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        公務員期刊網 精選范文 妊娠高血壓基因檢測范文

        妊娠高血壓基因檢測精選(九篇)

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        妊娠高血壓基因檢測

        第1篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        【摘要】 目的 初步探討同型半胱氨酸(Hcy)代謝相關酶胱硫醚β合酶(CBS)基因C572T基因突變頻率在廣西河池地區妊娠高血壓疾病(HDP)發病中的作用。 方法 采用等位基因特異性擴增(ASA)技術檢測63例HDP患者(觀察組)和32例孕期經過順利的正常孕婦(對照組)CBS基因 C572T基因型。結果 HDP組CBS基因C572T T/T、C/T和C/C基因型頻率分別為4.76%、84.13%和11.11%;對照組分別為3.13%、87.50%和9.37%;HDP組C等位基因頻率為53.17%、T等位基因頻率為46.83%,對照組分別為53.13%和46.87%,二者比較,差異無統計學意義(P>0.05)。結論 CBS C572T基因突變頻率與HDP發病無明顯相關性,其基因突變頻率可能不足以構成廣西河池地區HDP發病的獨立遺傳危險因素。

        【關鍵詞】 妊娠期高血壓疾病;胱硫醚β合酶;同型半胱氨酸;基因頻率

        【Abstract】Objective To study the effect of mutation frequency of cystathionine βsynthase(CBS) in patients with hypertensive disorder complication pregnancy(HDP).Methods 63 patients with HDP and 32 healthy pregnant women were pided into HDP group and control group. their C572T genotypes were detected by the technique of Allelespecific amplification (ASA).Results The frequency of CBS gene type T/T,C/T and C/C were 4.76%,84.13% and 11.11% respectively in HDP group,while the control group were 3.13%, 87.50%,9.37% respectively. The frequency of C alleles and T alleles were 53.17% and 46.83% in HDP group,while the control group were 53.13% and 46.87%.there was no significant difference between the two groups(P>0.05). Conclusion There was not significant correlation between C572T and hypertensive disorder complication pregnancy,its mutation frequency may not be independent risk factor for hypertensive disorder complication in He Chi population.

        【Key words】 Hypertensive disorder complication pregnancy;Cystathionine βsynthase;Homocysteine;gene frequency

        妊娠期高血壓疾病(Hypertensive disorder complication pregnancy,HDP)是威脅孕產婦健康的重要疾病,與產后出血、感染、妊娠合并心臟病一起構成孕產婦死亡的四大原因,其發病率為7%~10%,是導致孕產婦和圍生兒發病率和死亡率增高的重要原因[1]。HDP的發病機制至今尚未完全闡明,臨床觀察發現其發生率在有HDP家族史的婦女明顯高于無家族史者,認為遺傳因素在HDP發病中有重要作用。近年來的研究認為HDP的發病與高同型半胱氨酸血癥(Hyperhomocyseinemia,HHcy)存在相關性[2,3]。胱硫醚β合酶(Cystathionine βsynthase,CBS)為同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)代謝途徑中的關鍵酶,其編碼基因CBS基因突變可引起該酶活性的改變,從而影響Hcy代謝。本課題通過對廣西河池地區HDP患者CBS基因突變頻率檢測,探討其在HDP發病機制中的作用。

        資料和方法

        1.研究對象

        選取2007年5月至2008年9月在我院定期產前檢查并住院分娩的HDP患者63例(觀察組),其中妊娠期高血壓18例, 輕度子癇前期30例,重度子癇前期15例,診斷及分類標準參照樂杰主編的《婦產科學》第6版,孕婦年齡20~37歲,平均年齡24歲,孕周32~40周,平均37周。同時隨機選取同期來我院住院分娩的、無妊娠并發癥及合并癥、孕期經過順利的正常孕婦32例作為對照組,年齡22~35歲,平均25歲,孕周33~40周,平均36周。所有孕婦均為廣西河池地區人氏,均無原發性高血壓、糖尿病、慢性腎炎、心臟病等病史, 各組孕婦年齡及孕周比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

