diǎn)。組織學(xué)特征表現(xiàn)為形態(tài)一致的小圓形或卵圓形腫瘤細(xì)胞，被多少不等的纖維結(jié)締組織分隔成巢團(tuán)狀，瘤細(xì)胞常形成Homer―Wright菊形團(tuán)。腫瘤組織內(nèi)血管豐富，常見(jiàn)出血壞死及囊性變。免疫組化幾乎對(duì)所有神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的標(biāo)記物均表達(dá)，CD99作為pPNET的標(biāo)記物具有相對(duì)特異性，陽(yáng)性表達(dá)率為80％～90％，本組10例均為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為100％。

3．3診斷與鑒別診斷　pPNET是組織學(xué)形態(tài)多樣的小圓細(xì)胞惡性腫瘤，常規(guī)HE切片診斷困難，尤其分化差的腫瘤，很難與其他類(lèi)型的小細(xì)胞惡性腫瘤相區(qū)別，必須依靠免疫組化才能明確診斷。對(duì)于組織學(xué)上有菊形團(tuán)或假菊形團(tuán)結(jié)構(gòu)的小圓細(xì)胞腫瘤，免疫組化染色CD99及兩種以上神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物陽(yáng)性，并結(jié)合臨床特點(diǎn)方可診斷為pPNET。目前多采用病理檢查、免疫組織化學(xué)檢查及細(xì)胞遺傳學(xué)方法聯(lián)合診斷。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，國(guó)外已將基因檢測(cè)作為診斷原始神經(jīng)外胚葉腫瘤的重要方法，在該腫瘤中，85％的病例可檢測(cè)到EWS―FLI及EWS―ERG融合基因的表達(dá)，從而在根本上解決了原始神經(jīng)外胚層腫瘤的診斷問(wèn)題。鑒別診斷主要應(yīng)與其他類(lèi)型的小圓細(xì)胞腫瘤相區(qū)別。①未分化小細(xì)胞癌：未分化小細(xì)胞癌在細(xì)胞形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)上與pPNET相似，細(xì)胞排列成巢，但無(wú)菊形團(tuán)結(jié)構(gòu)，免疫組化神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記也可以陽(yáng)性，但CD99及Vim陰性，而EMA、CEA及CK等上皮細(xì)胞性標(biāo)記陽(yáng)性。②無(wú)色素的小細(xì)胞惡性黑色素瘤：小圓形腫瘤細(xì)胞松散排列，電子顯微鏡下細(xì)胞內(nèi)可看到不同發(fā)育階段的黑色素小體，免疫組化HMB45和S100陽(yáng)性有助于診斷。③胚胎性橫紋肌肉瘤：分化差的腫瘤細(xì)胞為小圓細(xì)胞，偶見(jiàn)具診斷價(jià)值的“蝌蚪型”細(xì)胞，免疫組化MyoD1、Des、Vim及其他肌源性抗體陽(yáng)性，但CD99與神經(jīng)標(biāo)記物為陰性。④小細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤：淋巴瘤是單一幼稚的淋巴細(xì)胞異型增生，細(xì)胞小圓形，胞漿極少，核圓形規(guī)則，染色質(zhì)細(xì)而密集深染，無(wú)明顯核仁，瘤細(xì)胞彌漫分布，免疫組化LCA及CD20等B細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記陽(yáng)性。

第8篇：免疫組化技術(shù)范文

【關(guān)鍵詞】 胃；叢狀纖維黏液瘤；鑒別診斷

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.04.008

Clinical pathological characteristics of plexiform fibromyxoma of stomach ZHANG Quan-wu， HE Ying-ying， LIU Jun-ling， et al. Department of Pathology， Affiliated Zhengzhou Central Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450007， China

【Abstract】 Objective To investigate clinical pathological characteristics of plexiform fibromyxoma （PF） of stomach. Methods Histological observation and immumohistochemical staining were taken in 1 patient with PF of stomach. Its clinical pathological characteristics and differential diagnosis were investigated in combination with literature. Results PF of stomach showed main gastroscopic manifestations as polypoidal or intumescent neoplasm. Its histological characteristics included multiple nodular tumor， fusiform oncocyte， mesenchyme with small thin-walled vessels and myxoid stroma， and short fusiform or oval nucleus. Immunohistochemistry showed oncocyte with strong positive Vim， SMA and weak positive CD10 lesion. Conclusion As a rare benign mesenchymal tumor， PF of stomach requires distinguishing diagnosis from gastrointestinal stromal tumor and aggressive fibromatosis.

