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大數(shù)據(jù)熱正在席卷全國，很多地方已經(jīng)著手大數(shù)據(jù)產(chǎn)業(yè)規(guī)劃。但是，以往規(guī)劃中的常見語“彎道超車”、“搶占技術制高點”、“跨越式前進”是大數(shù)據(jù)規(guī)劃需要避免的問題，急于求成會使大數(shù)據(jù)發(fā)展欲速而不達，使事情變得越來越糟。
不是所有的東西都能夠輕易地超越，大數(shù)據(jù)只是一種工具，不會解決所有的問題，其功效是要靠使用者來發(fā)揮的。而使用者則需要學習和理解，以為只要買個超級計算設備、配齊大數(shù)據(jù)軟件就能發(fā)展起大數(shù)據(jù)應用是不現(xiàn)實的，這就如同買架鋼琴就以為自己可變成郎朗一樣可笑。
設備可以跨越式配備，但應用的知識、技能、經(jīng)驗是無法跨越式發(fā)展的，沒有長期專注的努力，大數(shù)據(jù)應用想要取得成效也是不可能的。發(fā)展大數(shù)據(jù)產(chǎn)業(yè)很復雜，它是一個生態(tài)環(huán)境的建設，不能彎道超車、跨越式發(fā)展。
信息技術只會“錦上添花”不會“雪中送炭”是信息化的基本規(guī)律，大數(shù)據(jù)技術繼續(xù)延續(xù)這一規(guī)律一點也不奇怪。因為大數(shù)據(jù)能夠解決的問題不是當前用戶最急切的問題。大數(shù)據(jù)帶來的改進是精雕細刻的改進，只有部分企業(yè)才有精力和設施進行這類的改進，一個處于初級階段的企業(yè)需要解決的問題太多了，一件比一件急切、一件比一件重要，企業(yè)無法把大數(shù)據(jù)應用排在最首要的位置，如果強行推行大數(shù)據(jù)應用反而得不償失。
阻礙機構大數(shù)據(jù)應用的最大因素不是資金、設備，也不是知識與理念，而是機構存在著更重要、更有效益的事情需要做，只有當這些事情做完了，才能輪上大數(shù)據(jù)應用改進工作。大家應該清楚：大數(shù)據(jù)最擅長的是做小事情（典型的例子是啤酒、尿布的擺放），向急需“雪中送炭”的企業(yè)推廣大數(shù)據(jù)應用很不實際。
在城市，大數(shù)據(jù)產(chǎn)業(yè)規(guī)劃者、專家們最常見的建議是“投資大數(shù)據(jù)技術制高點”，但制高點戰(zhàn)略每每不成功，一個重要的原因是：產(chǎn)業(yè)技術的發(fā)展依賴于特定的生態(tài)環(huán)境，它們常常是產(chǎn)業(yè)集群的結果，是市場、生產(chǎn)與研發(fā)聚集的環(huán)境，形成競爭與合作的氛圍，制高點技術才能涌現(xiàn)，離開了這種環(huán)境的技術創(chuàng)新，很難發(fā)展與生存。
技術制高點只是冰山一角，其下面的生態(tài)環(huán)境支持才是技術發(fā)展的動力。發(fā)展大數(shù)據(jù)產(chǎn)業(yè)必須從推廣應用開始，有大量應用支持的技術開發(fā)才能生存。應用規(guī)模出現(xiàn)了，自然會創(chuàng)造出自己的制高點。
大數(shù)據(jù)產(chǎn)業(yè)有自己的規(guī)律，它是一種智力密集的服務業(yè)，很像咨詢業(yè)。咨詢業(yè)自身GDP難有大規(guī)模，其成果體現(xiàn)在用戶的業(yè)務成長上，大數(shù)據(jù)應用也是一樣，自身不容易產(chǎn)生GDP規(guī)模，但是能夠為用戶創(chuàng)造很大的間接效益。
大數(shù)據(jù)應用重要難點是數(shù)據(jù)源問題，大數(shù)據(jù)來源經(jīng)常是其它某項特殊的業(yè)務。統(tǒng)計數(shù)據(jù)是按信息需求設計的，而大數(shù)據(jù)不是，大數(shù)據(jù)是按業(yè)務需求設計的，大數(shù)據(jù)應用是業(yè)務數(shù)據(jù)的再利用，必須依賴現(xiàn)成業(yè)務數(shù)據(jù)。尋找數(shù)據(jù)源成為大數(shù)據(jù)應用的難題，大數(shù)據(jù)應用的繁榮依賴于可公開的數(shù)據(jù)源的豐富程度。
一個產(chǎn)業(yè)能否繁榮要看其有無發(fā)展的機制，發(fā)展依賴于正反饋的良性循環(huán)機制，即產(chǎn)業(yè)的增長要能產(chǎn)生更大的促進增長的力量，這樣才能出現(xiàn)繁榮。產(chǎn)業(yè)集群非常關鍵，市場、服務、開放的聚集是促進產(chǎn)業(yè)良性循環(huán)的關鍵。政府支持某些應用開發(fā)效果不大的重要原因，是形不成正反饋機制，單純的示范工程對企業(yè)的吸引力不大，企業(yè)總是見利而動，效益是推動應用繁榮的關鍵。
大數(shù)據(jù)產(chǎn)業(yè)能否生存，關鍵不是技術，也不是資金，關鍵是用戶有沒有獲得真正的效益。用戶效益是核心要素，用戶有效益才能反饋，進而形成造血機制。產(chǎn)業(yè)規(guī)模是由受益者規(guī)模決定的，沒有足夠的大數(shù)據(jù)受益者人群，就沒有大數(shù)據(jù)產(chǎn)業(yè)持久的經(jīng)濟來源，創(chuàng)造受益者規(guī)模是發(fā)展大數(shù)據(jù)產(chǎn)業(yè)的最核心措施。
全省要推的“兩考合一”沈陽已實現(xiàn)
推行初中學業(yè)水平考試后，將實現(xiàn)一考多用，讓初中畢業(yè)、高中招生“兩考合一”，各地學校不得再另行組織初中畢業(yè)考試和高中招生考試。據(jù)了解，目前沈陽市已經(jīng)實現(xiàn)了“兩考合一”。
初中學業(yè)水平考試科目將覆蓋國家義務教育課程方案規(guī)定的所有科目，其中語文、數(shù)學、外語(含聽力口語測試)、道德與法治、歷史、地理、物理、化學、生物、體育與健康、音樂、美術、信息技術等13科作為考試科目;綜合實踐、地方課程、校本課程等作為考查科目。
考試內(nèi)容將注重引導深化課程改革、推進素質(zhì)教育，聯(lián)系社會實際與學生生活經(jīng)驗，增強考試內(nèi)容的基礎性、系統(tǒng)性及綜合性。各學科試題的難易程度按低、中、高三檔劃分，試題的分值比例為7∶2∶1。命題采取省、市分級負責方式進行，計入高中學校招生總分的科目委托省招考辦組織命題，市里統(tǒng)一組織考試。
物理、化學動手實驗操作將占20分
為減輕學生課業(yè)負擔，不同科目考試方式不同。省教育廳有關負責人介紹，語文、數(shù)學、外語、道德與法治、歷史、地理實行紙筆考試;物理、化學、生物采用紙筆考試和實驗操作方式進行，值得注意的是，實驗操作將在“物化綜合”考試總分120分中占到20分，物理、化學實驗操作各10分;物理和化學、生物和地理、道德與法治和歷史的紙筆考試采取同場分卷方式進行，道德與法治和歷史實行開卷考試;外語聽力口語測試采用人機對話的方式進行;體育與健康、音樂、美術科目采取過程性評價與結論性評價相結合的形式，以紙筆開卷考試和技能考試相結合的方式進行;信息技術考試采取上機操作方式進行;綜合實踐、地方課程、校本課程等考查科目，由各市根據(jù)課程方案和課程標準要求，采取過程性評價與終結性評價相結合的方式統(tǒng)籌安排?！皩W完即考”且全省統(tǒng)一考試