        2.研究方法

        (1)標本的采集和處理

        受試者清晨空腹抽取外周靜脈血4 ml,2%EDTA抗凝,3000 r/min離心5 min,分離白細胞后采用酚/氯仿法提取人基因組DNA,并用8 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢查基因組的完整性,紫外分光光度計檢測DNA含量和純度。

        (2)CBS C572T基因型檢測

        采用等位基因特異性擴增(ASA)技術檢測CBS 基因型。PCR反應試劑購于TaKaRa公司,瓊脂糖為Biowest Agarose,溴化乙錠購于華美生物工程公司,凝膠成像系統及QuantityOne軟件、PCR儀為Biorad公司。PCR引物反應體系及程序:野生正向引物(DNA位置6696~6714):5′GGG CTGAGA TTG TGAGGA C3′,突變正向引物:5′GGG CTG AGA TTG TGA GGA T3′, 反向引物(DNA位置7030~7045):5′ACA CTC CCA GGC AGC C3′,由上海生工合成。產物大小350 bp。PCR反應體系50 μl,包括DNA模板0.2 μg,10 μmol/L dNTPS1 μl,10 μmol/L引物各2 μl,10×PCR緩沖液5 μl,Taq聚合酶1.25/U,25 mMol/L MgCl 23 μl。PCR反應擴增程序:95℃預變性2 min,然后95℃30 s,55℃30 s,72℃30 s,共35個循環,最后延伸72℃ 7 min。將PCR產物于15 g/L瓊脂糖凝膠, 80 V電壓下電泳35 min,溴化已錠染色,以DL2000為DNAMarker,凝膠成像系統觀察帶型并照相。

        3.統計學方法

        用SPSS11.5軟件包處理數據。計量資料以均數±標準差(-±s)表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢驗,并計算比值比(Odds Ratio,OR)及95%的可信區間(CI),以此估計基因突變頻率對疾病發生的相關危險度。檢測水平取雙側0.05,P<0.05表示有統計學意義。

        結 果

        1.基因型的確定

        擴增產物大小為350 bp,產生三種基因型:野生型C/C、雜合突變型C/T和純合突變型T/T,見圖1。

        2.基因突變頻率分析

        HDP組基因型C/C、C/T、T/T和T等位基因頻率與對照組比較,差異無統計學意義(P>0.05,表1)。C/T型對HDP組OR為0.76(95%CI為0.22~2.63),T/T型對 HDP組OR為1.55(95%CI為0.16~15.53),提示C572T與HDP無明顯相關性。

        表1 兩組C572T基因突變頻率及等位基因頻率分布例數(略)注: 與對照組基因型頻率及等位基因頻率比較,P>0.05

        討 論

        高同型半胱氨酸血癥(HHcy)作為心血管疾病的一個獨立危險因素近年來已得到廣泛的認可。同時,HDP與HHcy發病的相關性研究近年來也見諸多報道[2~4],兼有HHcy血癥孕婦發生HDP的危險度是非HHcy血癥孕婦的7.7倍,妊娠期Hcy水平可作為早期預測和診斷妊娠期高血壓疾病的重要指標[4~6]。