【Key words】 Stomach； Plexiform fibromyxoma； Differential diagnosis

胃叢狀纖維黏液瘤（plexiform fibromyxoma， PF）是罕見(jiàn)的胃間葉性腫瘤[1]， 目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)見(jiàn)34例報(bào)道[1-4]。本文研究1例胃潰瘍穿孔修補(bǔ)術(shù)后發(fā)生的胃PF患者， 觀察其組織學(xué)和免疫組化特征， 結(jié)合文獻(xiàn)復(fù)習(xí)， 討論其臨床病理學(xué)特征及預(yù)后， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 患者男， 48 歲， 以上腹部飽脹不適2014年3月17日來(lái)診， 自訴2年前做過(guò)胃潰瘍穿孔修補(bǔ)手術(shù)。胃鏡示近胃竇處小彎后壁黏膜下隆起性腫物， 呈息肉狀突向胃腔， 表面光滑。大小3.0 cm×2.7 cm， 考慮胃腸道間質(zhì)瘤可能。術(shù)中快速病理示：胃梭形細(xì)胞腫瘤， 考慮良性， 待常規(guī)切片確診。手術(shù)醫(yī)師完整切除腫塊及周?chē)糠治副谒统Ｒ?guī)病理。

1. 2 方法 標(biāo)本經(jīng)HE 染色， 光鏡下觀察；免疫組化采用SP 法， 所用抗體Vim、SMA、Dog-1、CD34、S-100、Desmin、CD117、CD10、β-catenin、ALK、Ki-67購(gòu)自福建邁新物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司， 操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2. 1 病理檢查 巨檢：部分胃壁面積4.7 cm×5.2 cm， 黏膜下見(jiàn)一體檢3.0 cm×2.7 cm×1.8 cm的灰白色腫物， 邊界欠清， 質(zhì)地較韌。鏡檢：胃鏡下主要表現(xiàn)為息肉狀或隆起性腫物；腫瘤在胃壁黏膜下及肌層呈多結(jié)節(jié)狀生長(zhǎng)， 與胃壁平滑肌交錯(cuò)分布， 瘤細(xì)胞呈梭形， 束狀、編織狀排列， 細(xì)胞較稀疏， 間質(zhì)為黏液樣基質(zhì)， 有豐富的薄壁血管， 鏡下瘤細(xì)胞胞質(zhì)弱嗜酸性， 胞界不清， 核呈短梭形或卵圓形， 無(wú)明顯異型（見(jiàn)圖1）。

2. 2 免疫組化 瘤細(xì)胞Vim、SMA強(qiáng)陽(yáng)性（見(jiàn)圖2）；CD10局灶弱陽(yáng)性；CD34、 S-100、Desmin、 CD117、 Dog-1、β-catenin、ALK陰性；Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞約1%。

病理診斷：胃叢狀纖維黏液瘤。術(shù)后隨訪12 個(gè)月， 未見(jiàn)復(fù)發(fā)。

3 討論

2007年Takahashi 等[2]首次報(bào)道2例發(fā)生于胃竇的間葉性腫瘤， 腫瘤呈叢狀生長(zhǎng)并富含小血管的黏液樣間質(zhì)， 免疫組化和電鏡下顯示有肌纖維母細(xì)胞性分化， 將其命名為叢狀血管黏液樣肌纖維母細(xì)胞瘤（PAMT）。2009 年 Miettinen 等[5]在報(bào)道中根據(jù)腫瘤組織學(xué)形態(tài)和免疫表型特點(diǎn)， 將該腫瘤命名為PF。Sing 等[6]認(rèn)為， PAMT和 PF 均來(lái)源于胃間葉組織， 腫瘤細(xì)胞形態(tài)具有連續(xù)的譜系， 一端是肌纖維母細(xì)胞， 另一端向纖維母細(xì)胞分化， PAMT 以完全分化的肌纖維母細(xì)胞為主， 而PF以纖維母細(xì)胞分化為主。WHO（2010） 消化系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)中采用 PF 這一名稱(chēng)。