考試時間按照“學完即考”的原則，實行全省統(tǒng)一考試。生物、地理考試安排在學生八年級學年末或九年級學年末進行;物理、化學實驗操作考試安排在九年級下學期進行;外語聽力口語測試在九年級下學期進行。
語文、數(shù)學、外語(含聽力口語測試)、物理、化學、體育與健康、道德與法治或歷史、生物或地理等科目計入學業(yè)水平考試總分。其中，語文150分(漢字書寫考試賦分不低于3分)，數(shù)學150分，外語120分(100分筆試+20分人機對話)，物化綜合120分(100分筆試+20分實驗操作，100分筆試中物理為60分、化學為40分，20分實驗操作中物理、化學各10分)，體育與健康60分。
高中將有一定數(shù)量的自主招生名額
《實施意見》指出，將進一步完善自主招生政策。給予有條件的高中階段學校一定數(shù)量的自主招生名額，招收具有學科特長、創(chuàng)新潛質(zhì)的學生，推動高中階段學校多樣化有特色發(fā)展，滿足不同潛質(zhì)學生的發(fā)展需要。嚴格規(guī)范自主招生辦法和程序，將自主招生的各個環(huán)節(jié)和錄取結果向社會公開，接受社會監(jiān)督。
生物地理由各市選擇一科以分數(shù)呈現(xiàn)
值得注意的是，《實施意見》提出，道德與法治、歷史二科，地理、生物二科，各市須結合本地實際，分別選擇一科以分數(shù)呈現(xiàn)，均為50分(二選一科目也可以采用等級方式呈現(xiàn)，然后各市依據(jù)等級每科以適當分值計入總分)，所有文化課計分科目總分不超過700分。未選擇計分的科目均采取等級呈現(xiàn)的方式，一般分為A、B、C、D、E等若干等級，各等級的劃分由各市根據(jù)本市初中考生數(shù)量和高中招生計劃合理確定。
目前，遼寧省各市中考具體政策略有差異，從沈陽市來看，語文120分、數(shù)學120分、英語120分、理綜合150分、文綜合100分，生物、地理90分(初二已考)，文化課計分科目總共是700分，再加上體育60分，全部總分就為760分。這里道德與法治和歷史兩科不是選擇一科以分數(shù)呈現(xiàn)，而是同場合卷開卷考試，生物、地理也不是選擇一科以分數(shù)呈現(xiàn)，而是同場合卷考試。
逐步打破以考試成績作為招生標準
我院2000年10月~2006年11月收治腕屈側切割傷236例，其中早期處理不當造成的誤診誤治患者10例，在我院行二次手術，現(xiàn)分析失誤的原因及治療體會如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料：本組10例，男7例，女3例，年齡17~45歲，平均36例。致傷原因：刀砍傷2例，玻璃割傷5例，銳器刺傷3例。
1.2 誤診、漏診情況：醫(yī)生漏診8例，其中尺神經(jīng)損傷2例，正中神經(jīng)損傷3例，環(huán)指指深屈肌腱損傷2例，掌長肌腱斷裂1例。二次手術時發(fā)現(xiàn)早期手術操作失誤，指深屈肌腱漏接4例，其中環(huán)指指深屈肌腱2例，拇長屈肌腱1例，食指指深屈肌腱1例。錯接4例，環(huán)指指深屈肌腱與正中神經(jīng)吻合1例，掌長肌腱與正中神經(jīng)吻合2例，結扎尺動脈時連同尺神經(jīng)一同結扎1例。早期診斷為正中神經(jīng)、掌長肌腱損傷，結果未能一期吻合正中神經(jīng)，延誤治療時機2例。
1.3 手術方法：在臂叢神經(jīng)麻醉下，上臂捆扎氣壓止血帶，做腕部S型切口，適當擴大切口，保證術野清晰，常規(guī)清創(chuàng)探查，切斷誤接錯接的肌腱、神經(jīng)，并做好標記，損傷的肌腱用改良Kessler法修復，用4/0線縫合，5/0線修復腱周組織，正中神經(jīng)、尺神經(jīng)斷端修整后，在顯微鏡下用7/0無損傷線做外膜縫合，用腓腸神經(jīng)移植修復尺神經(jīng)1例，注意微創(chuàng)操作。術后石膏托外固定4周，3天后開始進行被動屈指、主動伸指訓練，拆石膏托后主動練習手指功能，配合理療等對癥治療。
2 結果
本組10例，經(jīng)過二次手術，7例手部功能滿意，3例手部功能部分受限，合并有神經(jīng)損傷患者愈合較差，功能恢復不甚滿意。
3 討論
3.1 漏診原因：本組腕部屈側組織損傷多為銳器損傷，常同時損傷肌腱、神經(jīng)，由于早期處理不當，造成術后功能恢復不佳，分析原因如下：（1）腕部切割傷的診斷較容易，醫(yī)生主觀上不夠重視，或是醫(yī)療條件限制，往往在小清創(chuàng)室局麻下手術，無良好的麻醉，不綁止血帶，手術視野不清晰，在有血情況下操作，影響徹底清創(chuàng)探查手術，造成漏診。（2）術前未能全面檢查，導致漏診。（3）解剖不熟悉，導致誤將肌腱與神經(jīng)、不同的肌腱遠近端接錯，甚至將肌腱、神經(jīng)漏接。
3.2 防止誤診誤治的治療措施
3.2.1 首先要樹立醫(yī)生的高度責任感，在思想上高度重視這種切割傷的處理，充分認識腕掌側解剖的復雜性，損傷的多樣性，切忌不能草率行事，對損傷情況估計不足，造成誤診誤治，同時要加強手外科專業(yè)的培養(yǎng)和顯微外科基本技能的提高。要遵循無血、無創(chuàng)、無痛的手術原則，采用顯微外科技術進行修復，重視止血帶的使用，在無血的清晰視野下操作，才能正確辨認各種組織損傷情況，盡可能應用無創(chuàng)傷技術，精確的銳性分離和無創(chuàng)縫合，更好的保證手部功能的最大限度恢復。
3.2.2 術前對組織損傷的正確判斷：術前要詳細詢問病史，了解致傷物、受傷機制、損傷性質(zhì)及體格檢查情況進行初步診斷，仔細檢查相關體征，如手休息位有無改變，畸形的程度，手內(nèi)外肌功能，手指活動、感覺及血運情況，結合嫻熟的局部解剖學知識，以明確診斷。腕掌側解剖結構復雜，切割傷后應該想到正中神經(jīng)、尺神經(jīng)和肌腱的損傷情況及層次，傷口的深淺、方向等，綜合各項檢查，積累豐富的臨床經(jīng)驗，對傷情和組織損傷的程度做出正確、全面的分析判斷，預見術中可能遇到的困難，制定正確的手術方案，有條不紊地進行手術。向患者及家屬詳細交待病情及可能出現(xiàn)的情況，享有疾病的知情權，配合治療，避免醫(yī)療差錯和糾紛的發(fā)生。
關鍵詞：柱切技術 組分分離 色譜 抑制劑 在線分析
一、引言
氣相色譜法作為一種高效、高靈敏的分離分析方法，在石油、化工等行業(yè)的在線控制分析中得到廣泛應用。如在環(huán)氧乙烷的生產(chǎn)工藝中，乙烯和氧的反應中會出現(xiàn)生成水和二氧化碳的副反應，副反應的生成不僅影響環(huán)氧乙烷的產(chǎn)量，還影響催化劑的壽命。工藝以添加適當抑制劑來抑制副反應的生成，抑制劑的含量會影響反應的生成，檢測其含量就尤為重要。環(huán)氧乙烷工藝生產(chǎn)氣中有乙烯，氧氣，甲烷，氮氣，環(huán)氧乙烷，水，二氧化碳，乙烷，氬氣九種組分和一些雜質(zhì)。抑制劑采用一氯乙烷，在反應中還會生成氯甲烷，氯乙烯，氯丙烷，二氯乙烷。抑制劑的含量為ppm級，要想在多組分中快速分離出來，無干擾連續(xù)分析，色譜儀柱切技術的應用就尤為必要。