        胱硫醚β合酶(CBS)是體內Hcy轉硫代謝途徑的關鍵酶。在以吡哆醛磷酸(pyidoxalphosphate,PLP)為輔酶參與下,CBS催化β置換反應,使Hcy與絲氨酸縮合生成胱硫醚,后者在胱硫醚γ酶作用下進一步轉變成半胱氨酸和α丁酮酸。體內約53%的Hcy被CBS和胱硫醚γ酶不可逆轉化為半胱氨酸,可見CBS在維持Hcy正常代謝,避免血漿Hcy異常升高方面起重要作用。人CBS基因定位于21號染色體靠近端粒的位置,全長25~30 kbp,包含23個外顯子,編碼CBS多肽的551個氨基酸殘基。在目前已知的CBS基因132個突變位點中,大多數為錯義突變和缺失突變,不同的突變位點對CBS活性的影響不盡相同。C572T位點位于編碼區第5外顯子(EX5),cDNA的第572位(基因組第6714位)C被T替代,使第191位密碼原編碼的蘇氨酸(T)變為蛋氨酸(M),導致酶活性嚴重下降,引起Hcy代謝障礙、進而可形成HHcy血癥。哥倫比亞HHcy血癥患者C572TT等位基因突變頻率高達75%,在西班牙和葡萄牙約為50%,而在南美委內瑞拉、阿根廷和巴西分別為25%、20%和14%[7~9]。李麗帆等[10]研究發現C572T中T等位基因頻率在廣西籍冠心病患者為48.44%,在正常人為46.67%,二者差異無統計學意義(P>0.05)。目前尚未見C572T與HDP的相關性研究報道。本研究中,觀察組基因型T/T、C/T型及T等位基因頻率分別為4.76%、84.13%和46.83%,而對照組分別為3.13%、87.50%和46.87%,兩組基因型及等位基因頻率比較,差異均無統計學意義(P>0.05),提示C572T與HDP發病無明顯相關性;C/T、T/T型OR小于或略大于1.0,提示CBS C572T可能不足以構成廣西河池地區HDP發病的獨立遺傳危險因素。HDP為多因素、多基因參與形成的疾病,單純從CBS某個或某幾個突變位點來確定其對HDP的作用,其意義往往很有限,況且研究本身受樣本量和基因位點代表性的限制。因此,要全面闡述CBS基因多態性與HDP的關系,需進一步增加樣本及多基因、多位點、多因素的綜合研究。

        參考文獻

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        第2篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        【關鍵詞】 妊娠期高血壓病;血清;胎盤;白介素-12

        DOI:10.14163/ki.11-5547/r.2015.18.050

        作為妊娠期所特有的一種病癥, 妊娠期高血壓疾病(PIN)會嚴重的威脅到孕婦及胎兒的生命安全, 這也是誘使孕婦和胎兒死亡的主要原因, 但是對于其致病機理的形成過程還沒有探索清楚。當前的醫學研究表明, 之所以會引發PIN, 主要原因是胎盤缺氧和免疫系統被損壞所造成[1]。經過多年的研究發現, 只有保證母親和胎兒界面之間的免疫平衡維持在一個合理的范圍內, 才會讓胎盤在著床之后順利的進行妊娠反應, 而在這一平衡中發揮主要作用的就是TH2因子, 但是白細胞會分泌出一種稱之為白介素-12的因素, 誘使免疫的平衡界面向著TH1的方向去發展, 這樣就使得TH1和TH2的平衡比例被打破, 引起細胞免疫的反應進一步增強, 從而打破了孕婦與胎兒之間的免疫平衡狀態, 這一平衡的打破和PIN疾病的發生有著極其密切的關系[2]。現對2014年1月~2015年1月在本院接受孕期檢查的妊娠期高血壓患者的血清與胎盤IL-12水平的變化與關系探討情況報告如下。

        1 資料與方法

        1. 1 一般資料 本組資料共計120例, 均為2014年1月~ 2015年1月在本院接受孕期檢查的孕婦, 年齡19~38歲, 平均年齡(25.6±2.9)歲;分娩孕齡33~41周, 平均孕齡(37.9± 1.3)周;其中, 妊娠期高血壓25例, 子癇前期輕度27例, 重度68例。篩查出60例妊娠期高血壓疾病患者為觀察組, 并隨機抽取同期進行孕期檢查的60例正常孕婦為對照組, 兩組患者在年齡、孕齡及病情等方面比較差異無統計學意義(P>0.05), 具有可比性。

