一周學習計劃精選(九篇)
前言：一篇好文章的誕生，需要你不斷地搜集資料、整理思路，本站小編為你收集了豐富的一周學習計劃主題范文，僅供參考，歡迎閱讀并收藏。
第1篇：一周學習計劃范文
關鍵詞：益氣活血藥；毛細血管密度；周細胞計數；心肌梗死；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.07.015
中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2013）07-0038-05
Change of Capillary Pericapillary Cells in Rats with Myocardial Infarction and Effect of Supplementing Qi and Activating Blood Circulation Herbs HUANG Kun， YANG Dan-dan， GUO Shu-wen， SUN Qing， ZHANG Lu， QI Xin， WAN Ting， ZHENG Cheng-long （Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029 ， China）
Abstract：Objective To observe the change of capillary pericapillary cells in rats with myocardial infarction and the influence of supplementing qi and activating blood circulation herbs， and explore its mechanism of improving myocardial perfusion. Methods The rat model was established by ligaturing the left anterior descending coronary artery. On the base of ECG evaluation， successfully modeled rats were randomly divided into the model group， group treated with supplementing qi and activating blood circulation Chinese medicine （activating blood and supplementing qi group）， group treated with Perindopril （Perindopril group）， group treated with Tongxinluo Capsules （Tongxinluo group）. The sham-operation group was taken as the control. There were totally 5 groups. The model group and the sham-operation group were treated with normal saline. The changes of myocardial capillary density （MCD） and number of pericapillary cells on the 7th， 28th day after medicinal administration were observed. Results On the 7th and 28th day， the MCD decreased significantly and the number of capillary pericapillary cells increased significantly in the model group compared with the sham-operation group （P
Key words：supplementing qi and activating blood circulation herbs；myocardial capillary density；number of pericapillary cells；myocardial infarction；rats
研究顯示，心肌梗死患者雖然經過搭橋或支架置入術后使梗死相關冠脈再通，或經冠脈造影證實已達TMI3級血流的梗
基金項目：國家自然科學基金（81173142）
通訊作者：郭書文，E-mail：
死相關血管，有超過25%的患者心肌組織水平的血流灌注并未恢復[1]。因此，減少缺血心肌再灌注損傷、保持心肌微血管的完整性、改善缺血心肌血供狀態、恢復心肌細胞功能，是目前研究的熱點問題。
前期的系列研究結果顯示，益氣活血方能明顯促進大鼠缺血心肌微血管生成而改善心肌缺血，并能抑制心肌細胞凋亡，對相關蛋白及細胞因子有顯著調節作用[2-4]。本研究采用結扎冠狀動脈的方法建立大鼠急性心肌梗死后心衰模型，利用免疫組織化學方法觀察模型大鼠心肌毛細血管周細胞的變化，以及益氣活血中藥對其的影響，進一步探討益氣活血中藥改善心肌血流灌注的作用機制。
1 實驗材料
1.1 動物
健康雄性SD大鼠，體質量（200±20）g，清潔級，8周齡，中國科學院動物研究所提供，許可證號：SCXK（京）2012-0001。
1.2 藥物
益氣活血藥由黃芪、人參、當歸、川芎、三七粉等組成。根據前期研究結果[5-6]選擇益氣活血藥（2∶1）的劑量組合[5-6]。依口服劑工藝制備，按處方比例稱取中藥材，加9倍量水，煎煮2次，每次2.5 h，共5 h，水煎液過濾，濃縮，加乙醇調含醇量至50%，過濾，回收乙醇，過濾，調整濃度為相當原藥材2 g/mL，北京中醫藥大學藥廠提供。
對照藥物選用通心絡膠囊，石家莊以嶺藥業股份有限公司生產，批號110723-120116；培哚普利片，施維雅（天津）制藥有限公司，批號P2009971052951。
1.3 試劑與儀器
BA3414 兔抗鼠CD34抗體（武漢博士德生物工程有限公司產品），BM0002小鼠抗α-SMA抗體（武漢博士德生物工程有限公司產品），血清內皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO），南京建成生物工程公司提供。RSP1002型小動物呼吸機（Kent Scientific Corporation）。
2 實驗方法
2.1 造模
采用左冠狀動脈前降支結扎方法[7]。用1%戊巴比妥鈉腹腔注射（40 mg/kg）麻醉后，背位固定，行氣管插管，連接小動物呼吸機，在左側第3、4肋間切開皮膚，鈍性分離肌層，打開胸腔，用開胸器推開胸腺擴大手術視野，充分暴露心臟，用帶線縫合針在左心耳與肺動脈圓錐之間于左心耳下約2 mm處，無張力的狀態下將左前降支連同少量的心肌組織一起結扎，然后迅速將心臟復位，關閉胸腔。全部手術過程在30 min內完成，嚴格無菌操作。術后連續3 d肌肉注射青霉素預防感染。以結扎部位以下心肌變灰白、搏動減弱、心電圖肢體導聯出現ST段弓背向上明顯抬高為造模成功的標志。假手術組手術過程相同，僅繞過左冠狀動脈，打松結。
2.2 分組與給藥
將大鼠按隨機數字表法分為假手術組、模型組、中藥組、培哚普利組、通心絡組。
各組于造模的第1日開始分別灌胃相應藥物，每日1次。通心絡組每日給予通心絡膠囊30 mg/kg體質量，培哚普利組每日給予培哚普利片0.72 mg/kg體質量，益氣活血組每日給予益氣活血中藥21 g/kg體質量[5-6]。各干預藥物均溶于無菌蒸餾水中，在保證藥物劑量的前提下，調整濃度使每只動物給藥容積均為10 mL/（kg?d）。假手術組和模型組每日以相同容積無菌蒸餾水灌胃。連續灌胃28 d。
2.3 標本采集
稱取大鼠體質量，用1%戊巴比妥鈉麻醉，剪開腹腔，從腹主動脈取血，分離出血清待測。然后剪斷肋骨和胸肌，暴露胸腔取出心臟，用生理鹽水洗去血污，剔除血管、脂肪等非心肌組織，從左心室最大橫徑處切開，將切好的下半部分心臟放入預先準備的4%多聚甲醛液中固定備用，進行常規組織學方法處理，制作石蠟切片。據各組大鼠在實驗過程中的成活數量分別觀察第7、28日2個時間點指標的變化情況。
2.4 心肌病理形態學觀察
將心肌組織用不同濃度酒精梯度脫水，二甲苯透明，浸蠟、包埋、切片，脫臘，二甲苯透明，HE常規染色，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹膠封固，光學顯微鏡觀察。
2.5 心肌毛細血管密度
石蠟切片脫蠟至水；3%過氧化氫室溫孵育8 min，以消除內源性過氧化物酶的活性；蒸餾水沖洗3次（每次2 min），電爐加熱沸騰后斷電，間隔7 min，反復2次，冷卻后PBS（pH 7.2～7.6）洗滌2次，滴加5%牛血清白蛋白封閉液，室溫20 min，甩去多余液體，滴加CD34一抗（濃度為1∶100），4 ℃過夜，第2日早晨滴加生物素山羊抗小鼠IgG，室溫20 min，PBS洗3次（每次2 min），滴加SABC，室溫20 min，PBS洗4次（每次5 min），DAB顯色，取1 mL蒸餾水，A、B、C試劑各加1滴，混勻后加至切片，室溫顯色，鏡下控制時間，蒸餾水沖洗，蘇木素輕度復染，1～2 s即可，梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。