二、柱切實現(xiàn)過程
1.在工業(yè)氣相色譜中，柱切技術的實現(xiàn)通常的硬件配置為：取樣閥、定量管、預分柱、柱切閥、分離柱、檢測器等。取樣閥：位于色譜氣路系統(tǒng)的初級，與被測樣品接觸，可通過閥的開關狀態(tài)實現(xiàn)樣品被定量采集和定量注入色譜柱的部件。定量管：通常是一段容積固定的微小管道，可做為被測樣品稱量容器，通過取樣閥的動作來實現(xiàn)樣品注入色譜柱的管道。對于液相樣品來說，定量管通常不是管道，而被其它稱量形式取代。預分柱：具備保留非測組份并能溶出被測組份的色譜柱。通常預分柱很短，不能實現(xiàn)對被測組份的徹底分離。分離柱：能夠?qū)⒈粶y組份徹底分離的色譜柱。通常要比預分柱長1～4倍，可以提供較高的柱效和組份針對性。檢測器：可以對被測樣品進行定量測量的部件，最終將氣體濃度轉變?yōu)殡娦盘栞敵?。常用的檢測器有TCD（熱導型檢測器）FID（氫火焰離子檢測器）FPD（火焰光度檢測器）而這一系列部件是通過取樣閥和柱切閥的開關狀態(tài)給予了不同的組合。這種氣路的切換組合就叫柱切。
2.典型的柱切組合有下面三類。（1）、反吹：在預分柱中，非測組份的保留時間大于被測組份，在被測組份完全脫離預分柱時，利用柱切技術，將預分柱內(nèi)非測組份反向吹出預分柱的一種柱切方式。（2）、前吹：在預分柱中，若非測組份的保留時間小于被測組份，利用柱切技術將其向前直接吹出柱外而不進入分離柱的一種柱切方式。（3）、中心切割：在某兩類組份的分子量和沸點都很接近情況下，并且其中一種組份體積比例遠遠大于另一種組份時，為了分離體積比小的組份，要利用柱切技術將該組份切割出來，再進入分離柱繼續(xù)進行分離的柱切方式。
3.現(xiàn)以西門子工業(yè)色譜為實例，其采用了反吹和中心切割的柱切組合。
3.1氣路設置。西門子工業(yè)色譜設置了CR2 、SR2 ； CR1 、SR1相互不干擾兩路并行氣路。如下圖：CR1 、SR1 組成的氣路，CR2 、SR2組成的氣路。
3.2閥位時間動作設置如圖：
第一路SR1 0s開，30s關。動作的作用是SR1閥在0s時打開，進入SR1-2和SR1-9之間的定量管的樣品隨載氣經(jīng)過SR1-8進入色譜柱R1-1進行樣品進樣初步分離，再經(jīng)過SR1-5，SR1-4進入色譜柱R1-2進行在分離，然后經(jīng)過CR1-10和CR1-9進到S檢測器上，不需要的組分被前吹掉。這是樣品反吹階段。時間持續(xù)30s，30s后結束。在這其間CR1是關閉的。CR1 55s時開，100s時關。動作的作用是在0到55s時，在0-30s樣品反吹階段。55-100s這段時間CR1閥開，樣品就會進入CR1-10和CR1-1進入色譜柱R1-3進行組分分離，然后進入FID檢測器進行分析。這是樣品進樣階段。100s 后CR1閥關閉，樣品又進入反吹階段。進樣反吹的整個過程，首先使用SR1閥進樣0-30s ，進樣后會在FD的S檢測器檢測出一未完全分離開的合峰，觀察此大峰的結束時間，在近結束時間點將CR1 閥打開，切入一小部分樣品進R1-3色譜柱。在R1-3主分柱進一步分離， HC PAMP 是MCL VCL ECL等峰的合峰，中心切割進入R1-3色譜柱進一步分離，最終進入FID檢測器進行分析。
第二路SR2 300s開，362s關。動作的作用是SR2閥在300s時打開，進入SR2-2和SR2-9之間的定量管的樣品隨載氣經(jīng)過SR2-8進入色譜柱R2-1進行樣品進樣初步分離，再經(jīng)過SR2-5，SR2-4，在經(jīng)過CR1-10和CR1-9進到S檢測器上，不需要的組分被前吹掉。CR2330s時開，360s時關。動作的作用是在330到360s時，在300-330s樣品反吹階段。330-360s這段時間CR2閥開，樣品就會進入CR2-10和CR2-1進入色譜柱R2-2進行組分分離，然后進入FID檢測器進行分析。這是樣品進樣階段。360s后CR2閥關閉，樣品又進入反吹階段。進樣反吹的整個過程，首先使用SR2閥進樣300-330s ，進樣后會在FD的S檢測器檢測出一未完全分離開的合峰，觀察此大峰的結束時間，在近結束時間點將CR2閥打開，切入一小部分樣品進R2-2色譜柱。在R2-2主分柱進一步分離， HC PAMP是ACL、EDCL等峰的合峰，最終進入FID檢測器進行分析。
三、柱切技術的優(yōu)勢
柱切技術的優(yōu)勢在于除去有害組份，保護色譜柱和檢測器。是指因為某一個或某一類組份自身的物理或化學性質(zhì)原因，或因在樣品中占有的體積比例過大，不適合進入分離柱參與組份的分離。若此類組份進入分離柱或檢測器，可能造成色譜柱的短期或長期的中毒，甚至失效。某些極端情況，會損壞某些檢測器。使不測量的組份不經(jīng)過分離柱，以縮短分析時間。選用不同長度和不同填充物的柱子，進行有效的分離，縮短分析時間。吹掉不測定的而又會因自身擴展影響小峰的背景峰以改善組份的分離度。即最長時間、最大效能的發(fā)揮色譜柱和檢測器的功能；最短時間、最合理的組份分離；最精確的組份測量。
關鍵詞：FastCAM 切割效率 精度 CAD放樣
一、引言
FastCAM軟件是上世紀70年代由澳大利亞發(fā)思特公司研發(fā)的一款切割套料轉換軟件，并經(jīng)過不斷的升級和創(chuàng)新，在機械加工業(yè)和裝備制造行業(yè)中，得到了廣大用戶的高度認可。我容器結構廠在烷基化反應器斜錐下料過程中，通過CAD制圖軟件對無法編程的零件進行放樣，然后利用FastCAM進行套料轉換。從而實現(xiàn)了數(shù)控等離子切割，不但提高了下料的精度和效率，同時也大大提高了鋼材的利用率。以下來介紹一下我們在生產(chǎn)中對FastCAM使用中的一些體會。
1.FastCAM對CAD文件的高度識別：
FastCAM在套料過程中可以完美的和CAD繪圖軟件相結合應用到實際生產(chǎn)中，由于套料軟件自身所帶的繪圖功能操作具有局限性，利用CAD繪圖軟件對我們所需要的零件進行放樣，但是在生產(chǎn)中我們會經(jīng)常發(fā)現(xiàn)，我們畫好的CAD圖形在套料圖形導入后，會發(fā)現(xiàn)導入套料模板的圖形會出現(xiàn)很多引入線和引出線，這是因為我們在繪制CAD圖形時，沒有使一些線條相交或者存在殘留繪圖痕跡所致。此時，就需要我們返回DFX文件檢查修改，再次確認尺寸，然后再進行套料即可。
2.FastCAM在實際中的使用流程：
二、套料軟件在斜錐下料中的實際應用
1.實現(xiàn)套料圖形的轉換
利用FastCAM套料轉換軟件可以將CAD進行放樣好的圖形以DXF的形式保存并進行轉換，通過套料轉換后形成的TXT文檔代碼可以由數(shù)控切割機識別生成斜錐放樣時的圖形，從而實現(xiàn)數(shù)控切割。
2.利用數(shù)控等離子進行切割