3. 1 診斷及鑒別診斷 胃PF罕見(jiàn)， 發(fā)病年齡7～75 歲， 平均發(fā)病年齡43 歲， 臨床表現(xiàn)以上消化道癥狀為主。腫瘤多位于胃竇或接近胃竇處黏膜下， 可突向胃腔， 亦可長(zhǎng)入黏膜內(nèi)或突破漿膜生長(zhǎng)[3]， 瘤體最大徑1.5～15.0 cm， 平均5.8 cm， 切面多呈灰白色。鏡下腫瘤呈叢狀、結(jié)節(jié)狀生長(zhǎng)于黏膜下纖維組織及平滑肌之間， 結(jié)節(jié)大小不一， 邊界欠清， 瘤細(xì)胞呈梭形或卵圓形， 胞質(zhì)弱嗜酸性， 核卵圓形或短梭形， 細(xì)胞異型性小， 核分裂無(wú)或極低（0～4個(gè)/50 HPF）， 間質(zhì)富于血管及纖維黏液樣物， 免疫組化顯示瘤細(xì)胞有部分肌纖維母細(xì)胞分化， 多數(shù)病例 SMA和Vim 陽(yáng)性， CD10可陽(yáng)性或局灶陽(yáng)性。本例免疫表型與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。作者認(rèn)為， 胃 PF 的診斷主要依據(jù)鏡下組織病理學(xué)表現(xiàn)， 免疫組化標(biāo)記為輔助。鑒別診斷：①胃腸道間質(zhì)瘤：免疫組化 CD117、CD34、Dog-1 陽(yáng)性；②炎性肌纖維母細(xì)胞瘤：可見(jiàn)大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及梭形腫瘤細(xì)胞， ALK常陽(yáng)性；③纖維瘤病：免疫組化瘤細(xì)胞核β-catenin陽(yáng)性。

3. 2 治療與預(yù)后 文獻(xiàn)報(bào)道多數(shù)病例行遠(yuǎn)端或部分胃切除。本例局部切除隨訪12個(gè)月未見(jiàn)復(fù)發(fā)， 文獻(xiàn)也無(wú)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的報(bào)道， 提示胃PF是一種良性腫瘤， 但由于呈叢狀生長(zhǎng)， 若切除不完全， 有復(fù)發(fā)的可能[7]。

參考文獻(xiàn)

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第9篇：免疫組化技術(shù)范文

【摘要】

目的 探討特殊類(lèi)型惡性間皮瘤的臨床與病理特征。方法 對(duì)23例特殊類(lèi)型惡性間皮瘤進(jìn)行臨床、組織形態(tài)學(xué)、免疫組化、組織化學(xué)及電鏡觀察并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)。 結(jié)果 惡性間皮瘤的特殊類(lèi)型包括印戒細(xì)胞樣型、小細(xì)胞型、黏液樣型、肌纖維母細(xì)胞型、淋巴組織細(xì)胞樣型、促纖維增生型。免疫組化染色示腫瘤細(xì)胞均表達(dá)Calretinin、CK5/6、CK及Vimentin。部分病例CI染色陽(yáng)性，而HCI染色則陰性。19例電鏡示瘤細(xì)胞表面見(jiàn)細(xì)長(zhǎng)微絨毛，胞漿內(nèi)有豐富的張力微絲及橋粒。 結(jié)論 特殊類(lèi)型惡性間皮瘤組織學(xué)形態(tài)多樣，結(jié)合臨床特征及其免疫組化、組織化學(xué)及電鏡檢測(cè)有助于診斷。需與肺腺癌、胃腸道腺癌、惡性淋巴瘤、平滑肌肉瘤及惡性纖維組織細(xì)胞瘤鑒別。