2.6 免疫組化染色法檢測周細胞
石蠟包埋，切片（厚度4 ?m，每只鼠各取3張切片），脫蠟，高溫高壓抗原修復，噴氣后計時2 min，自然冷卻，水洗。4 ℃下于1∶300 α-SMA單克隆抗體孵育24 h，每張切片滴加50 ?L EnVisionTM試劑，室溫下孵育30 min。滴加新鮮配制的顯色劑（DAB），蘇木素復染。顯微鏡下觀察，胞漿顯棕黃色者為陽性細胞。按下法計數：先在100×視野下隨機選擇血管密度高的5個區和血管密度低的5個區作為計數部位，后在400×視野下計數微血管旁胞質出現棕黃色顆粒的周細胞數，每只大鼠計數20個視野，最后以平均每個視野（400×）的周細胞數表示。小動脈平滑肌細胞亦為α-SMA陽性表達，根據血管壁厚度及結構可與周細胞相區別，此類陽性細胞不在計數范圍內。
2.7 血清內皮素-1、一氧化氮測定
采用雙抗體夾心ELISA法測定各組大鼠血清ET-1、NO的變化，具體方法嚴格按試劑盒說明操作。根據各組大鼠在實驗過程中的成活數量分別觀察第7、28日2個時間點指標的變化情況。
3 統計學方法
用SPSS16.0統計軟件進行分析。一般資料采用描述性分析，計量資料以―x±s表示，計數資料以頻數及百分數描述；多個樣本計數資料用χ2檢驗，計量資料符合正態性分布采用t檢驗，如不符合正態性分布采用非參數檢驗，比較各項指標在治療前后之間的差異，多組間差異性統計采用方差分析，若方差不齊，則用Games-Howell分析，雙側檢驗。P
4 結果
4.1 模型建立情況
采用冠狀動脈結扎法致大鼠急性心肌梗死后，肢導Ⅱ導聯心電圖ST段呈弓背向上抬高，缺血心肌很快變蒼白色。共手術100只，造模成功81只，死亡19只，其中手術中死亡8只，急性心肌梗死造模成功后24 h內死亡3只，給予藥物治療后死亡3只，注射麻藥后行心臟超聲檢查后死亡5只，死亡原因為呼吸停止、室顫和大出血，造模成功率81.0%。第7日觀察大鼠42只，第28日觀察大鼠39只。
4.2 各組大鼠心肌形態學觀察
第7日：假手術組大鼠心外膜未見纖維素滲出及未見炎細胞浸潤；模型組心肌梗死區炎癥反應明顯，有泡沫狀組織細胞聚集，大量中性粒細胞浸潤，心肌纖維斷裂、排列紊亂，壞死的心肌組織由新生的肉芽組織取代；梗死區邊緣有充血、出血及炎細胞帶，心外膜有炎性及纖維素性滲出物。培哚普利組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小。通心絡組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，較培哚普利組病變范圍小。益氣活血組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，較培哚普利組及通心絡組病變范圍較小。見圖1。
第28日：假手術組大鼠心外膜未見纖維素滲出及未見炎細胞浸潤。模型組大鼠心肌梗死區由纖維母細胞、纖維細胞及致密的膠原纖維束組成，呈束狀或平行排列，膠原纖維束之間有極少殘存的心肌組織，炎性細胞浸潤明顯減少，地圖狀瘢痕組織形成；心室腔擴大，室壁變薄。培哚普利組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區有島狀或細帶狀的心肌組織。通心絡組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區有島狀或細帶狀的心肌組織，但較培哚普利組病變范圍大。益氣活血組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區有島狀或細帶狀的心肌組織，但較培哚普利組病變范圍大。見圖2。
假手術組 模型組
益氣活血組 培哚普利組 通心絡組
圖1 第7日HE染色大鼠心肌病理形態（×50）
假手術組 模型組
益氣活血組 培哚普利組 通心絡組
圖2 第28日HE染色大鼠心肌病理形態（×100）
4.3 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠血清內皮素-1、一氧化氮水平的影響
與假手術組比較，模型組大鼠血清ET-1含量明顯升高，NO水平下降（P
表1 各組大鼠血清ET-1、NO水平比較（―x±s，pg/mL）
組別 術后第7日 術后第28日
只數 ET1 NO 只數 ET1 NO
假手術組 10 5.37±1.06 31.12±2.57 9 6.38±1.73 30.38±4.00
模型組 7 13.67±1.68## 19.41±3.24## 7 14.60±2.38## 16.23±3.05##
益氣活血組 9 8.06±1.21** 41.71±4.43** 8 8.97±1.07** 40.11±5.51**
培哚普利組 8 10.65±1.12** 33.02±2.68** 8 7.30±1.37** 45.26±6.60**
通心絡組 8 9.87±0.73** 37.76±3.34** 7 9.57±1.57** 35.06±5.20**
注：與假手術組比較，##P
4.4 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠毛細血管密度的影響
在病理圖像分析系統下測定各組大鼠心肌梗死邊緣區平均毛細血管密度（MCD）。第7日：模型組較假手術組心肌梗死邊緣區MCD明顯降低（P
表2 各組大鼠心肌MCD比較（―x±s）
組別 n 第7日 第28日
假手術組 20 612.79±33.35 611.11±25.67
模型組 20 533.67±20.27## 493.27±19.38##
益氣活血組 20 1178.50±33.27** 1051.30±30.12**
培哚普利組 20 1010.10±33.27** 1099.30±33.98**
通心絡組 20 1094.30±33.12** 974.75±35.41**
4.5 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠毛細血管周細胞計數影響
第7日：模型組較假手術組心肌梗死邊緣區周細胞計數明顯增加，益氣活血中藥組、培哚普利組、通心絡組與模型組比較，梗死邊緣區的周細胞計數減少（P
表3 各組大鼠心肌周細胞計數比較（―x±s，個）
組別 n 第7日 第28日
假手術組 20 0.8±0.84 1.2±0.84
模型組 20 8.2±1.30## 14.0±1.58##
益氣活血組 20 4.2±0.84* 4.4±1.14**
培哚普利組 20 5.8±0.84** 3.6±1.14**
通心絡組 20 4.4±0.55** 5.8±1.30**
注：與益氣活血組比較，P
P
5 討論
臨床研究表明，急性心肌梗死患者多存在“氣虛血瘀”的中醫病理[8]。實驗的中藥組方中，生曬參、黃芪大補元氣、廣益五臟，針對氣虛的主要病機；三七、川芎、當歸為臣，活血通絡、止血消瘀。諸藥相合，氣行則血行，血行則氣實，諸藥合用，標本兼治，相得益彰，共奏益氣活血、化瘀通絡之功效。
冠脈微血管結構完整性與功能正常，是確保心肌收縮力儲備和局部功能恢復的先決條件，是心肌存活的必備條件，當發生微小動脈和阻力血管的功能及結構變化時，冠脈血流速率和血流儲備的變化可引起心肌缺血。低灌注梗死區和正常心肌之間的慢復流區域毛細血管內皮腫脹、突出甚至脫落，受周邊的壞死組織壓迫，毛細血管內皮細胞功能和結構完整性受損，心肌毛細血管周細胞功能失調。血管壁在結構上由血管內皮細胞和血管周圍細胞組成，它們分別構成血管的內外壁。周細胞又叫壁細胞，可以分化為巨噬細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、平滑肌細胞等，具有收縮能力，從而調節微循環的灌流量和通透性[9-10]。
有研究顯示，早期心肌缺血缺氧性壞死中周細胞數量在4 h后明顯增多，12 h后開始下降，48 h后顯著低于正常水平，推測周細胞作為心肌中的間質細胞可能是心肌纖維化發生發展中的主要效應細胞[11]。本實驗結果表明，使用益氣活血中藥后，毛細血管周細胞的計數減少，與模型組比較差異有統計學意義（P
本實驗結果顯示，益氣活血組較模型組心肌梗死邊緣區域MCD明顯增加，可見周細胞對毛細血管生長起到調控的作用。研究發現新生血管的生長和維持主要由周細胞的募集和分化所推動[12-13]。周細胞募集并伴隨發生基底膜重塑[14-15]。可見，周細胞的募集對血管新生是必不可少的。
此外，益氣活血中藥可提升內皮分泌NO水平，并相應降低ET-1水平。NO和ET-1是由血管內皮細胞分泌的一對作用相反的血管活性分子，NO的含量與生物活性的變化能夠反映內皮功能的狀態。與益氣活血組模型組比較，ET-1下降，NO升高，說明益氣活血中藥具有保護血管內皮功能的作用。
總之，益氣活血中藥可以通過降低心肌梗死大鼠毛細血管周細胞計數，維持血管的相對完整性，改善局部微循環的血流，減少梗死面積，并促進血管新生，調節NO/ET-1的平衡，從而達到改善局部心肌血供的目的。
參考文獻：
[1] Skyschally A， Leineweber K， Gres P， et al. Cornary micro enbolization[J]. Basic Res Cardiol，2006，101（5）：373-382.