數(shù)控等離子具有切割速度快、切割割縫齊、切割精度高、氣割材質(zhì)廣泛等諸多特點，在壓力容器制造中，經(jīng)常需要切割一些不銹鋼材質(zhì)，形狀不規(guī)則的配件，利用FastCAM功能，可以在數(shù)控切割機上實現(xiàn)復雜配件的下料，從而大大提高了下料精度和下料效率，在斜錐的下料切割中，等離子切割速度達到了1000mm/min。
3.提高了板材在下料中的利用率
FastCAM套料轉換軟件兼容了自動套料和手動套料功能，利用自動套料，只需將參數(shù)設置好，導入所要切割零件的圖形，即可完成套料轉換；在通常情況下，我們需要在同一張板材上先套入我們需要切割的主要切割零件，手動調(diào)整好套料位置后，再利用板材空余的地方套入我們需要的一些小的零部件，從而使板材的利率大大提高。
[關鍵詞] 晚疫病 防治技術
[中圖分類號] S436.412 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2014）07-0039-01
近幾年我縣搭建了大量日光溫室，主要定植作物是番茄，通過連坐晚疫病是重要病害之一。本文對番茄晚疫病的防治進行了較為詳細的描述，實踐證明，該技術在我縣日光溫室番茄的日常管理、生產(chǎn)中是可行的。
一、發(fā)病癥狀
該病大發(fā)生時短期內(nèi)常使植株成片枯死，造成大面積減產(chǎn)，甚至毀種無收。該病苗期、成株均可發(fā)生。幼苗染病，葉片上現(xiàn)暗綠色水漬狀病斑，病斑由葉片向主莖擴展，造成莖變細并呈黑褐色，致幼苗萎焉或倒折。該病主要危害果實和葉片，也侵染莖桿。葉片感病，多從植株下部葉片的邊緣或葉尖開始，病斑初呈水浸狀暗綠色，半圓形，近圓形或不規(guī)則形，擴大后呈褐色或暗褐色，高濕時病健交界處長出稀疏的白色霉層，即病菌的孢子梗和孢子囊；果實染病，病斑呈水浸狀不規(guī)則的云紋斑，后變?yōu)樯詈稚?，邊緣明顯病部表面堅硬而不平整，潮濕時，在病部破傷處長出白色的霉層；莖桿發(fā)病，多見于病葉多植株，初為長條形水漬狀病斑，隨著病情的發(fā)展，病部凹陷呈黑暗色，常導致病部以上的枝葉萎焉枯死。
二、發(fā)病原因
番茄晚疫病的病菌在條件適宜時，由棚膜水滴滴濺或灌水迸濺至植株下部葉片，果實上引起發(fā)病，形成中心病株，中心病株出現(xiàn)后，由氣流傳播使病害向四周擴展蔓延，往往十多天內(nèi)整棚番茄就會普遍生病。因此，番茄晚疫病是由點（中心病株）到片（病株周鄰的發(fā)病）再到面（整棚發(fā)?。┲敝恋綒锝^收。另一方面，晚疫病先由溫室前部番茄發(fā)病（由于前部晝夜溫差大，露水多），隨后向中后部擴展蔓延，最后整棚發(fā)病。
晚疫病病菌在較低溫度（10-13℃）和高溫（空氣相對濕度85%-97%）條件下容易發(fā)生。葉面有水滴是發(fā)病的決定條件，一般在白天溫暖但不超過24℃，夜間冷涼但不低于10℃，早晚霧大露水多或連日陰雨雪，棚內(nèi)空氣濕度長時間在75%-100%時，晚疫病就會發(fā)生并容易流行。凡是地勢低洼，土質(zhì)粘重，灌水過多過量，植株茂密徒長，偏施氮肥，搭架、打杈、去除老葉和吊蔓不及時，病害都會加重發(fā)生。
三、傳播途徑和發(fā)病條件
干旱炎熱或過于寒冷的天氣，病原以卵孢子、厚垣孢子或菌絲體存活。潮濕寒冷的天氣菌絲體和游動孢子產(chǎn)生較多，使病害進一步擴展。當土壤潮濕而溫度適宜時病菌借氣流或水霧（水滴）從番茄的氣孔、傷口或表皮直接侵入，也可從莖的傷口、皮孔侵入，在棚中形成中心病株，經(jīng)多次重復侵染，引起該病流行。在耕作穩(wěn)定的情況下，發(fā)生危害情況主要受氣溫和濕度的影響。溫度適宜，濕度高利其發(fā)生，20-23℃，菌絲在寄主體內(nèi)繁殖速度最快，潛育期最短。日光溫室白天22℃左右，相對濕度高于95%，持續(xù)8小時，夜間溫度10-13℃，葉面結露或葉緣吐水持續(xù)12小時，致病疫霉菌即可完成侵染發(fā)病；氣溫15-20℃，相對濕度超過80%，2小時晚疫病便可嚴重發(fā)生。
近年來，隨著我縣日光溫室番茄面積不斷擴大，茬次不斷增加，各個地方積累了大量的足夠的菌源，只要出現(xiàn)澆水過大，排水不良或密度過大，溫室內(nèi)放風不及時或施用氮肥過量，不論是露地還是日光溫室，不論是反季節(jié)的番茄還是長季節(jié)栽培的番茄都會發(fā)生晚疫病。
四、防治方法
1.農(nóng)業(yè)防治
選用德奧特7728、格瑞特、安娜、勞斯特、凱利198、保羅塔、佳粉15、毛粉802等抗病性較強的品種；及時清除棚內(nèi)病葉、病果及病株殘體。
2.生態(tài)調(diào)節(jié)
高壟覆膜栽培，采用膜下小水暗灌，注意合理灌水，切忌大水漫灌，灌水后及時排濕，適時放風并逐漸加大放風量，降低棚內(nèi)濕度，控制病害發(fā)生；施足基肥，多施有機肥和磷鉀肥，少施氮肥，防止植株徒長，增強植株后勁；加強栽培管理，合理密植，及時吊蔓、整枝，改善通風透光條件；加強溫室溫度、濕度、光調(diào)控管理，創(chuàng)造一個有利于番茄生長，而不利于病害發(fā)生的條件；尤其是陰天也要拉簾利用散射光，并進行短時間換氣后在密閉分口提溫。
3.藥劑防治
【關鍵詞】預算 管理 企業(yè)
1. 企業(yè)預算管理機制存在的問題分析
1.1重編制，輕控制，對全面預算管理的認識不到位。首先，有些企業(yè)沒有充分認識推行全面預算的重要性，認為預算管理就是成本控制的“變異”，實質(zhì)和以往沒有什么太大的變化，資金預算、財務預算等觀念相對薄弱，簡單的認為預算就是成本控制；其次，部分企業(yè)把預算當作是對生產(chǎn)的限制，沒有站在確保完成企業(yè)經(jīng)營戰(zhàn)略目標的高度去統(tǒng)籌安排生產(chǎn)經(jīng)營工作，使管理者往往只注重短期的經(jīng)濟效益，而忽視了長期經(jīng)營目標；第三，由于受傳統(tǒng)思維觀念的影響，對預算管理的職責不清晰，“管生產(chǎn)”的不“管經(jīng)營”，“管經(jīng)營”的不能有效的主導經(jīng)營成本，業(yè)務管理與財務管理“偏離軌道”，企業(yè)生產(chǎn)和經(jīng)營管理沒有形成合力。
1.2預算編制目的不明確，科目設置不合理。預算編制目的不明確在預算編制上的集中體現(xiàn)是預算的分類不科學。預算科目不能準確、全面地反映政府事權和收支全貌。大量體現(xiàn)政府職能的收支在預算科目中沒有反映。而且科目分類標準不統(tǒng)一，按經(jīng)濟性質(zhì)和政府職能交叉分類，邏輯關系不清，體系較為混亂。
1.3重行政命令，輕科學管理?，F(xiàn)在一講預算執(zhí)行，就是硬性包干，有的都上長升到了政治的高度。不接受方案就換人成為了一句常用的管理禪語。這種簡單、粗暴的工作方法雖然易于操作，由于過分強調(diào)行政命令，沒有按經(jīng)濟規(guī)律辦事，造成了口服心不服、表服內(nèi)不服的后果。也使預算的科學性、合理性受到置疑。更重要的是，這種缺乏科技含量的管理手段，嚴重地打擊了各級干部群眾執(zhí)行預算的主觀能動性，與以科學管理為代表的現(xiàn)代企業(yè)管理格格不入。