【關(guān)鍵詞】 惡性間皮瘤；病理學(xué)；分類(lèi)；診斷

Abstract： Objective To investigate the clinical and pathological characteristics of malignant mesothelioma of special types.Methods A total of 23 cases of malignant mesothelioma of special types were analyzed by means of histologic， histochemical and immunohistochemical staining and by clinical， light and electron microscopic observation. Their clinical and histopathological features were reviewed via related literature.Results Malignant mesothelioma of the special types included signet ring cell type， small cell type， myxoid type， myofibroblastic type， lymphohistiocytic type and desmoplastic type. Immunohistochemical staining showed that the neoplastic cells were positive for calretinin， CK5/6， CK， vimentin but negative for CEA. Histochemical staining showed that the tumor were positive for CI but negative for HCI. Electron microscopic study of 19 cases showed that the neoplastic cells had the mesothelial-type microvilli， lots of tonofilament and desmosomes. Conclusion The malignant mesothelioma of the special types have persiform histological features. The diagnosis should be established with the combination of clinical manifestation， light and electron microscopic observations and histochemical and immunohistochemical staining. It should be differentiated from adenocarcinoma of lung or gastrointestinal tract， malignant lymphoma， leiomyosarcoma， and malignant fibrohistiocytoma.

Key words： malignant mesothelioma; pathology; classification; diagnosis

惡性間皮瘤（malignant mesothelioma，MM）是一種發(fā)病較為少見(jiàn)，預(yù)后差的惡性腫瘤，但隨著工業(yè)化程度的提高，石棉的廣泛應(yīng)用，MM的發(fā)病率在世界許多國(guó)家呈上升趨勢(shì)。以往一般將MM分為上皮型、肉瘤型及混合細(xì)胞型，近年來(lái)，由于各種新技術(shù)的廣泛開(kāi)展，尤其是免疫組化、電鏡等，對(duì)MM的認(rèn)識(shí)也在不斷的提高，對(duì)其光鏡下組織形態(tài)分型也有了新的認(rèn)識(shí)。目前，國(guó)內(nèi)李維華、于國(guó)等[1～2]認(rèn)為MM的特殊亞型包括印戒細(xì)胞樣型、小細(xì)胞型、黏液樣型、肌纖維母細(xì)胞型、淋巴組織細(xì)胞樣型、促纖維增生型等。本文報(bào)告解放軍總醫(yī)院1980—2008年經(jīng)組織病理學(xué)確診的各種特殊類(lèi)型惡性間皮瘤共23例，并結(jié)合文獻(xiàn)進(jìn)行臨床病理分析。

1 資料和方法

1.1 一般資料

所用標(biāo)本均為解放軍總醫(yī)院1980—2008年間經(jīng)組織病理學(xué)確診的各種特殊類(lèi)型惡性間皮瘤，其中手術(shù)切除標(biāo)本20例，尸檢標(biāo)本3例，共計(jì)23例。發(fā)病年齡17～65歲，高峰年齡35～50歲。組織學(xué)類(lèi)型、性別、發(fā)病部位、大體形態(tài)、術(shù)后生存期見(jiàn)表1。表1 23例特殊類(lèi)型惡性間皮瘤的臨床病理資料(略)

1.2 方法

標(biāo)本均采用4%甲醛液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm 切片， HE染色， 光鏡觀察。 免疫組化采用SP法，選用抗體有CK5/6、Calretinin、抗間皮抗原、D240、CK、Vimentin、CEA、EMA、SMA及CD68等，均為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。組織化學(xué)采用膠質(zhì)鐵染色（CI）及先行透明質(zhì)酸酶消化后再做膠質(zhì)鐵染色（HCI），透明質(zhì)酸酶購(gòu)于瑞士Fluka公司。19例新鮮標(biāo)本離體后，切取小組織塊放入3％戊二醛固定，常規(guī)脫水、制片，H7000型透射電鏡觀察。