[2] 黃培培，郭書文，楊蟠儲，等.心肌缺血大鼠血清TNF-α、IL-6變化及益氣活血藥對其的影響[J].北京中醫藥大學學報，2010，33（9）：614-617.
[3] 張九峰.益氣活血藥對心力衰竭大鼠心肌細胞凋亡及其調控分子的影響[D].北京：北京中醫藥大學，2011.
[4] 周劍宇.益氣活血藥防治大鼠心力衰竭心臟重塑的調節機制研究[D].北京：北京中醫藥大學，2011.
[5] 郭書文，崔巍，王碩仁，等.血管緊張素Ⅱ誘導心肌細胞凋亡與增殖的時相特征及益氣活血藥對其影響[J].中國中西醫結合雜志，2005，25（11）：1004-1007.
[6] 郭書文，王國華.益氣活血藥配合西醫治療冠心病心絞痛臨床研究[J].中國中醫藥信息雜志，2009，16（9）：12-13.
[7] 劉開宇，田海，孫露，等.標準化大鼠心肌梗死模型的制作[J].哈爾濱醫科大學學報，2007，41（6）：531-534.
[8] 易慧智，吳偉康，侯燦.中藥防治心肌缺血再灌注損傷的進展[J].中西醫結合雜志，1995，15（8）：509-511.
[9] Kurz H， Fehr J， Nitschke R， Burkhardt H. Pericytes in the mature chorioallantoicmembrane capillary plexus contain desmin and alpha- smooth muscle actin：relevance for non-sprouting angiogenesis[J]. Histochemistry and Cell Biology，2008，130（5）：1027-1040.
[10] Oishi K， Kamiyashiki T， Ito Y. Isometric contraction of microvascular pericytes from mouse brain parenchyma[J]. Microvascular research，2007，73（1）：20-28.
[11] 李永梅，任立群，王心蕊.早期心肌缺血缺氧性壞死中周細胞數量的變化[J].心臟雜志，2009，21（2），211-214.
[12] Paquet-Fifield S， Schluter H， Li A， et al. A role for pericytes as micro environmental regulators of human skin tissue regeneration[J]. The Journal of clinical investigation，2009， 119（9）：2795-2806.
[13] Lin SL， Kisseleva T， Brenner DA， et al. Pericytes and perivascular fibroblasts are the primary source of collagen producing cells in obstructive fibrosis of the kidney[J]. The American Journal of Pathology，2008，173（6）：1617-1627.
[14] Greenberg JI， Shields DJ， Barillas SG， et al. A role for VEGF as a negative regulator of pericyte function and vessel maturation[J]. Nature，2008，456（7223）：809-813.
第2篇：一周學習計劃范文
【摘要】 目的 對亞洲牛帶絳蟲成蟲延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)基因進行克隆、表達和免疫學初步研究。方法 將亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1克隆到原核表達質粒pET-28a(+)中，在大腸桿菌BL-21/DE3中用異丙硫代-β-D半乳糖苷誘導表達，表達產物通過十二烷基磺酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定，用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進行純化，用蛋白印跡法(Western blotting)進行免疫學分析。結果 PCR、雙酶切及DNA測序結果均表明重組質粒pET-28a(+)-EF-1構建成功。重組蛋白可被感染了亞洲牛帶絳蟲患者血清和豬血清識別，表明其具有免疫反應性。結論 亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1基因可在原核表達系統中獲得具有免疫學活性的表達，為進一步研究該蛋白的功能奠定了基礎。
【關鍵詞】 亞洲牛帶絳蟲；延伸因子-1；基因克隆；原核表達
ABSTRACT: Objective To clone and express the novel gene named elongation factor 1 (EF-1) of Taenia saginata asiatica in order to analyze the immunogenicity of the recombinant protein. Methods By screening the full length cDNA plasmid library， the coding region of EF-1 was amplified with PCR， and cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a(+) and then expressed in E.coli BL21 with IPTG induction. The recombinant protein was detected by SDS-PAGE and purified by Ni-IDA affinity chromatography， and its immunogenicity was analyzed by Western blotting. Results PCR， double enzyme digestion and DNA sequencing confirmed that the recombinant expression plasmid was successfully constructed. Western blot analysis of EF-1 recombinant protein testified that the recombinant protein could be recognized by immunizing the serum of swine and patient， therefore indicating its immunogenicity. Conclusion A novel gene coding EF-1 of Taenia saginata asiatica was cloned and expressed successfully. The purified protein of EF-1 will be of importance for further research on the biological function of the gene.
KEY WORDS: Taenia saginata asiatica; elongation factor 1(EF-1); molecular cloning; prokaryotic expression
亞洲牛帶絳蟲(Taenia saginata asiatica)是近30年來發現的一種成蟲形態與牛帶絳蟲相似，而囊尾蚴卻與豬囊尾蚴相似并以豬作為中間宿主的人體帶絳蟲。2006年我們在前期研究的基礎上進一步系統地開展對亞洲牛帶絳蟲在分類地位、分子診斷和疫苗等方面的研究［1-4］，為制定預防人體帶絳蟲病策略提供依據。本研究從亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA質粒文庫中篩選出一個延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)的同源基因，構建了pET-28a(+)-EF-1原核表達載體，并對其原核表達產物進行了初步的免疫學研究，為進一步研究其生物學功能奠定基礎。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 血清來源
感染亞洲牛帶絳蟲豬血清由貴陽醫學院寄生蟲學教研室提供，患者血清采自亞洲牛帶絳蟲流行區貴州省都勻市米秀鄉，健康人血清由中山大學熱帶病重點實驗室提供。
1.1.2 文庫、質粒、菌株
蟲體標本采自亞洲牛帶絳蟲流行區貴州省都勻市米秀鄉，亞洲牛帶絳蟲成蟲全長cDNA質粒文庫的構建、EST測序及Unigene 分析與上海聯合基因有限公司合作完成。原核表達質粒pET-28a(+)和大腸桿菌BL-21/DE3由中山醫學院病原生物學實驗室保存。
1.1.3 主要試劑和工具酶