1.4預算管理的績效評價體系不完善，忽視預算的激勵作用?？冃гu價是全面管理的重要環(huán)節(jié)，預算缺乏有效的考核和激勵措施影響企業(yè)預算目標不能充分實現(xiàn)的重要原因之一?？己伺c獎罰是全面預算管理的生命線，只有通過科學合理的考核，做到獎罰分明，才能有效的做到全面預算管理。但是目前，部分企業(yè)“權責利”不明確，導致全面預算管理的控制效用不能得到充分發(fā)揮，對全面預算管理的績效評價指標主要限于財務指標，而不重視非財務指標的影響，因而不能全面反映企業(yè)的實際運行情況和職工的工作業(yè)績，導致業(yè)績評價不公平，從而挫傷了員工的積極性，致使員工產(chǎn)生抵觸的情緒，最終導致了全面預算的失敗。
2. 完善預算管理機制，切實打造企業(yè)管理新氣象
2.1建立預算調(diào)節(jié)機制。預算不是一成不變的，會因環(huán)境、時間等因素的變化而發(fā)生變化。因此必須對預算進行及時調(diào)整。但這種調(diào)整不是隨意的，要建立一種規(guī)范的調(diào)節(jié)機制。包括預算追加、追減的動因、時間、權限、原則、程序、方法等。追加和追減必須有相應的“可行性計劃書”，充分論證預算調(diào)整的原因，并經(jīng)過各級預算組織的評估。預算調(diào)整一般分為預算事項的應急調(diào)整和季度調(diào)整，應急事項是指不及時進行調(diào)整就會影響生產(chǎn)和經(jīng)營，一般是每月調(diào)整一次，但這種調(diào)整不是經(jīng)常的，有嚴格的標準；季度調(diào)整是對重大事項的調(diào)整。
2.2完善和創(chuàng)新預算控制評價分析與信息反饋機制。從評價指標設計來看，影響中小企業(yè)戰(zhàn)略和目標實現(xiàn)的不僅僅是財務因素，還包括非財務因素。因此，在設置和選擇評價指標時，首先應該考慮能夠反映中小企業(yè)戰(zhàn)略和目標實現(xiàn)影響因素的指標；其次應該既包括財務指標又包括非財務指標。另外，評價指標應該根據(jù)管理層次、工作性質(zhì)、承擔任務等條件的不同而不同。從評價方法來看，評價方法不但要應用定量評價，而且要應用定性評價；不僅要應用綜合評價，而且要應用動態(tài)評價；不但要采用水平分析，而且要采用結構分析、比率分析和因素分析等方法。在具體應用時要靈活掌握，針對不同的分析對象采用不同的方法。
2.3樹立“以企業(yè)戰(zhàn)略為導向?qū)嵤╊A算管理”的新理念，加強對預算管理的認識。預算管理是企業(yè)管理的核心內(nèi)容。應樹立全新的預算理念，第一，企業(yè)成員要加強學習和交流，將企業(yè)經(jīng)營計劃與預算管理區(qū)別開來；第二，企業(yè)要明確的長遠戰(zhàn)略的指導思想，加強預算管理的計劃性，實行預算管理的科學性；第三，要改變傳統(tǒng)的認為企業(yè)預算管理只與財務會計人員和部門相關的錯誤觀念，明確企業(yè)預算管理是各級企業(yè)成員的共同職責；第四，明確正確的思想認識和人員因素對企業(yè)預算管理的決定作用，在企業(yè)實行預算管理的過程中，需要企業(yè)全體員工的共同努力和協(xié)調(diào)發(fā)展。
2.4以完善制度為重點，強調(diào)企業(yè)發(fā)展與民主管理的結合。企業(yè)發(fā)展要達到既短期升值，又能實現(xiàn)長期分紅的目標，完善制度是基礎，民主管理是方向。一是要摒棄只顧眼前不講長遠、只重顯績不重潛績的發(fā)展模式，政策、制度的強化、細化要有可持續(xù)性，不要按下葫蘆浮起瓢,甚至按下一個葫蘆浮起幾個瓢。二是要強化民主管理，提高群眾在財務管理中的參與性。俗話說，“橫拿竹竿是走不出森林的”。像油田這樣的特大型企業(yè)，僅僅依靠幾位專家，或者說過于依靠幾個骨干，把廣大的職工群眾撇在一邊當觀眾，想搞好企業(yè)是不可想象的，也是不現(xiàn)實的。
2.5以科學管理替代經(jīng)驗管理，提升預算管理的科技含量。通過精選管理技術、技術與經(jīng)濟相結合的辦法，科學地描述預算與現(xiàn)實的內(nèi)在規(guī)律，使預算管理與實際操作貼近油田企業(yè)生產(chǎn)實際，由強調(diào)行政命令改為依靠科學管理，由基層強調(diào)客觀改為發(fā)揮主觀能動性，由被動管理改為我要管理，提高預算的執(zhí)行力。
2.6建立嚴格而完善的預算執(zhí)行與控制體系。完善的預算執(zhí)行與控制體系的主要內(nèi)容主要是企業(yè)應當及時將各業(yè)務機構及所屬各級企業(yè)重點財務預算指標進行層層分解。各預算執(zhí)行單位則應當將分解下達的年度財務預算指標細化為季度、月度預算，層層落實財務預算執(zhí)行責任。同時，企業(yè)要嚴格執(zhí)行經(jīng)核定的年度財務預算，切實加強投資、融資、擔保、資金調(diào)度、物資采購以及產(chǎn)品銷售等重大事項以及成本費用預算執(zhí)行情況的跟蹤和監(jiān)督，明確超預算資金追加審批程序和權限，并應對財務預算的具體執(zhí)行情況進行跟蹤監(jiān)測，及時分析預算執(zhí)行差異的原因，以采取相應的解決措施。
結束語
[關鍵詞] 顛茄；托品烷生物堿；數(shù)字表達譜；qPCR
[收稿日期] 2013-07-01
[基金項目] 教育部新世紀人才支持計劃項目（NCET-12-0930）；國家高技術研究發(fā)展計劃（863）項目（2011AA100605）；國家自然科學基金項目（31370333）；重慶市科技攻關項目（CSTC2012GGYYJS80013）；西南大學中央高校基本科研業(yè)務費專項（XDJK2013A024）
[通信作者] *廖志華，博士，教授，博士生導師，Tel：（023）68367146，E-mail：
[作者簡介] 強瑋，博士研究生，研究方向為植物生物學與生物技術，Tel：（023）68367146，E-mail：
托品烷類生物堿（tropane alkaloids， TAs）是一類具有巨大醫(yī)療價值的抗膽堿藥物，廣泛用于麻醉、鎮(zhèn)痛、止咳、平喘和抗暈動病，也用于控制帕金森病的僵直和震顫[1]。臨床上常用的是莨菪堿（hyoscyamine）和東莨菪堿（scopolamine），其中東莨菪堿毒副作用更弱，藥效更強，價格也更昂貴，兩者的市場需求均十分巨大[2]。目前TAs 都是從少數(shù)茄科TAs資源植物中提取，包括顛茄Atropa belladonna、曼陀羅Datura stramonium和莨菪Hyoscyamus niger，顛茄是東莨菪堿和莨菪堿最主要的商業(yè)栽培藥源， 也是藥典收錄的TAs藥源植物[3]。野生顛茄植株中莨菪堿質(zhì)量分數(shù)為0.02%～0.17%（干重），東莨菪堿含量極低，僅為干重的0.01%～0.08%。因此，培育TAs高產(chǎn)顛茄一直是該行業(yè)長期追求的目標[2，4-5]。