2 結(jié)果

2.1 光鏡觀察

根據(jù)腫瘤的組織學(xué)形態(tài)，本組23例特殊類(lèi)型MM可分為以下幾種特殊組織學(xué)類(lèi)型。

2.1.1 印戒細(xì)胞樣型（Signet ring cell type）：（見(jiàn)封4圖4）

本組2例均為彌漫分布的印戒樣細(xì)胞，部分瘤細(xì)胞可見(jiàn)空泡形成，瘤細(xì)胞大小不等，形狀不一，胞核卵圓形，大多數(shù)偏位，核染色質(zhì)粗糙，深染，可見(jiàn)核仁、核分裂象。局部可見(jiàn)少許腺樣結(jié)構(gòu)，極少部分瘤細(xì)胞相互融合成大泡狀，形成不規(guī)則腔隙樣結(jié)構(gòu)，并可見(jiàn)結(jié)構(gòu)。

2.1.2 小細(xì)胞型（Small cell type）：（見(jiàn)封4圖5）

本組10例，以小細(xì)胞性瘤細(xì)胞占主要成分，呈彌漫分布，瘤細(xì)胞小圓形或卵圓形，胞漿少，核圓形，染色質(zhì)細(xì)而均勻，核分裂象少見(jiàn)。間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)少許薄壁血管?？梢?jiàn)少許腺管狀結(jié)構(gòu)（5例）及假菊形團(tuán)樣結(jié)構(gòu)（6例），并可見(jiàn)有少數(shù)混合型瘤細(xì)胞（3例）及印戒樣瘤細(xì)胞（2例）。

2.1.3 黏液樣型（Myxoid type）：（見(jiàn)封4圖6）

本組3例其突出表現(xiàn)是在異型腺管或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)間見(jiàn)有大量的黏液樣物質(zhì)。部分區(qū)域瘤細(xì)胞彌漫成片，其間可見(jiàn)微囊形成。

2.1.4 肌纖維母細(xì)胞型（Myofibroblastic type）：（見(jiàn)封4圖7）

本組3例瘤細(xì)胞呈彌漫分布，均為梭形、短梭形；瘤細(xì)胞胞漿豐富，呈嗜酸性，似肌纖維母細(xì)胞；胞核胖梭形或短梭形，可見(jiàn)核分裂象；瘤細(xì)胞間可見(jiàn)多少不等的淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)?？梢?jiàn)少許上皮樣分化區(qū)域（1例）。

2.1.5 淋巴組織細(xì)胞樣型（Lymphohistiocytic type）：（見(jiàn)封4圖8）

本組2例瘤細(xì)胞呈彌漫分布，圓形、卵圓形、梭形及短梭形，大小略不等；胞核卵圓形，可見(jiàn)核分裂象；有些瘤細(xì)胞胞漿豐富，淡染或粉染，類(lèi)似于組織細(xì)胞。瘤細(xì)胞間可見(jiàn)大量成熟的淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及少許中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。1例經(jīng)反復(fù)取材僅見(jiàn)小灶性腺管樣結(jié)構(gòu)。

2.1.6 促纖維增生型（Desmoplastic type）：（見(jiàn)封4圖9）

本組3例其纖維組織明顯增生，并形成大量膠原，發(fā)生硬化性改變，但瘤組織中仍可以見(jiàn)到胞核異型的瘤細(xì)胞，并有裂隙存在。

2.2 免疫組化及組織化學(xué)

本組23例特殊類(lèi)型惡性間皮瘤免疫組化示瘤細(xì)胞均不同程度表達(dá)Calretinin、CK5/6、CK及Vimentin，且均不表達(dá)CEA[3～5]。肌纖維母細(xì)胞型的瘤細(xì)胞還表達(dá)SMA及Actin（pan）[6]；淋巴組織細(xì)胞樣型的瘤細(xì)胞均表達(dá)CD68、S100及α1抗胰蛋白酶，但LCA不表達(dá)[7]。CI染色顯示印戒細(xì)胞樣型及黏液樣型均呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，而HCI染色均呈陰性，表明陽(yáng)性物質(zhì)為透明質(zhì)酸，而并非黏液。