Ex Taq酶(含dNTP)、EcoRⅠ、XhoⅠ、T4 DNA連接酶及DNA標準(DL2000)均購自大連寶生物工程公司；異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)購自美國Promega公司；Ni-IDA Agarose(cat No：69670)購自美國Novagen公司；蛋白分子量標準購自立陶宛MBI公司；DNA凝膠回收試劑盒、質粒純化試劑盒購自北京賽百盛基因公司；辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬IgG二抗、DAB(3，3二氨基聯苯胺)顯色試劑盒均購自武漢博士德有限公司；PVDF膜購自Millipore公司；TMB顯色試劑盒購自美國BD公司；SDS、丙烯酰胺、亞甲叉雙丙烯酰胺、過硫酸胺、尿素等試劑均購自上海申友生物科技公司。
1.1.4 引物合成和DNA測序
基因擴增引物和重組質粒DNA測序由Invitrogen上海生物技術有限公司合成。
1.2 方法
1.2.1 EF-1基因的識別
將獲得的亞洲牛帶絳蟲unigene進行Blastx分析，獲得編碼亞洲帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因文庫質粒編號為T.a HC23-E9，GenBank登錄號為EF420501的同源基因；并通過瑞士生物信息學研究所的蛋白分析專家系統(ExPASY， ca.expasy.org/)預測其理化特性。
1.2.2 EF-1基因的擴增 根據已獲得的EF-1編碼序列，利用DNAClub和PCRdesign設計引物。上游引物：CTAGAATTCATGGAGTGTGCGTTGAAGTTC，帶EcoRⅠ酶切位點；下游引物：GGGCTCGAGTTACAATTTGTTGAAGGAAG，帶XhoⅠ酶切位點。以亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA文庫中EF-1基因的克隆質粒為模板，94 ℃預變性5 min后，熱循環參數為94 ℃ 1 min，57 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，共35個循環，最后72 ℃延伸10 min。PCR產物10 g/L瓊脂糖凝膠電泳回收。
1.2.3 重組原核表達質粒［pET-28a(+)-EF-1］的構建及鑒定
將PCR產物和原核表達質粒pET-28a(+)經EcoRⅠ、XhoⅠ雙酶切后回收，連接、轉化大腸桿菌BL-21/DE3感受態細胞，卡那霉素篩選陽性克隆。對陽性克隆提取質粒進行PCR、雙酶切和測序鑒定。
1.2.4 重組蛋白的表達
將確定能表達重組蛋白的單菌落接種于5 mL LB培養基中，過夜培養后1∶100轉接到1 000 mL培養基中，培養至A600約為0.6時加入IPTG至終濃度為1 mmol/L，28 ℃、250 r/min進行誘導。誘導4 h后離心收菌，用SDS-PAGE檢測蛋白質的表達。
1.2.5 菌體的裂解、重組蛋白可溶性判斷及待純化融合蛋白上清的制備
取單菌落接種于1 000 mL含卡那霉素的LB培養基中，37 ℃震蕩培養至A600為0.6時，加入IPTG使其終濃度為1 mmol/L，28 ℃震蕩培養4 h，4 ℃離心(6 000 g×10 min)，收集菌液，按文獻［5］的方法，每克菌(濕重)加入3 mL裂解緩沖液，重懸細菌沉淀，裂解液冰上超聲破碎(160 W，超聲1 s，停2 s，超聲5 min)，4 ℃ 13 000r/min離心20 min，收集上清和沉淀，分別取上清10 μL加入4×SDS上樣緩沖液和沉淀微量加1×SDS上樣緩沖液，煮沸5-10 min后行150 g/L SDS-PAGE判斷重組蛋白的可溶性。
1.2.6 尿素變性純化重組蛋白
在得到的包涵體(超聲后沉淀)中加入A液10 mL重懸，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，棄上清，重復2次，再用B液洗滌1次，4 ℃ 6 000 r/min離心15 min。將洗滌后的包涵體沉淀加入8 mol/L尿素(溶于基礎液)18 mL放置1 h左右，沉淀完全溶解，溶液清亮透明。采用透析法，逐步降低尿素濃度(8-6-5-4-3-2-1 mol/L PBS溶液)。
1.2.7 Western blotting檢測重組蛋白的免疫反應性
將純化的蛋白進行120 g/L SDS-PAGE電泳，使用電轉移儀于100 V冰浴轉印1.5 h，將蛋白轉移至PVDF膜上，將含預染蛋白Marker條帶剪下，PVDF膜轉入感染亞洲牛帶絳蟲豬和患者血清中(1∶100稀釋)，室溫孵育2 h，PBS洗滌3次，每次5 min。然后加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬和抗人IgG(1∶2 000稀釋)，室溫孵育1 h，PBS洗滌3次，每次5 min，DAB顯色至出現目的條帶，超純水終止反應［6］。
2 結 果
2.1 生物信息學分析
該基因與細粒棘球絳蟲EF-1基因(登錄號為AAF641192.1)的氨基酸序列的一致性達87%，相似性達91%；全長988 bp，編碼區67-868，編碼269個氨基酸。理論分子質量和等電點分別是28 067.8 u和4.88［7］。
2.2 原核重組質粒的鑒定
將重組質粒進行PCR和雙酶切鑒定，產物進行10 g/L瓊脂糖凝膠電泳。結果顯示在500-1 000 bp之間有一清晰的條帶，與目的基因的大小基本相符，證明重組質粒構建成功(圖1)。
2.3 蛋白表達純化結果
將構建好的重組質粒轉化到E.Coli BL-21/DE3中表達，SDS-PAGE電泳分析結果如圖2中第4、5泳道所示，大約在34 ku左右處出現表達條帶，與目的蛋白分子量基本相符。通過破包涵體，將蛋白進行純化，結果如圖2中第6、7泳道所示，其位置與目的蛋白相符，證明目的蛋白純化成功。
2.4 Western blotting鑒定
感染亞洲牛帶絳蟲的豬血清以及感染亞洲牛帶絳蟲的患者血清對純化蛋白的Western blotting均顯示出清晰的條帶(圖3)。
3 討論
研究表明，EF-1是一種在細胞內普遍存在且大量表達的多聚體核糖體蛋白質，在基因表達、翻譯過程中起重要作用［8］。EF-1可能由α、β、γ、δ四個亞基組成，其中EF-1α屬于G蛋白家族，它和氨酰tRNA、GTP一起組成復合體，通過正確地識別mRNA上的密碼子和tRNA上的反密碼子，負責轉運氨酰tRNA 到80S核糖體，并具有低水平GTP酶的活性。EF-1β具有鳥苷酸交換活性，在EF-1α從核糖體離開并且構象由GDP形式變成GTP準備與新的AA-tRNA相互作用的過程中，需要EF-1β作為催化劑。EF-1γ常與EF-1β形成復合物，具有增加后者鳥苷酸交換的功能。至少在脊椎動物中，EF-1還有第四個亞基EF-1δ，尤其在其羧基端與EF-1β具有同源性，而在氨基端無同源性，表明它們可能具有不同的功能［9-10］。我們從亞洲牛帶絳蟲cDNA文庫中識別出了一個EF-1的全長編碼基因，其編碼的氨基酸序列與GenBank中細粒棘球絳蟲的EF-1基因 (登錄號為AAF64192.1)的氨基酸序列的一致性達87%，相似性達91%，推測其為亞洲牛帶絳蟲EF-1基因，并且含有完整的開放閱讀框，是一個全長cDNA序列。
通過生物信息學分析，該蛋白的理論分子質量為28 067.8 u，而質粒pET-28a(+)的載體標簽序列的分子質量為6 ku，所以重組蛋白的分子質量大約應為34 ku。圖2的4泳道顯示的重組蛋白條帶與預期的大小是一致的，并且條帶很濃，但從該圖的5泳道看出上清沒有表達，說明該蛋白是以包涵體的形式表達，通過尿素變性純化重組蛋白，得到了條帶很濃的純化蛋白(圖2第7泳道)。本研究為包涵體蛋白的純化積累了經驗，同時還證實了重組蛋白在純化后具有免疫反應性，獲得了具有免疫活性的重組蛋白，為進一步研究其生物學功能以及在診斷尤其是疫苗研究方面的作用奠定了基礎。
參考文獻
［1］Fan PC， Lin CY， Chung WC. Experimental infection of philippine Taenia in domestic Animals ［J］. In J Parasitol， 1992， 22(2):235-238.
［2］包懷恩. 我國亞洲牛帶絳蟲研究的現狀和展望 ［J］. 熱帶醫學雜志， 2002， 2(3):215-219.
［3］黃江，胡旭初，包懷恩，等. 亞洲帶絳蟲成蟲全長cDNA質粒文庫的構建及EST測序 ［J］.熱帶醫學雜志， 2007， 7(2)116-118.
［4］黃江，胡旭初，包懷思，等. 亞洲帶絳蟲成蟲鈣調神經磷酸酶B基因的克隆和生物信息學分析 ［J］. 中國病原生物學雜志， 2008， 3(1):56-59.
［5］薩姆布魯克J，弗里奇EF，曼尼阿蒂斯T. 分子克隆實驗指南 ［M］. 第2版. 北京：科學出版社， 2002:822-849.
［6］Harlow E， Lane D. 抗體技術實驗指南 ［M］. 第1版，北京：北京科學出版社， 2002:161-170.
［7］龐建新，黃江，胡旭初，等. 亞洲帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因的克隆和分析 ［J］. 熱帶醫學雜志， 2007， 7(6):513-515.
［8］Andersen Gr， Nissen P， Nyborg J， et al. Elongation factors in protein biosynthesis ［J］. Trends Bio Sci， 2003， 28:434-440.