隨著對煙草、曼陀羅、莨菪等相關生物堿模式植物研究的深入，托品烷類生物堿合成途徑已基本清晰（圖1）。TAs生物合成以鳥氨酸和精氨酸為前體，分別經(jīng)鳥氨酸脫羧酶（ornithine decarboxylase，OrnDC）直接脫羧或精氨酸脫羧酶（arginine decarboxylase，ArgDC）、精胺亞胺基水解酶（agmatine iminohydrolase， AIH）、N-甲氨?；钒被饷福∟-carbamoylputrescine amidohydrolase， CPA）的三步反應最終都形成腐胺。N-甲基-腐胺-轉移酶（putrescine N-methyltransferase，PMT）與多胺合成途徑的亞精胺合成酶（spermidine synthase， SPDS）競爭腐胺前體生成N-甲基-腐胺，將腐胺流從多胺代謝轉向TAs合成，是TAs合成途徑上的第一個限速步驟[6]。 N-甲基-腐胺經(jīng)過一系列酶促和自發(fā)反應過程最終生成具有托品環(huán)結構的托品酮，托品酮繼而被還原生成托品，然后與來源于苯丙氨酸的苯乳酸縮合生成海螺堿。從海螺堿到莨菪堿涉及到多步分子重排反應，CYP80F1是從莨菪中鑒定出來的參與其中反應的一個細胞色素家族基因[7]。莨菪堿6β-羥化酶（hyoscyamine 6β-hydroxylase，H6H）催化莨菪堿羥基化及環(huán)化兩步反應，最終生成東莨菪堿，這也是東莨菪堿生物合成途徑上最后一個限速步驟[8]。在TAs生物合成中，托品酮還原酶Ⅱ（tropinone reductase Ⅱ， TRⅡ）催化托品酮還原成假托品是最大的一個競爭支路途徑，因為在野生顛茄中，該途徑終產(chǎn)物打碗花精含量約是TAs的2倍[9]。
*.本文分析9個基因；實線箭頭表示單一酶促反應步驟；虛線箭頭表示多步酶促反應步驟。
圖1 植物體內(nèi)托品烷類生物堿生物合成途徑
Fig.1 The biosynthetic pathway of TAs in planta
如上所述，盡管TAs生物合成途徑脈絡已基本闡明，但主要是基于對模式植物的研究，至今顛茄中也只有上游PMT和下游H6H基因得到了克隆并進行了生化分析。本文通過對新近完成的顛茄轉錄組數(shù)據(jù)庫進行整合分析，繪制了上述9個基因EST序列的數(shù)字組織表達譜，并利用qRT-PCR技術對其中已的4個基因的組織表譜進行了驗證，同時結合HPLC同步檢測了相應組織中的莨菪堿和東莨菪堿含量，以全面了解顛茄TAs生物合成和存儲積累，同時為解決該途徑中不清晰的合成步驟和研究該途徑的轉錄調(diào)控提供理論基礎。
1 材料與方法
1.1 顛茄 顛茄種子由西南大學生命科學學院“重慶市甘薯工程技術研究中心”保存，植株種植于西南大學溫室。在顛茄生長花果期，從3株不同植株中分別采取根、老莖、嫩莖、老葉、幼葉、花、幼果和果萼共8個部位，40 ℃烘干研磨成粉，用于提取生物堿。繪制組織表達譜的材料則更加細致地采集11個器官的材料，依次為主根、須根、老葉、幼葉、嫩莖、花蕾、花瓣、花蕊、花萼、果萼和幼果，液氮速凍后-80 ℃保存用于提取RNA。
1.2 數(shù)字表達譜繪制 美國密歇根州立大學新近的藥用植物基因組學資源網(wǎng)站（http：//medicinalplantgenomics.msu.edu/）完成了基于高通量測序的顛茄各組織/器官的轉錄組數(shù)據(jù)，EST序列經(jīng)過充分組裝后構建了UniGene轉錄組數(shù)據(jù)庫，并進行了功能注釋。登陸該網(wǎng)站搜索ODC，ADC，AIH，CPA，SPDS，PMT，TRII，CYP80F1，H6H共9個基因的所有UniGene序列，同時與煙草、曼陀羅和莨菪的相關同源基因進行blast比對，確保序列相似性在70%以上?；诨虮磉_豐度的FPKM（fragments per kilobase per transcript per million mapped reads）算法，作者同時獲得了各UniGene在各組織/器官的FPKM值，以此為表達豐度作圖，繪制各基因UniGene序列的數(shù)字表達譜。
1.3 總RNA提取及cDNA合成 總RNA提取使用TIANGEN公司的RNAsimple Total RNA Kit 試劑盒，紫外分光光度計測定其在260，280 nm處的吸光度，A260/A280均大于1.8小于2.1，表明RNA無蛋白和DNA污染。使用TaKaRa公司的PrimeScript？ RT reagent Kit Perfect Real Time試劑盒將各器官的RNA進行反轉錄，得到cDNA第一鏈作為熒光定量PCR檢測模板。加樣體系：5×PrimeScript TMBuffer（for Real Time） 2 μL，PrimeScript TM RT Enzyme Mix I 0.5 μL，Oligo dT Primer（50 μmol?L-1） 0.5 μL，Random 6 mers （100 μmol?L-1） 0.5 μL，總 RNA 1 μL，補足RNase Free H2O至10 μL，反轉錄反應條件：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。
1.4 引物設計與 qPCR 根據(jù)NCBI上已公開的顛茄PMT，TRII，CYP80F1，H6H序列，使用Beacon designer軟件設計qPCR引物（表1）。使用IQTM5 Multicolor Real-Time PCR 儀，參照SYBR？ Premix Ex TaqTM Ⅱ （perfect real time）試劑盒說明書進行qPCR反應。反應體系：2×SYBR Premix ExTaqTM10 μL，上游引物（10 μmol?L-1）0.8 μL，下游引物（10 μmol?L-1）0.8 μL，cDNA模板 0.5 μL，RNase-Free H2O 7.9 μL， 總體積20 μL。反應程序：95 ℃ 30 s，接著進行40個擴增循環(huán)（95 ℃ 5 s，退火 30 s，72 ℃ 20 s，延伸結束后采集熒光），退火溫度見表1；融解曲線分析：60 ℃到95 ℃逐漸升溫，每間隔0.5 ℃保溫10 s，采集1次熒光。以PGK，ACTIN雙基因作為內(nèi)參，根據(jù)Pfaffl Method方法計算各基因的相對表達量。
表1 各基因qPCR引物
Table 1 primer pairs employed for the detection of expression levels
1.5 生物堿提取與 HPLC檢測 顛茄各器官干粉參照Wang等發(fā)表的方法[2]提取托品烷生物堿用于HPLC檢測莨菪堿和東莨菪堿含量，標準品均購至Sigema公司。HPLC檢測使用島津LC-60A高效液相色譜儀（泵 LC-6AD、柱溫箱 CTO-10AS vp、控制器 SPD-20A），色譜柱為Phenomenex Gemini C18 110A液相色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.05 mol?L-1 pH 4.6醋酸胺緩沖液（流動相體系包含0.002 5 mol?L-1 SDS）（58∶42），流速1 mL?min-1，柱溫箱40 ℃，檢測波長226 nm，進樣量20 μL。