        1. 2 方法 對于所有的被選取的研究對象都進行空腹靜脈采血3 ml, 在經過血清分離之后將其保存在-20℃的環境下等待檢測;對于剖宮生產的孕婦在手術之后要立刻將中間帶一胎盤的小葉拿出來, 使用預冷的生理鹽水充分的漂洗, 吸收掉多余的水分, 使用液態氮進行速凍, 在-30℃的環境下保存起來, 以備使用。在測定之前要取出大約0.4 g的胎盤組織, 并加入1.0 ml的含有蛋白酶的抑制劑的緩沖液(pH 7.4, 20 mmol/ L Tris, 150 mmol/ L 氯化納, 1 mmol/ L DDT , 0.1 mg/ ml PMSF, 1 μg/ ml Leupeptin), 而所取得的混合液搖勻之后在4℃的溫度下進行20 min的離心, 取出上層的清液備用。對于所檢測的兩組樣本檢測其胎盤中的白介素-12的成分, 使用Real-Time PCR和westernblot的方法來檢測其中的mRNA和蛋白質的具體水準。對于血清的濃度表示方法應當采用ng/ml來表示, 而對于胎盤組織的濃度應當用pg/mg來表示[3]。

        1. 3 統計學方法 采用SPSS13.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗;計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P

        2 結果

        2. 1 妊娠期高血壓病患者血清胎盤 IL- 12 水平的變化 與對照組比較, 觀察組血清IL-12水平增高, 差異具有統計學意義(P0.05)。見表1。

        表1 兩組妊娠期高血壓病患者血清與胎盤IL-12水平的

        變化( x-±s)

        組別 例數 血清IL-12(ng/L) 胎盤IL-12(pg/mg)

        觀察組 60 360.95±5.00a 21.74±2.00b

        對照組 60 292.52±5.00 18.41±2.00

        t 2.254 1.758

        P 0.05

        注: 與對照組比較, aP0.05

        2. 2 兩組患者不良妊娠結局發生率對比 對比兩組患者的不良妊娠結局發現, 觀察組的不良妊娠結局發生率顯著高于對照組, 差異具有統計學意義(P

        表2 兩組患者不良妊娠結局發生率對比[n(%)]

        妊娠結局 觀察組(n=60) 對照組(n=60)

        新生兒窒息 11(18.33) 1(1.67)

        胎兒窘迫 5(8.33) 1(1.67)

        胎盤早剝 1(1.67) 0

        產后出血 7(11.67) 2(3.33)

        圍生兒死亡 1(1.67) 0

        早產 5(8.33) 2(3.33)

        剖宮產 36(60.00) 12(20.00)

        低體質量兒 5(8.33) 1(1.67)

        注:兩組比較, P

        3 討論

        白介素-12有比較多的命名方式, 如自然殺傷細胞刺激因子或者稱為細胞毒淋巴細胞, 是一種異源的二聚體細胞因子, 它屬于TH1型細胞因子, 是白介細胞中的全新發現, 也是人體中單核以及巨噬細胞, 樹突狀細胞的主要來源[4]。而IL-12又是當前所發現的所有細胞素之中免疫性調節范圍最廣的一種免疫因子, 在介導機體中對于抗原的免疫和排斥發揮著極其重要的作用, 是一種不可忽視的重要因子。

        正常情況下, 妊娠反應下的單核細胞, 巨噬細胞以及樹突狀細胞對于抗原的吞噬能力是逐漸增強的, 而抗原所能呈現出的病原態是逐漸減弱的。在孕婦體內的胎兒, 由于所接受的抗原比較少, 在后天的生長過程中免疫系統沒有被啟用, 這種現象稱之為“TH2現象”:使TH2細胞的基因表達效果逐漸增強, TH1的表達效果受到抑制, TH1主要發揮的是產生免疫, 清除抗原的作用, 而TH2則是讓機體對于抗原的清除過程不必反應過度, 讓機體處于一個相對平和的狀態。所以, 這時候產生妊娠反應的母親才不會排斥胎兒[5]。