2.3 電鏡

19例電鏡下主要可見(jiàn)瘤細(xì)胞表面有細(xì)長(zhǎng)的微絨毛，印戒細(xì)胞樣型和黏液樣型的瘤細(xì)胞表面的微絨毛較多，呈蓬發(fā)樣，而其他幾種類(lèi)型的瘤細(xì)胞表面微絨毛較少。瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)有豐富的張力微絲，并可見(jiàn)橋粒，（見(jiàn)封4圖10）。

3 討論

1992年，Mayall等[8]根據(jù)MM中瘤細(xì)胞分化程度及腫瘤的成分中居優(yōu)勢(shì)的一種瘤細(xì)胞至少占50％以上的原則，經(jīng)光鏡及免疫組化證實(shí)，13例MM患者的腫瘤細(xì)胞中小細(xì)胞超過(guò)了90％，并混有少數(shù)腺管狀及混合型瘤細(xì)胞，故將此命名為小細(xì)胞型惡性間皮瘤。1995年Kung等[6]報(bào)道10例肉瘤型惡性間皮瘤及5例混合型惡性間皮瘤的梭形腫瘤細(xì)胞均表達(dá)musclespecific actin (MSA) 及smooth muscle actin (SMA)，認(rèn)為肉瘤型間皮瘤具有肌纖維母細(xì)胞分化。1988年Henderson等[7]在復(fù)習(xí)以往的病歷中發(fā)現(xiàn)3例光鏡下誤診為惡性淋巴瘤，但后經(jīng)電鏡檢查發(fā)現(xiàn)瘤細(xì)胞表面有較細(xì)長(zhǎng)的微絨毛，胞漿內(nèi)有豐富的張力微絲，并可見(jiàn)橋粒，而免疫組化染色發(fā)現(xiàn)瘤細(xì)胞對(duì)CK、EMA、S100及Vimentin均呈不同程度陽(yáng)性改變，而對(duì)CEA及LCA呈陰性，從而證明腫瘤細(xì)胞起源于間皮，由于瘤細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞及非典型組織細(xì)胞，故命名為淋巴組織細(xì)胞樣型間皮瘤。本組23例，分6個(gè)亞型，說(shuō)明MM的腫瘤細(xì)胞除了雙相分化的特點(diǎn)外，還具有多潛能分化的特點(diǎn)。因此，對(duì)于MM的診斷不能局限在常規(guī)的上皮型、肉瘤型和混合型的分類(lèi)基礎(chǔ)之上，我們認(rèn)為，雖然特殊類(lèi)型的出現(xiàn)增加了MM與其他軟組織肉瘤和低分化癌的鑒別診斷難度，但只要結(jié)合發(fā)病部位，配合免疫組化、組織化學(xué)及電鏡檢查，還是能夠明確診斷。

3.1 診斷

各類(lèi)特殊類(lèi)型惡性間皮瘤發(fā)病極為罕見(jiàn)，而其病理組織形態(tài)表現(xiàn)復(fù)雜多樣，免疫組化表型又有其特殊之處，給診斷造成很大困難。我們認(rèn)為以下幾點(diǎn)有助于確診：(1)特定部位。本組23例均發(fā)生在胸膜、腹膜和心包膜。(2)組織形態(tài)。熟悉各種特殊類(lèi)型惡性間皮瘤的光鏡特點(diǎn)，尤其注意應(yīng)多取材制片，以找出不同分化的證據(jù)。(3)免疫組化及組織化學(xué)。腫瘤細(xì)胞對(duì)間皮特異性抗原如Calretinin、CK5/6及D240等必須一種或多種陽(yáng)性，CK、EMA、Vimentin和CEA對(duì)鑒別診斷有一定幫助，另外應(yīng)注意不同特殊類(lèi)型有其自身特點(diǎn)，如肌纖維母細(xì)胞型的腫瘤細(xì)胞對(duì)SMA及Actin（pan）呈陽(yáng)性表達(dá)，淋巴組織細(xì)胞樣型的腫瘤細(xì)胞對(duì)CD68、S100及α1抗胰蛋白酶呈陽(yáng)性表達(dá)，但LCA不表達(dá)。CI及HCI染色可明確細(xì)胞內(nèi)外均為透明質(zhì)酸，而不是黏液或糖原。(4)電鏡檢查。特殊類(lèi)型惡性間皮瘤的腫瘤細(xì)胞在電鏡下均可表現(xiàn)出上皮或上皮分化的特點(diǎn)，細(xì)胞表面可見(jiàn)或多或少的細(xì)長(zhǎng)微絨毛，胞漿內(nèi)可見(jiàn)豐富的張力微絲，并可見(jiàn)橋粒。