2 結果與分析
2.1 TAs合成途徑基因數(shù)字表達譜 高通量轉錄組測序技術的發(fā)展為研究大基因組（>100 Mb）物種任何組織中的基因表達豐度提供了一個十分直接的方法，基于FPKM與RPKM等算法，可在宏觀水平顯示所有基因在組織/器官內(nèi)和各基因在組織/器官間的表達差異。目前，顛茄11個組織/器官（主根、須根、莖、葉、花苞、花、幼果、成熟果、成熟種子、無菌幼苗和愈傷）轉錄組數(shù)據(jù)已公開，除了環(huán)境因素誘導表達的基因外，它基本包括了該物種所有表達的基因。本文以此為基礎，繪制了顛茄TAs合成途徑上9個基因UniGene序列的數(shù)字表達譜（圖2）。有5個基因存在2條或多條UniGene， 表明可能是小基因家族，但是UniGene條數(shù)不代表基因家族成員數(shù)，本課題組克隆了CYP80F1基因全長cDNA，CYP80F1 1，3，4這3條UniGene其實是一個轉錄本的上中下游3個部位的小EST片段，其他可能也類似。TAs合成途徑上游4個基因ODC，ADC，AIH，CPA在顛茄各器官均有表達，但在須根中的表達量基本都是最高，其中ODC有一個成員僅在須根和花苞異表達。2個支路途徑基因SPDS和TRⅡ也在各器官均有表達，各UniGene在組織間表達量無太大差異。3個TAs合成的特異性結構基因PMT，CYP80F1和H6H只在根中表達，且須根中表達量都顯著高于主根；H6H只在須根中有表達； CYP80F1有一個UniGene主要在主根和花中表達，須根和花苞中表達量微弱，其他器官不表達。
圖2 顛茄TAs合成途徑上9個基因的數(shù)字表達譜
Fig.2 Digital expression patterns of nine genes involved in tropane alkaloids biosynthesis in different tissues
2.2 4個已發(fā)表基因在不同器官中的表達 數(shù)字表達譜可以在宏觀上呈現(xiàn)一個代謝通路上所有基因的表達模式，但是具體研究某些基因的表達量還需要qPCR驗證。根據(jù)NCBI上公開的4個顛茄TAs合成基因序列（CYP80F1和TRⅡ為實驗室克?。?，設計qPCR引物，實驗驗證擴增效率均在90%～105%的有效統(tǒng)計范圍內(nèi)（表1），無引物二聚體，表明符合qPCR要求。采用雙基因作為內(nèi)參，根據(jù)Pfaffl Method方法計算各基因在顛茄11個器官的相對表達量（圖3）。這4個基因表達結果與數(shù)字表達譜結果基本一致，PMT，CYP80F1，H6H都只在須根異性表達，主根中表達極低或根本不表達，表明這3個基因存在組織特異性；TRⅡ在各器官均有表達，且須根、老葉和花瓣中表達量最高。
圖3 顛茄4個TAs合成基因的相對表達量
Fig.3 Relative expression level of four genes involved in tropane alkaloids biosynthesis in different tissues
2.3 不同器官中TAs含量 對顛茄各個器官中2種托品烷生物堿（莨菪堿和東莨菪堿）含量進行測定（n=3）（圖4）。在所有檢測器官中，莨菪堿相對于東莨菪堿都是主要生物堿，莨菪堿質(zhì)量分數(shù)最高器官是嫩莖（3.364 mg?g-1），其次是根、幼葉、幼果和果萼（分別為1.598，1.526，1.271，1.413 mg?g-1），根中莨菪堿含量約是它們的2倍；東莨菪堿質(zhì)量分數(shù)在果萼中（1.003 mg?g-1）最高，嫩莖和幼葉（分別為0.600，0.601 mg?g-1）中其次；在老莖（莨菪堿0.283 mg?g-1，東莨菪堿0.043 mg?g-1）和老葉（莨菪堿0.313 mg?g-1，東莨菪堿0.080 mg?g-1）中，莨菪堿和東莨菪堿質(zhì)量分數(shù)都是最低的。總體而言，地上部位的幼嫩莖葉和果實是顛茄TAs含量積累最豐富的部位。
3 討論
托品烷類生物堿（主要是莨菪堿和東莨菪堿）由于其顯著臨床藥用價值和巨大市場需求，一直以來都是植物次生代謝領域研究的熱點之一。目前，TAs生物合成途徑已較為清晰，幾個關鍵酶基因也得到了生化和轉基因驗證，這主要得益于對煙草、曼陀羅和莨菪等模式植物的研究。煙草雖然不能生產(chǎn)莨菪堿和東莨菪堿，但是其合成的尼古丁共享了TAs生物合成上游鳥氨酸、精氨酸到1-甲基-Δ-吡咯啉正離子的所有步驟。曼陀羅對于中游托品酮還原酶家族和苯乳酸來源支路途經(jīng)的研究發(fā)揮了主要作用[10]，盡管參與該支路途徑的基因仍還沒有得到鑒定，但是已經(jīng)否定了苯丙氨酸解氨酶PAL在TAs合成中的作用，同時也確定了是苯乳酸而不是托品酸參與了TAs的合成[11]。莨菪是研究下游H6H基因的絕佳材料，因為在莨菪中東莨菪堿是主要的托品烷生物堿，TAs合成途徑上最近被鑒定出來的一個基因CYP80F1也是從莨菪中克隆[7]。顛茄作為我國法定TAs藥源植物，其TAs合成途徑研究已明顯滯后，PMT和H6H作為該途徑中公認限速酶，是唯一從顛茄中克隆到的2個基因。
圖4 顛茄各個組織中TAs含量
Fig.4 Content of tropane alkaloids in different tissues
最近，顛茄轉錄組數(shù)據(jù)庫完成并開放，本實驗室陸續(xù)完成了其中TRⅡ和CYP80F1基因的克隆和驗證（數(shù)據(jù)正在發(fā)表），結合該途徑上其他基因的數(shù)字表達譜，顛茄中TAs生物合成進一步清晰。腐胺是廣泛存在于植物體中的一種多胺，也是TAs合成的前體，合成腐胺的上游4個基因ODC，ADC，AIH，CPA連同亞精胺合成基因SPDS在顛茄各器官都有表達，因此屬于初生代謝。PMT在聯(lián)系初生代謝（多胺合成）和次生代謝（TAs合成）中起著樞紐作用，該基因和之后的CYP80F1和H6H均只在顛茄須根中大量表達，表明須根是TAs合成主要場所。支路途徑的TRⅡ除了在須根中大量表達外，在莖葉中表達量也相當，由于打碗花精在植物體內(nèi)的防御作用目前僅是假設，所以對于TRⅡ在根莖葉均高水平表達的結果有待進一步研究。
雖然須根是TAs合成主要部位，但是TAs含量最高的器官卻是嫩莖、嫩葉和果萼，表明顛茄中生物堿存在轉運過程。煙草中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了若干個尼古丁轉運蛋白[12]，大多數(shù)也能轉運TAs， 生物堿轉運蛋白研究是另一個熱門的領域。幼嫩部位積累高濃度生物堿有其生理生態(tài)意義，對于防止食草動物和昆蟲啃食幼嫩組織發(fā)揮著重要作用，同時對于顛茄采收也有指導意義。