第3篇：一周學習計劃范文
關鍵詞：慢性乙型肝炎；外周血；T淋巴細胞；共刺激分子；表達變化
慢性乙型肝炎源于機體細胞免疫功能紊亂，不能有效清除體內病毒，其中T淋巴細胞在主導機體免疫功能方面發揮著重要的作用[1]。筆者主要探討慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞表面共刺激分子的表達變化及臨床意義，將結果報告如下：
1 資料與方法
1.1一般資料 本次選取的40例研究對象均為南昌大學第一附屬醫院于2013年4月～2015年1月收治的慢性乙型肝炎患者作為觀察組，所有患者均知情同意，其中男29例，女11例，年齡37～68歲，平均年齡（45.3±5.6）歲；職業：教師16例、農民工4例、企業高管8例、退休在家12例。所有患者經檢查，均符合慢性乙型肝炎的診斷標準，排除神經系統障礙、嚴重心腦血管疾病、全身免疫系統疾病、凝血及造血功能障礙、甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等患者。同時選取健康患者39例作為對照組，其中男30例，女9例，年齡36～69歲，平均年齡（45.8±5.7）歲；職業：教師15例、農民工5例、企業高管9例、退休在家11例。兩組患者在性別、年齡等資料方面無顯著差異（P>0.05），具有可比性。
1.2方法
1.2.1試劑 在測定過程中，需要用到的試劑：鼠抗人CD3-APC、CD8-FIT、CTLA-4-PE、PD-1-PE熒光素標記單克隆抗體，LgG-FITC、lgG-PE、lgG-APC同型對照融血劑，由美國BD公司提供；另外需要乙型肝炎病毒及耐藥突變檢測試劑盒、HBV標志物檢測試劑盒、ALT檢測試劑盒。
1.2.2儀器 流式細胞儀、擴增儀、高速冷凍離心機、全自動生化分析儀、全自動酶免分析儀、低溫冰箱。
1.2.3測定 外周血T淋巴細胞表面共刺激分子檢測具體方法：患者晨起空腹抽取外周靜脈血3 ml，抗凝混勻后分別置于5支不同的測定管中：其中第一管加入CD3、CD8、CD28，第二管中加入單抗CD3、CD8、CTLA-4，第三管中加入CD3、CD8、PD-1，第四管中加入單抗CD3、CD8、Tim-3，第五管中加入lgG-FTTC lgG-PE lgG-APC作為同型對照管，所有試管中均加入單抗20 μl，搖勻后在常溫下狀態下放置30 min，然后加入新鮮配置的溶血劑搖勻，在光線暗處放置15 min并離心5 min，使用磷酸鹽緩沖液進行3次洗滌，并且每管中加入0.3 ml PBS，在4°C中放置后在1 d內檢測。為了使結果更加精準，輔助測定方法：并采用定時熒光定量PCR檢測技術測定血清中HBV（乙型肝炎病毒）、DNA（脫氧核糖核酸）含量；采用雙抗體夾心時間分辨熒光免疫分析法檢測乙型肝炎病毒；采用全自動生化分析儀監測丙氨酸轉氨酶含量。
1.3觀察指標 將觀察組分為為治療組、治療無效組、治療有效組，與對照組作比較。分析兩組患者外周血T淋巴細胞亞群相對表達量[2]。分析兩組患者外周血T淋巴細胞亞群絕對表達量[3]。
1.4統計學方法 采用SSPS 20.0軟件進行數據的處理與分析，表示計量數據資料，采用t檢驗，（%）表示計數資料，并進行χ2檢驗，P
2 結果
2.1患者外周血T淋巴細胞亞群相對表達量分析 觀察組三組CD4*、CD8*T淋巴細胞亞群絕對表達量均明顯下降，低于對照組 （P
2.2患者外周血T淋巴細胞亞群絕對表達量分析 CD8*T淋巴細胞亞群絕對表達量明顯高于對照組。另外未治療組、治療無效組CD4*/CD8*比值明顯高于治療有效組、對照組（P
3 討論
與對照組相比較，觀察組CD4*、CD8*等表達量出現明顯下降，另外未治療組CD4*、PD-1*表達量明顯高于對照組、治療有效組、治療無效組。總體而言，觀察組CD4*T淋巴細胞亞群相對表達量、絕對表達量均明顯低于對照組，但是CD8*T淋巴細胞亞群相對表達量升高，絕對表達量下降。研究表明，共刺激分子的絕對表達量更能反應患者的免疫功能狀態[4]。
綜上所述，進行共刺激分子表達變化研究可以為慢性乙型肝炎治療提供一定的依據，為深入評價細胞免疫功能提供了新的研究角度。
參考文獻：
[1]宋華峰.負性共刺激分子BTLA/HVEM在慢性乙肝患者外周血T細胞上的表達特性及其臨床意義[D].江蘇：蘇州大學，2014.
[2]王琳.外周血T細胞免疫功能與乙肝慢性化的相關性研究[D].江蘇：蘇州大學，2014.
[3]曹麗娟.負性共刺激分子在慢性乙肝患者外周血Treg的表達特性及其臨床意義[D].江蘇：蘇州大學，2013.
第4篇：一周學習計劃范文
胞、Th1/Th2比值、IL17+Th17細胞的量及平均熒光強度、培養上清中IL17水平均低于治療前， 而與健康對照組相比無統計學意義(P>0.05)， 且聯合治療組降低的幅度均大于MTX治療組; 治療前后Th17細胞的量與C反應蛋白(CRP)、 疾病活動指數(DAS28)的消長呈正相關(P
【關鍵詞】 關節炎 類風濕 流式細胞術 依那西普 Th亞群 Th17細胞
依那西普(etanercept)是II型腫瘤壞死因子(tumer necrosis factor， TNF)受體P75的細胞外部分和人IgG1的Fc段基因工程融合的蛋白二聚體(rhTNFR: Fc)， 可特異性阻斷TNFα與其細胞表面受體的相互作用， 實驗證實抗TNFα治療可明顯改善類風濕關節炎(rheumatoid
arthritis， RA)患者的病情［1］。TNFα除了在RA免疫發病及炎癥過程中發揮重要作用外， 尚促進IL2、 集落刺激因子(colonystimulating factor， CSF)和INFα等細胞因子的產生， 增加高親和力IL2受體的表達， 促進T細胞增殖［2］， 推測抑制TNFα可能對T細胞及其亞群有下調作用。本研究中分離依那西普治療前后RA患者及健康人外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells， PBMC)， 用細胞內細胞因子染色流式細胞術(FCM)測定Th1、 Th2及Th17細胞的表達和ELISA法測定培養上清中相應的細胞因子水平并與患者病情進行相關性分析， 旨在探討依那西普治療RA對Th細胞亞群的影響， 進一步探討此療法的免疫機制。
1 材料和方法
1.1 材料
依那西普凍干粉針劑(etanercept， 商品名益賽普) 由上海中信國健藥業有限公司生產。PerCP小鼠抗人CD4單克隆抗體(mAb)IgG1、FITC抗人IFNγmAb IgG1/PE抗人IL4 mAb IgG1及同型對照IgG1、Cytofix/ Cytoperm液及Perm/Wash液、流式細胞儀均購自美國BD公
司。FITC抗人IL17mAb IgG1及同型對照IgG1購自美國Ebioscience公司。淋巴細胞分離液購自天津TBD生物技術發展中心。佛波酯(phorbol 12myristate13acetate， PMA)、 離子霉素(Ionomycin)、 莫能菌素(Monensin)購自美國Sigma公司， RPMI1640培養液購自美國Gibco公司。抗人IL4 ELISA試劑盒、 抗人IFNγ ELISA試劑盒購于美國R&D公司。抗人IL17 ELISA試劑盒購于美國Ebioscience公司。
1.2 方法
1.2.1 RA患者的分組及處理方法
20例RA患者(男6例， 女14例， 年齡25～67歲， 平均42歲)， 為200611/200705在西京醫院門診或住院RA
患者， 均符合美國風濕病協會(ACR)1987年RA分類標準， 病程為2～20年(平均9年)。20例患者均為活動期中重度患者， 表現為6個或6個以上的關節腫脹; 6個或6個以上的關節觸痛; 并有以下3條標準中的任意2條: (1)晨僵持續時間≥45 min; (2)血沉≥28 mm/h; (3)C反應蛋白(CRP)≥20 mg/dL。患者均已服用穩定劑量的甲氨蝶呤(MTX， 每周7.5～15 mg)4周， 且未使用MTX以外其他病情緩解抗風濕藥(DMARDs)。患者隨機分為2個治療組， 每組10例。聯合治療組， 給予MTX 7.5～15 mg口服， 每周1次， 同時給予皮下注射依那西普， 每次25 mg， 每周2次; MTX治療組， 為單用等量MTX治療; 療程均為12周。另設年齡、 性別匹配的健康獻血員10名作為正常對照。