        IL-12是一種極其重要的細胞, 在細胞亞群的分化中發揮著相當重要的作用。研究表明, 它能促進淋巴細胞的分化, 在TH細胞的分化中能夠發揮協同作用[6]。如果免疫系統向著TH1的方向去發展, 而且由于胎盤和胎兒的基因組成相同, 所以, 一旦發生免疫平衡被打破的情況, 就會使得胎盤和胎兒之間產生免疫排斥的現象, 造成的結果就是, 胎盤中的絨毛纖維素樣壞死, 胎盤上的絨毛數量會減少, 管腔嚴重堵塞, 對于胎盤能夠滋養就會減少。

        以往對于妊娠期高血壓相關的報道比較少。本研究則采用對照的方法很好地說明了妊娠期高血壓病的胎盤較正常的孕婦胎盤更易產生疾病, 但是在試驗中并未考慮到個體差異所帶來的影響, 所以妊娠期高血壓胎盤IL-12的變化所產生的意義還有待進一步研究。循環細胞因子的來源也是多樣性的, 但具體的影響因素也有待進一步的研究和探索。

        參考文獻

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        第3篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        關鍵詞:妊娠高血壓;危險因素;健康教育;護理干預;預防措施

        妊娠高血壓是婦產科妊娠期常見病癥之一,以高血壓、蛋白尿、水腫為主要特征。妊娠高血壓綜合征僅次于產后出血,居第2位,是一種常伴有脂肪和糖代謝紊亂以及心腦、腎和視網膜等器官功能性或器官性改變,以及器官重塑為特征的全身性疾病。夲癥多發于妊娠32 w,發病越早病情越重,發病初期表現為血壓輕度升高,伴有水腫和蛋白尿,若不給予及時的治療和科學的護理,可能引起抽搐、昏迷、腎功能衰竭等并發癥。嚴重者會危及母嬰生命安全,為了查找誘發的危險因素,我們在針對性護理干預的基礎上給予患者個體化的健康教育,取得較好效果,先報告如下。

        1妊娠高血壓的危險因素

        1.1易誘發的因素,包括年齡、遺傳等 ①初產婦。②年輕初產婦(年齡≤20歲)或高齡孕產婦(年齡>34歲)者。③精神過度緊張或受刺激致使中樞神經系統功能紊亂者。④與氣候變化有密切關系,在冬季及春季、秋冬交替時發病率最高。⑤身體矮胖者,即體重(Kg)/身高(m2)>24者。⑥有慢性高血壓、慢性腎炎、糖尿病等病史的孕婦。⑦營養不良,如貧血、低蛋白血癥者。⑧子宮張力過高(如羊水過多、雙胎妊娠、糖尿病、巨大兒等)者。⑨多基因遺傳性疾病,家族中有高血壓史,尤其是孕婦之母有重度妊娠期高血壓史者。

        1.2可改變的行為危險因素

        1.2.1高鹽飲食、膳食,食鹽攝入量與血壓水平呈顯著相關性。高鈉攝入可使血壓升高,而低鈉可降壓。建議不要食用腌制食物、熏魚、方便面等,刺激性強的食物,肥肉,蟹黃等。

        1.2.2肥胖,體重超重和腹型肥胖是高血壓發病的重要危險因素,在18~38歲時體重增加的人危險性最大,超過20%標準體重的人患妊娠高血壓的危險性更高。

        1.2.3缺少體力活動 缺少體力活動是造成超重或肥胖的重要原因之一,可增加妊娠高血壓患者心血管的發生危險。

        2資料與方法

        2.1一般資料 從2012年12月~2013年11月本院共收治妊娠高血壓綜合癥患者110例,年齡18~43歲,平均30.5歲,孕周26~38 w,平均32 w。病期:輕度62例,中度32例,重度16例,臨床癥狀,均有不同程度的水腫,高血壓和蛋白尿,其中先兆子癇16例,均有不同程度的眼花、頭痛、胸悶等癥狀。