在TAs合成途徑上還存在3個值得探討的問題，首先是腐胺合成的生源問題，鳥氨酸和精氨酸途徑均能為多胺和TAs合成提供腐胺前體，但是對TAs合成起主要作用的途徑仍有待研究。煙草中最新的研究發(fā)現(xiàn)干擾ODC表達能夠顯著減低尼古丁含量[13]，而反義干擾ADC的表達則沒有太大效果[14]，表明鳥氨酸途徑是參與尼古丁合成的主要途徑。顛茄ODC數(shù)據(jù)表達譜表明存在一條在須根和花苞異表達的EST， 而ADC在各部位均有表達，強烈顯示可能在須根中存在為TAs提供腐胺的特異鳥氨酸途徑。其次是苯乳酸支路途徑上酶基因的克隆，至今仍然沒有突破，通過放射性同位素標記前體飼喂，已經(jīng)在曼陀羅中確定苯乳酸、苯丙酮酸和苯乳酸能有效整合進莨菪堿的合成中[10]，但是參與該途徑的基因克隆除了排除了PAL外一直沒有進展[15]。最后一個問題是關于該途徑轉錄調(diào)控，TAs合成途徑是較早研究的一條次生代謝合成途徑，雖然關于其次生代謝的研究仍然在各TAs資源植物中進行，但至今仍沒有任何關于其轉錄調(diào)控和轉錄因子的報道，這相對于其他次生代謝途徑如花色素苷、萜類吲哚類生物堿和青蒿素等已嚴重滯后。本研究從數(shù)字表達譜和qPCR均發(fā)現(xiàn)顛茄TAs合成途徑特異結構基因PMT，CYP80F1，H6H均只在須根中大量表達，其他無組織特異性表達的基因也在須根中高水品表達，表明須根是TAs合成的主要場所，篩選顛茄須根轉錄組數(shù)據(jù)庫就有可能確定上述兩個問題的候選基因，為透徹認識和完善該生物合成途徑提供新的思路和理論依據(jù)。
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Expression pattern of genes involved in tropane alkaloids biosynthesis
and tropane alkaloids accumulation in Atropa belladonna
QIANG Wei， WANG Ya-xiong， ZHANG Qiao-zhuo， LI Jin-di， XIA Ke， WU Neng-biao， LIAO Zhi-hua
（1.Key Laboratory of Eco-environments in Three Gorges Reservoir Region of Ministry of Education，
School of Life Science， Chongqing 400715， China；
2.Chongqing Engineering Research Center for Sweetpotato，
School of Life Science， Southwest University， Chongqing 400715， China）
[Abstract] Atropa belladonna is a medicinal plant and main commercial source of tropane alkaloids （TAs） including scopolamine and hyoscyamine， which are anticholine drugs widely used clinically. Based on the high throughput transcriptome sequencing results， the digital expression patterns of UniGenes representing 9 structural genes（ODC，ADC，AIH，CPA，SPDS，PMT，CYP80F1，H6H，TRII）involved in TAs biosynthesis were constructed， and simultaneously expression analysis of 4 released genes in NCBI（PMT，CYP80F1，H6H，TRII）for verification was performed using qPCR， as well as the TAs contents detection in 8 different tissues. Digital expression patterns results suggested that the 4 genes including ODC，ADC，AIH and CPA involved in the upstream pathway of TAs， and the 2 branch pathway genes including SPDS and TRII were found to be expressed in all the detected tissues with high expression level in secondary root. While the 3 TAs-pathway-specific genes including PMT，CYP80F1，H6H were only expressed in secondary roots and primary roots， mainly in secondary roots. The qPCR detection results of PMT，CYP80F1 and H6H were consistent with the digital expression patterns， but their expression levels in primary root were too low to be detected. The highest content of hyoscyamine was found in tender stems（3.364 mg?g-1）， followed by tender leaves（1.526 mg?g-1）， roots（1.598 mg?g-1）， young fruits（1.271 mg?g-1）and fruit sepals（1.413 mg?g-1）. The highest content of scopolamine was detected in fruit sepals（1.003 mg?g-1）， then followed by tender stems（0.600 mg?g-1） and tender leaves（0.601 mg?g-1）. Both old stems and old leaves had the lowest content of hyoscyamine and scopolamine. The gene expression profile and TAs accumulation indicated that TAs in Atropa belladonna were mainly biosynthesized in secondary root， and then transported and deposited in tender aerial parts. Screening Atropa belladonna secondary root transcriptome database will facilitate unveiling the unknown enzymatic reactions and the mechanisms of transcriptional control.