1.2.2 RA患者病情活動性及療效評價指標
記錄晨僵時間， 采用目測模擬標尺評價休息痛(VAS)， 計數壓痛關節數、 腫脹關節數(包括雙手近端指間關節、 掌指關節、 腕關節、 肘關節、 肩關節及膝關節， 共28個關節)， 記錄健康評估指數(HAQ)平均分， 魏氏法測ESR， 免疫比濁法測C反應蛋白(CRP)， 并計算疾病活動指數(DAS28)。
1.2.3 標本采集及細胞分離
分別抽取治療前、治療12周后RA患者和健康對照組外周靜脈血5 mL， 采用肝素鈉抗凝， Ficol1密度梯度離心法分離PBMC， 調整PBMC密度為1×109/L， 懸浮于含100 mL/L胎牛血清的RPMI1640培養液中， 同步取1 mL細胞懸液， 進行細胞內細胞因子染色FCM測定Th細胞亞群; 取2 mL細胞懸液加入PMA(50 μg/L)、離子霉素(1 μmol/L)置于37℃孵箱中培養過夜， 收集上清置于-70℃凍存待ELISA檢測。
1.2.4 細胞內細胞因子染色FCM測定Th細胞亞群 取上述PBMC懸液(1×109/L)置于48孔培養板內， 每孔1 mL， 并加PMA (50 μg/L)、離子霉素(1 μmol/L)和蛋白轉運抑制劑莫能菌素(2 μmol/L)以阻止細胞因子向細胞外分泌， 在37℃孵箱中培養5 h。收集細胞分為對照管和實驗管， 分別加入PercP小鼠抗人CD4 mAb IgG1 10 μL， 混勻， 室溫放置20 min對細胞表面抗原進行染色。加入Cytofix/Cytoperm液200 μL， 4℃放置20 min， 通透和固定細胞并洗滌后， 進行胞內細胞因子染色， 實驗管分別加入IFNγ mAb IgG1/PE抗人IL4mAb IgG1或FITC抗人FITC抗人IL17 mAb IgG1各10 uL， 對照管加入同型對照抗體， 4℃避光孵育30 min后。用Perm/Wash液1 mL洗滌2次， 最后以300 μL洗滌液重懸細胞， 24 h內采用FCM檢測分析。以CD4直方圖設門區分Th細胞(CD4+)， 最終以散點圖IFNγ、 IL4和IL17染色陽性表示Th1細胞、 Th2細胞和Th17細胞， 用Cellsquest軟件獲取并分析數據。
1.2.5 ELISA檢測PBMC培養上清中IFNγ、 IL4、 IL17的水平
取上述凍存PBMC培養上清， 采用ELISA法檢測上清中IFNγ、IL4、IL17水平， 具體操作按試劑盒提供的說明書進行，每個樣本和標準品均設3個復孔， 酶標測試儀450 nm處讀數。
1.2.6 統計學處理
實驗結果用x±s表示， 采用SPSS11.0軟件分析， 各組間均數首先進行方差齊性檢驗， 如滿足方差齊性， 采用兩樣本t檢驗， 如不滿足， 則采用秩轉換檢驗方法， Th1、 Th17細胞陽性率及Th1/Th2比值與病情活動指標的相關性采用Spearman相關性分析， 以P
2 結果
2.1 RA患者治療前后病情變化
兩組患者在治療12周后， DAS28較治療前降低或明顯降低(MTX治療組P
療組患者的休息痛、 晨僵時間亦有改善(P
2.2 外周血Th細胞亞群的比較
細胞膜表面標志和胞內細胞因子染色FCM測定顯示， 活動期RA患者在治療前， 其外周血中CD4+IFNγ+Th1細
胞、 CD4+IL17+Th17細胞的數量以及Th1/Th2細胞比值均分別高于健康對照組［(27.0±2.9)% vs (23.2±1.7)%， P
2.3 PBMC培養上清中IFNγ、 IL4、 IL17的變化
ELISA法測得治療前活動期RA患者PBMC培養上清中IFNγ、 IL4水平與健康對照相比差異均無統計學意義， IL17水平明顯高于健康對照組， 差異有統計學意義［(40±3.8) ng/L vs (30±2.0) ng/L， P
治療后IL17水平明顯低于治療前［(28±2.6) ng/L vs (40±3.8) ng/L， P
計學意義。聯合治療組治療后的IL17水平下降幅度明顯大于MTX對照組， 差異有統計學意義(P
2.4 Th細胞亞群陽性率與病情活動指標的相關性分析
對20例RA患者Th1、Th17細胞的量及Th1/Th2與CRP、 DAS28、 休息痛、 晨僵時間、HAQ平均分進行相關性分析， 結果顯示RA患者Th17細胞的量與其CRP、 DAS28水平呈正相關(P
3 討論
依那西普治療RA的明顯作用已被大量實驗證明［3］， 但其治療機制未明， 可能通過減少關節腔內炎細胞的浸潤， 降低滑膜中細胞黏附因子的表達， 阻斷炎性因子的相互作用而減輕炎癥［4］。既往研究發現RA發生發展與Th1、Th2細胞數量和比例失衡密切相關， 鑒于Th1細胞在RA患
者炎性關節中的聚集， 曾認為RA是以Th1細胞占主導地位的疾病， 而近年發現， RA滑膜存在產生細胞因子IL17的T細胞和滑液中高水平表達的IL17， 以及CIA動物模型證實IL17促進炎性細胞因子IL6、 TNFα的合成并參與RA的炎癥反應和骨質破壞， 提出以分泌IL17為主的
Th17細胞在RA發病中具有比Th1更重要的作用［5， 6］。本實驗檢測RA患者Th1、 Th2及Th17細胞亞群數量和比例， 試圖分析依那西普對其的影響， 進一步闡述依那西普治療機制， 為臨床提供理論依據。
本研究通過胞內細胞因子染色FCM檢測外周血中Th細胞數量和比例的變化， 發現治療前活動期RA患者Th1、 Th17細胞數量及平均熒光強度均高于健康對照組， 而Th2細胞無明顯差異， 導致Th1/Th2相對比例增高。進一步通過ELISA分析體外培養PBMC上清中相應細胞因子的水平， 證明IL17水平也高于健康對照組。研究結果提示， 在活動性RA患者外周血中， Th1尤其是Th17細胞亞群處于主導地位。與MTX組相比， 聯合治療組RA患者治療12周后， 其休息痛、 晨僵時間、 CRP及DAS28水平均明顯下降， 證實依那西普療效確實［7］。IFNγ+Th1細胞陽性率下降， Th2細胞無明顯改變， Th1/Th2比值相對下降， 提示依那西普可能通過影響Th1、Th2細胞亞群的平衡發揮作用， 推其可能是依那西普治療RA的機制之一。
聯合治療后Th17細胞陽性率及單個CD4+T細胞中IL17平均熒光強度明顯下降并接近健康對照， 且下降的幅度均高于MTX組。Th17細胞的量與RA患者CRP、 DAS28水平消長呈正相關， 提示Th17細胞可能參與RA發生發展。這些發現說明依那西普治療RA的明顯療效與Th17在RA中發揮重要作用有關。推測可能通過阻斷TNFα使前炎性因子釋放減少或反向信號抑制細胞增殖或通過caspase3途經促進T細胞的凋亡［8］， 從而下調分泌IL17的Th17細胞合成， 但二者在體內相互作用的具體途徑有待于進一步探索。
綜上所述， 本實驗表明活動期RA患者IL17+Th17細胞、 IFNγ+Th1細胞及Th1/Th2比值的增高， 可能參與RA發病機制; 依那西普治療后可明顯改善臨床癥狀和下調Th1和TH17細胞亞群， 可能通過調節Th細胞亞群治療RA。
參考文獻
［1］Maini RN， Taylor PC. Anticytokine therapy for rheumatoid arthritis［J］. Annu Rev Med， 2000， 51: 207-229.
［2］Choy EH， Panayi GS. Cytokine pathways and joint inflammation in rheumatoid arthritis［J］， New Engl J Med， 2001， 344(12): 907-916.