3.2 鑒別診斷

根據(jù)特殊類(lèi)型惡性間皮瘤的發(fā)生部位和組織形態(tài)主要需與下列腫瘤相鑒別：(1)肺腺癌，尤其是周?chē)拖侔┎⒗奂靶啬ぃ航M織形態(tài)上，兩者均能出現(xiàn)腺管、狀及實(shí)性片狀結(jié)構(gòu)，并均可出現(xiàn)印戒樣細(xì)胞及黏液樣物質(zhì)，但MM的瘤細(xì)胞表達(dá)間皮特異性抗原如calretinin、CK5/6等，而肺腺癌表達(dá)TTF1。CI及HCI染色可明確MM的瘤細(xì)胞內(nèi)外黏液樣物質(zhì)為透明質(zhì)酸。電鏡下MM的瘤細(xì)胞表面微絨毛細(xì)長(zhǎng)，其長(zhǎng)寬比值（L/W）一般在11以上，而肺腺癌L/W在5以下[9～10]。(2)胃腸道腺癌并腹膜廣泛轉(zhuǎn)移：胃腸道腺癌表現(xiàn)多樣，其中印戒細(xì)胞癌和黏液腺癌在光鏡下與特殊類(lèi)型惡性間皮瘤不易區(qū)分，但免疫組化可以區(qū)分腫瘤來(lái)源，電鏡下腸源性腺癌腫瘤細(xì)胞表面可見(jiàn)短小微絨毛及纖毛，細(xì)胞頂部胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)較大的分泌顆粒及糖鄂小體，與惡性間皮瘤也可區(qū)分。(3)惡性淋巴瘤：小細(xì)胞型惡性間皮瘤的瘤細(xì)胞以小圓形細(xì)胞為主，核染色均勻一致，分裂象少見(jiàn)；淋巴組織細(xì)胞樣型惡性間皮瘤的瘤組織內(nèi)可見(jiàn)大量的淋巴細(xì)胞及非典型組織細(xì)胞，文獻(xiàn)報(bào)道3例在光鏡下誤診為惡性淋巴瘤。通過(guò)免疫組化檢測(cè)MM的瘤細(xì)胞表達(dá)間皮特異性抗原，而不表達(dá)LCA。(4)平滑肌肉瘤：肌纖維母細(xì)胞型惡性間皮瘤的瘤細(xì)胞胖梭或短梭形，胞漿粉染或淡染，具有某些平滑肌細(xì)胞的特征，并且可以表達(dá)SMA及Actin（pan），但電鏡下MM的瘤細(xì)胞可以找到上皮分化的特征，如少量的微絨毛及基膜，免疫組化示瘤細(xì)胞為間皮來(lái)源。(5)惡性纖維組織細(xì)胞瘤：在淋巴組織細(xì)胞樣型惡性間皮瘤的瘤組織中存在大量非典型纖維組織細(xì)胞，甚至少數(shù)病例中出現(xiàn)Touton巨細(xì)胞，并可見(jiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及中性粒細(xì)胞，與惡性纖維組織細(xì)胞瘤有相似之處。免疫組化檢測(cè)及電鏡觀察可明確組織來(lái)源，二者可區(qū)別。第1期特殊類(lèi)型惡性間皮瘤的臨床病理分析 吳雪輝，等

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