        2.2方法

        2.2.1所有患者入院后①均給予鎮靜、降壓、解疼、擴容和利尿等治療。②患者入院后給予常規護理和基本健康教育。包括保持整潔、安靜的治療環境及時更換床單,正確的臥床,糾正電解質及酸堿平衡、呼吸道通暢、飲食護理、基本的健康宣教等。對患者做全身心評估,在常規護理的基礎上,給予針對性的護理和宣教,具體如下。

        2.2.2用藥物降壓護理干預 根據患者用藥禁忌及臨床表現,及時調整用藥,患者入院后立即建立靜脈輸液通路,遵醫囑用硫酸鎂5 g加入5%葡萄糖液20 mL在20 min左右緩慢靜脈輸注控制抽搐,再用硫酸鎂7.5~15 g加入5%葡萄糖500~1000 mL靜脈輸注,注意硫酸鎂的毒性反應監測血鎂濃度以防中毒。調整血鎂濃度維持在1.7~3.0 mmo1/L。利尿劑、速尿20~40 mg靜推或靜脈滴注,2~4 h再重復使用。密切觀察患者的反應,若患者出現面部潮紅、惡心、發熱等反應,應減慢滴速。若患者抽搐頻繁或昏迷,可靜脈推注地塞米松,休息≥10 h,左側臥位可減輕子宮對腹主動脈下腔靜脈的壓迫,使回心血量增加,改善子宮胎盤的血供。有研究發現左側臥位24 h可使舒張壓降低10 mmHg

        2.2.3心理護理干預 在患者治療期間我們發現部分患者由于對病情和治療方案的不了解,對自身病情的康復和母嬰的安慰缺乏信心,以及對病房環境的陌生,容易發生精神緊張、焦慮、悲觀等情緒。這些不良情緒會不同程度的影響到患者康復,嚴重者可能引起腎上腺素分泌增加、血管收縮、血壓升高、加重病情,我們對患者加以仔細觀察,及時掌握患者的情緒變化。根據其性格特點和心理狀況,給予針對性的心理疏導,在與患者的交流與溝通中,認真傾聽患者的意見,耐心解答患者的疑問,安慰患者的緊張、焦慮等情緒,并用眼神、手勢等暗示性動作鼓勵患者,增強患者的信心,增強患者的親近感和配合意識,使患者在良好的情緒下接受治療。

        2.2.4加強監護護理措施 對危重患者,即使目前狀況穩定,但有潛在發病可能的患者,要做好重點監護護理措施,搶救車、吸引器、壓舌板、和急救器材處于備用狀態。密切觀察患者心率、呼吸、脈搏和血氧飽和度等的變化情況。抽血檢驗血氣分析1次/4 h,觀察尿量和常規化驗,記錄尿量和血清肌酐等的動態變化,補液應在CVP檢測下進行。呼吸衰竭給予呼吸機輔助呼吸,并做好呼吸頻率、潮氣量和氣道壓力等的觀察記錄,以便再次發病時能及時調整到最佳呼吸機參數,為搶救贏得時間。無誘因的倦怠,胸悶和心慌等患者的臨床發病先兆給予觀察和總結。做好預見性護理工作。

        3健康教育

        部分患者由于保健意識較差或者雖然有保健意識,但是不正確或不科學,因此健康教育尤為重要,具體如下:①入院宣教:包括病室環境、規章制度、探視制度、作息制度、治療原則、護理內容和醫護人員等。②住院宣教:包括并發癥預防、用藥指導、飲食指導、產褥期注意事項等。堅持個體化原則,因人而異,使患者能盡量理解,針對部分患者文化較低的情況可制作一些簡單的宣教卡片,用圖畫或圖示向患者解釋相關問題交流或回答疑問時。