［3］Moreland LW， Baumgartner SW， Schiff MH， et al. Treatment of rheumatoid arthritis with a recombinant human tumor necrosis factor receptor (p75)Fc fusion protein［J］. New Engl J Med， 1997， 337(3): 141-147.
［4］Scott DL， Kingsley GH. Tumor necrosis factor inhibitors for rheumatoid arthritis［J］. New Engl J Med， 2006， 355(7): 704-712.
第5篇：一周學習計劃范文
周循環學習法如何實踐？
1、第一步：周日晚上制定周學習計劃。
根據自己總的學習進度，制定一周的目標。根據目標計算周一到周六的學習量，制定可行的、但又必須完成的學習計劃。
2、第二步：周一至周六按計劃學習。
根據計劃學習量做好每日時間管理，每日結束前確認一下計劃完成度，記錄學習日志；
3、第三步：周日徹底完成學習計劃。
把本周的學習完成情況總結一下。沒有完成的部分在周日徹底解決。一周計劃都完成了，就好好放松一下，然后做下周計劃。
一個相對完善的時間表，既要涵蓋每月的整體安排，又要包括每月以及每天、每
時的細節規劃。
復習計劃要留有余地，不要“滿打滿算”。比如，晚上7點到8點復習數學，8點開始復習英語，這樣安排就太緊了，當中應該有一個緩沖:7點到8點是數學時間，8點15分以后留給英語。這樣，數學復習完后喝口水，稍作休息，不要“連軸轉”。
而且，留有余地也可以確保上一段計劃的完成。還是以7點到8點復習數學為例，萬一時間到了，卻還差一道題沒做完怎么辦?留有15分鐘的余地，孩子就可以具體問題具體解決，而不致產生浮躁的情緒。
第6篇：一周學習計劃范文
有的同學在制定學習計劃時，只是寫上什么時間做什么，比如：6：00，起床；7：00，早讀；7：30-11：30，上課；12：00-1：30，午睡；1：30-4：30，上課；7：00-9：00，晚自習；10:00,熄燈。這樣得一份計劃太空洞，太無個性，任何人都可以適用。我們在制定計劃時，要從自己的實際情況出發，于自己的學習目標相配合。自己各科學習的基礎不同，因而制定的各科學習目標也不盡相同，那可比較薄弱，就應該作為重點攻克的目標，那么，在做計劃時就應該分配較多的學習時間。因此，在制定計劃時，不能平均使用力量，要重點突出。
學習目標一般可分為長期目標、中期目標和近期目標，相應地，學習計劃也應分為學期計劃、月計劃和周計劃及每天學習計劃。學期計劃于學期目標相對應，訂出一個學期學習的重點及各自的計劃要點；月計劃要與單元目標相對應，訂出一周的學習重點及每天的計劃要點。
2、學習計劃要與教師的教學計劃相配合
在制定每天具體的學習計劃時，要與老師的教學計劃緊密配合。具體說就是要與每天課程表上計劃要上的課相配合，與每門課老師講授進度相一致。例如，早晚自習時間學習計劃的安排，不但要于當天課堂上老師講課的內容相配合，而且還要與前一天和第二天老師的教學內容掛鉤，不要拋開教師的教學進度計劃，另搞一套。
3、學習計劃要有一定的靈活性
有的同學將每天除吃飯、睡覺以外的全部時間都安排了學習的內容，排得滿滿的，連周六、周日都不安排一定休息的時間。這樣的計劃要執行起來就相當困難了。比如，星期天，同學一來玩，必然要陪同學一起玩，計劃就打亂了。因此，計劃要有一定的靈活性，不要把時間排的太滿、太死，要留出必要的休息和娛樂的時間，還應留出一點激動時間應付可能出現的緊急情況。
第7篇：一周學習計劃范文
在整個小學階段,每個學期都要開設幾門課程,每周、每日學習的內容都不同,各主要學科都要布置課外練習,如果沒有學習計劃,就會手忙腳亂,雜亂無章,影響學習效果。教師要讓小學生明白制定學習計劃的重要性,明確學習計劃的內容,掌握制定學習計劃的方法。
學習計劃包括長期計劃和短期計劃兩種。長期計劃以一學期為宜,從總體上對各學科的學習作出全面的安排。短期計劃以一周為宜,對本周內每天的學習內容、學習目的、保障措施和作息時間作出詳細具體的安排。
學習計劃要具體、明確、切實可行,同時又要留有充分的余地,以保證計劃的靈活性和適應性。在執行中既要堅定不移,又要根據實際適當調整,目的在于使學習計劃更加切合實際,更為有效地提高學習效果。
二、預習方法的輔導
預習也叫超前學習,是指在教師上課之前,對所要學習的內容提前進行學習和理解的過程。預習既是有效的學習方法,也是良好的學習習慣。預習的方法是對第二天要講授的內容認真閱讀,仔細思考,把新的知識和以往學過的知識聯系起來,看看哪些懂了會了,哪些不懂不會,從而明確聽課的重點、難點和疑點,克服課堂學習過程中的被動性和盲目性,提高主動性和自覺性,以利于提高學習效果。
三、聽課方法的輔導
課堂是學校教育的中心環節,是學生獲得科學文化知識的主要途徑。如果小學生不會聽課,聽不懂,學不會,就會增加課后復習的困難和壓力,造成不良循環。同時由于長期積累,可能導致厭學心理,既不利于提高學習效果,也不利于心理健康。為此,在課堂教學中,要引導小學生注意以下幾點。
(1)認真聽。要求小學生聚精會神地聽講,充分理解教師講課的內容及其表達方式的含義,如節奏的快慢、聲音的高低等。
(2)注意看。要求小學生全神貫注地注視教師板書的內容,對教師用彩色粉筆標記的部分、用電化教具突出演示的部分尤其要仔細觀察,認真領會和重點記憶。
(3)多動腦。要引導小學生積極思考,要邊聽、邊看、邊思考,要與教師講課的進程保持同步,要多問幾個為什么,要把新舊知識聯系起來思考,做到融會貫通,舉一反三。
(4)主動練。在課堂上要鼓勵小學生大膽發言,勤學多練,從而加深理解,提高聽課效果。
(5)做筆記。對教師講課中的要點、難點都要簡明扼要地寫在筆記上,以備課后復習。
(6)善歸納。對教師課堂講授的內容,要抓住綱目,歸納要點,力求當堂理解。
四、復習方法的輔導
復習是指對學過的知識重新學習的過程。復習包括課后復習和系統復習兩種。課后復習的主要目的在于理解和鞏固當天學到的知識。系統復習的主要目的是對周、月、學期或學年學過的知識進行全面深入的復習,目的在于融會貫通,理解和掌握學科知識的體系。系統復習本質上是對前段學習的知識進行相對集中的再加工的過程。
課后復習的方法包括:
(1)回顧教師課堂講授的內容及其過程,目的在于弄清哪些完全理解了,哪些沒有理解,使進一步的復習具有鮮明的針對性和目的性;
(2)復習課本,目的在于深化;
(3)整理筆記,對課堂記得不完整或不準確的地方加以補充和修正,使之更加系統、完整,便于復習;
(4)對課本中不懂、不會的難點問題,查閱工具書或參考書,力求弄懂弄通,實在弄不明白的,問教師或與同學研究解決。
系統復習的方法也是多樣的。比如循環復習法,是指學過一個單元之后即及時復習,然后再學下一單元,學完第二單元之后,再把這兩個單元綜合起來系統復習,以此類推,循環至終。分配復習法,指學過的內容及時復習之后在時間上每隔一定時期回過頭來再復習,只是在時間間隔上逐漸拉長。比如上一單元講過的內容及時復習,一周后再復習,兩周后再回頭簡略地復習,一個月或一季度后再復習。事實表明,分配復習的效果優于集中復習。當然集中復習也有其優勢,比如在期末總復習時,相對集中一段時間,對學習內容中的重點、難點問題,重點突破,進行系統化的復習,也是十分重要的。
五、寫作業方法的輔導
寫作業是學生經過獨立思考,自覺、有目的地分析問題、解決問題,將學得的知識運用于實際的智力活動過程。通過寫作業可以檢查學生學習的結果,加深對知識的理解和記憶,充分發揮學生的智慧和潛力,同時也有助于培養學生的思維能力,養成良好的學習態度和學習習慣,因而教師要引導小學生掌握寫作業的正確方法。
(1)先復習后寫作業,即在認真復習、充分理解的基礎上完成作業。
(2)仔細審題,即了解題意,明確習題的目的要求,弄清已知條件和未知條件及解決問題的關鍵所在,做到心中有數。
(3)認真表述,即思路清晰,表述確切,書寫規范,答案準確,干凈利落。
第8篇：一周學習計劃范文
1.提高自己在語文、數學等方面的學習潛力。
2.加強運動，提高身體素質。
3.學會做簡單的家常菜。
二、暑假學習計劃具體方案：
1.針對自己的薄弱學科的學習態度、學習方法、學習目標進行反思，調整。
2.在家長的指導下，寫好自己切實可行的暑假生活、學習計劃。(安排好每一天復習進度的明細資料)
3.把練習卷上做正確的題目進行整理，確認自己已經掌握了哪些知識，具備了哪些運用潛力，樹立自己對本學科的信心。
4.把練習卷上做錯的題目進行整理、抄錄，打開教科書，逐題進行分析，找到錯誤的關鍵之處，進行認真的訂正后，再到教材上找到相關類型的題目，進行練習、強化。(盡可能用自己的力量解決問題)
5.遇到無法解決的困難，按教科書的學習順序進行梳理羅列。了解自己學習問題的共性薄弱點，然后能夠請老師一齊幫忙解決。
6.每周二次帶著學科的不懂之處和老師一齊分析、解決問題。回家后運用老師解決問題的方法進行自我強化練習，填補自己的學習漏洞。(這一點務必按照教材由淺入深的學習順序，切不可東一榔頭西一棒的無序)
7.每次完成習題的訂正，將錯題訂正的全過程，牢牢地記在腦海里(背出)，漸漸地構成解題方法的量的積累。
8.看名著，中高考時，會出現名著中的經典片段，看幾本必看的小說是中學生必需要做的事情之一，即可增長見識，又可陶冶情緒。
9.一星期打兩次球，游三次泳，增加運動，提高體能。(也能夠聽音樂等，做自己有興趣的事)
9.一星期跟著父母學做兩次家常菜，如炒茄子，蒸魚之類，再做一些力所能及的家務。
三、暑假計劃具體安排：
1.一星期學習五天，上午2.5小時，下午2.5小時。按一小時一節課安排好課表。
2.每一天的3點以后是運動或做家務的時間。(也能夠安排一些適宜的娛樂活動)
四、家長一齊參與孩子計劃：
1.設計好每一天的生活、學習評價表，對自己每一天的生活、學習作好評價。最新中學生暑假學習計劃最新中學生暑假學習計劃。
2.家長一周三次檢查學生的暑期生活、學習計劃執行的狀況和進度，及時幫忙解決執行中的困難。
3.家長在幫忙學生執行計劃時，也要尊重學生的要求，切不可急躁。要重視學生學習態度的調整和學習興趣的提高。
4.雙休日去看一些有益的展覽會，或參加一些有益的社會活動。
第9篇：一周學習計劃范文
20xx高一學生寒假學習計劃范文1末考試成績可以作為同學們制定學習計劃重難點復習安排的學習依據。學習的好壞最關鍵也最終取決于你的學習效率!”能學會有效率地做事，對你一生都有極大的幫助和提高。面對于中國的應試教育，你在當學生時，你必須學會兩樣：1.有效率地做事。2學會如何學習。
1、早晨合理安排30分鐘學習英語，聽網校的英語聽力，歷史和地理背誦。
2、利用2節課的時間分別完成2份寒假作業，要記住，獨立完成。
3、網校現已上傳一部分新卷子，集中一塊時間做一套。
4、下午和早晨一樣，利用2節課時間做2份寒假作業，但不可一下子貪多。要均衡、科學安排。
5、完成當天寒假作業可以安排自由活動，(如果玩電腦游戲不可超過一小時)。
6、晚上是你自由活動的時間，但要看看新聞。積累實時材料，尤其是準備學文科的學生。
7、在寒假期間有可能的話，每天讀一讀文學作品，寫一寫自己讀后的感想，字數可多可少，但不能不寫。
8、寫寒假作業的過程中，發現自己本學期知識點學習不透徹的情況下可以通過網校來查漏補缺。
提高學習效率并非一朝一夕之事，需要長期的探索和積累，同學們必須充分結合自己的特點。影響學習效率的因素，有學習之內的，但更多的因素在學習之外。高中生都有很好的自制力。首先要養成良好的學習習慣，合理利用時間，另外還要注意"專心、用心、恒心"等基本素質的培養，對于自身的優勢、缺陷等更要有深刻的認識。
20xx高一學生寒假學習計劃范文2高一上學期期末考試已經結束了，高一年級學生就要面臨高二的文理分科。高一寒假學習計劃對自身做個清晰、理性的分析，確定自身優勢，為學文、學理尋找理由就顯得頗為重要。大概方向確定后，就要明確自己所選擇的方向中，哪些學科要參加高考，哪些只需通過會考，從現在起就可以相應地制定出針對不同科目的不同“用力”方法，將自己高中的時間、精力做到合理分配。 依常規來看，多數學生會選擇學理——未來的升學、就業面相對更寬。學習理科，數、理、化就全部是考試科目，而數理化的難點都在高一。因此，高一寒假必須做的就是把上學期沒有學會的內容學明白。有一些知識的掌握是為了以后更好應對相關知識點，如果高一就出現漏洞，未來所有相關知識也都會關聯出現問題。
值得注意的是，高一的學習量很重，很多學生往往在第一學期還不太會調控。因此，高一學生第一學期的功課或多或少都會有落下的地方，這就需要利用寒假進行調整、提高、填補工作，甚至可以說，寒假能否利用好，對未來三年的狀態會產生重要的影響。
高一寒假學習計劃時間安排：
7：00 起床
7：20 洗涑完畢 之后跑步：繞樓2樓(7：20----8：00)
8：05 吃飯
8：20---8：50 背單詞
8：55---9：25 背課文
9：35---10：35 數學
10：45---11：45 英語
11：45---12：00 課外書
12：00---13：00 午休
13：10---14：10 化學
14：20---15：10 物理
15：20—16：20 語文
16：20---吃晚飯前 free
吃完飯后—21：00 六科任選
21;00—22：00 電視，電腦，課外書
20xx高一學生寒假學習計劃范文3周一至周四 ：
1、每天在小筆記本上記下10~15個單詞(包括新舊單詞)，利用自己的課余時間將其背熟，一定要掌握，而且經常拿出來復習。
2、晚飯前，先打開平臺，在“知識強化”欄目中找到當天課堂所上過的內容，認真復習，該記住的要記住。
3、晚飯后，稍作休息，完成老師布置的作業。(注意：把回家作業當考試做)
4、某一學科的一單元內容結束，應及時進行總復習，然后完成 “在線測試”里的題目。完成的不夠好的，復習一遍后重做，有做錯的題目及時掌握。
5、預習第二天要上課的內容，認真做好記錄，把不懂的問題帶到課堂上認真聽老師講解。
6、聽“同步聽力”和“在線聽力”10~15分鐘，培養一種語感。
周五：
1、同做“周一至周四”中的1、2、3點。
2、將學習過程中留下的問題在“名師答疑”中提問。
3、有空時可以先放松一下自己，聽點輕音樂、看些課外的書(通過平臺或自己買的都可以)。
周六：
1、早上起來先做些運動，鍛煉身體，然后朗讀英語或語文的文章，把一些該記的內容記住。
2、繼續完成老師布置的作業。
3、下午可打開“名師面授”，選擇一些自己薄弱的知識點聽幾遍，適當地多做一些在線測試。
4、把一周所學的復習一遍，通過“在線測試”欄目來檢查自己是否掌握。如果基礎不好的科目，學習“知識強化”。
5、針對自己的學科狀況針對性地選擇“名師答疑”的“精華區”中的問題，把它當作自己的問題，先做一遍，再看老師的解答。
周日：
除做周六的內容外，早晨或下午到分校進行學習方法交流、測試、鞏固，晚上預習下周一的課程內容。