        3.1保證休息,精神放松,心情愉悅,減少聊天時間,主動睡眠、休息和睡眠時以左側臥位為宜,避免平臥位,這樣可以改善宮胎循環

        3.2建議合理飲食 即高蛋白、高纖維素、低鹽低脂飲食、動物內臟肉類、家畜類、水產類、蛋類、牛奶、豆制品、海帶、紫菜、蝦皮、芝麻、山楂、海魚、新鮮水果蔬菜,(筍干、菜花、菠菜、南瓜、白菜、油菜、胡蘿卜)雜糧類主食等。

        3.3學會自我保健意識:堅持每天數胎動,檢測體重,注意有無妊高癥相關癥狀出現積極配合醫師進行早期治療,通過健康教育、用藥指導、運動指導等方式,可提高妊娠高血壓患者對高血壓病基本知識的認識,改變其不良生活習慣,培養其積極健康的生活行為,增強其遵醫行為的執行能力,從而能有效地控制血壓,減少并發癥的發生,維護母子健康,提高生活質量。出院指導:嚴格避孕1~2年,產褥期要測量血壓1次/w,了解身體恢復情況、護理及母乳喂養。

        4預防措施

        做好產前檢查,孕期宣教保健工作。為防止發生妊娠高血壓疾病,首先做好產前檢查及孕期保健宣教工作。使孕婦掌握妊娠、分娩、產褥期的一般知識,解除他們對妊娠、分娩的思想顧慮,生活上給予指導,使其有所依循。對于異常的孕產婦應進行嚴密觀察。

        4.1通過定期的產前檢查,及時發現妊娠期的異常情況,對預防合并癥的發展有密切關系,每次產前檢查均需測量血壓及體重,測血壓時應注意和基礎血壓比較。量體重時,每次應穿相同的衣褲,以免因天氣變化增減衣服影響體重的準確性。每次檢查留清潔尿查尿蛋白。通過血壓、體重、尿蛋白的檢測,發現異象,有助于及時采取措施。

        4.2飲食應攝入足夠的蛋白質、維生素及鈣、鐵等礦物質,限制食鹽以減輕水、鈉潴留。督促孕產婦按照遺囑服降壓藥或鎮靜藥物,以保證療效。根據病情的嚴重程度增加產前檢查次數。重視孕婦主訴盡快縮短第二產程,適時終止妊娠,預防產后大出血,嚴密觀察孕婦生命體征,防止回心血量減少所致休克。按時檢查子宮底高度及收縮情況,注意陰道出血,必要時做好輸血準備。

        參考文獻:

        [1]何建華.護理干預對高血壓患者的影響[J].中國醫藥導報,2010,(13):107-108.

        [2]喻中會.老年高血壓患者護理干預對降壓效果的影響[J].現代醫藥衛生,2010,26(1s):2300-2301.

        [3]林華英.高血壓的社區健康教育[J].2013,11(6).

        第4篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        關鍵詞 妊娠并發癥 子癇 可溶性CD105淋巴細胞抗原

        doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.13.081

        子癇前期是妊娠期常見的特有并發癥,是導致孕產婦和圍產兒死亡的重要原因之一。其病因目前尚不清楚,血管內皮損傷是其基本病理生理變化,而來源于胎盤組織的“毒性因子”被認為在引發血管內皮損傷中發揮重要作用。新近研究發現,可溶性Endoglin(soluble Endoglin,sEng)由胎盤分泌,是轉化生長因子(TGF)β1 和β3型受體復合物的成分之一,它通過限制促血管生成蛋白TGF-β1的表達參與子癇前期病理生理過程。為探討sEng在子癇前期發病中的作用,本研究對子癇前期患者發病前及發病時外周血sEng水平進行了檢測。

        資料與方法

        2007年9月~2009年3月收治住院分娩的妊娠婦女,子癇前期組47例,其中輕度子癇前期患者12例;早發型重度子癇前期19例,平均孕周3135±251周;晚發型重度子癇前期16例,平均孕周3722±191周。另選同期正常足月妊娠孕婦40例,平均孕周4022±101周,作為對照組。兩組均為單胎,平均孕婦年齡差異無顯著性,兩組年齡分別為2862±438歲和2765±385(P>005)。所有研究對象既往均無自身免疫性疾病、高血壓、糖尿病等病史,在采集標本前均未接受輸血及免疫治療。子癇前期的診斷及分類標準參照樂杰主編的《婦產科學》(人民衛生出版社,第7版)。

        標本采集、處理、保存:患者均于清晨空腹抽取肘靜脈血3ml,血樣均立即離心,取血清樣本置-20℃冰箱保存備用。

        方法:采用ELISA法檢測各組血清中sEng水平。操作按照說明書進行,所有標本均行復孔檢測且為同批測定,均值為最終濃度,批內變異

        統計學方法:采用SPSS110統計軟件,兩樣本均數比較用兩獨立樣本的t檢驗,多個樣本均數兩兩比較用方差分析。

        結 果

        各組血清中sEng水平隨孕周的變化:在正常對照組,sEng維持在低水平至33~36孕周,之后逐漸升高直至分娩。早發型重度子癇前期患者發病前sEng水平在17~20孕周即開始升高,之后隨孕周逐漸升高,至臨床癥狀出現時達到高峰,均顯著高于對照組(P

        各組血清中sEng水平的比較:sEng水平在子癇前期組顯著高于對照組(P

        討 論

        子癇前期以在妊娠20周以后出現高血壓,蛋白尿為特征。本病被認為是一種胎盤疾病,胎盤缺血、缺氧以致其合成和釋放過多“毒性因子”進人循環,在血管內皮細胞激活和損傷中發揮重要作用。

        Endoglin又名CD105,位于人染色體9q34,是一種同型二聚體膜糖蛋白,主要表達于人類內皮細胞表面和足月胎盤合體滋養層細胞表面。它是TGF-β1和TGF-β3的復合受體,通過調節細胞對TGF-β的反應,參與血管發育和重塑。sEng是Endoglin的氨基末端裂解重組的截短形式Venkatesha等[1],在正常妊娠婦女體內表達水平較低,在非孕婦女體內幾乎檢測不到。

        我們發現在有子癇前期臨床癥狀的患者血清中sEng水平升高,在早發型子癇前期患者中的表達更為顯著,這提示sEng可能在子癇前期的發病中發揮重要作用,與Venkatesha等[1]及Mutter等[2]研究結果一致。過量的sEng可能來源于胎盤,因為產后48小時循環中sEng水平下降,但尚缺乏子癇前期患者sEng來源于胎盤的直接證據,有待進一步證實。可能情況是,子癇前期時滋養葉細胞對螺旋動脈浸潤不足,子宮胎盤血流灌注不足,導致胎盤缺氧,胎盤合體滋養細胞(STB)產生sEng增多,過多的sEng釋放到循環中。sEng與TGF-β結合,從而削弱TGF-β1與其受體結合的能力,使觸發Thr495脫磷酸作用、激活內皮細胞NO合成酶(eNOS)基因磷酸化、促進血管內皮細胞產生NO等一系列下游反應不能正常進行,內皮細胞NO的產生顯著減少(可能與eNOS基因突變有關),從而導致患者血壓升高,致使較多血液流向胎盤。因此,sEng濃度升高會引發嚴重的子癇前期。Levine等研究也表明,胎盤中sEng和sFltl這兩種蛋白質的失衡會導致子癇前期的發生。異常升高的蛋白質水平會大量結合維持血管內皮正常的必要物質,血管內皮細胞失去這些必不可少的物質后會發生病變甚至死亡,從而導致高血壓和蛋白尿等臨床癥狀出現。

        本研究表明在子癇前期臨床癥狀出現前數周,患者體內的sEng已經有明顯升高,顯著高于后來沒有并發子癇前期的正常妊娠婦女。這與Robinson等[3]及Levine等[4]研究結果一致。因此,孕中期監測孕婦血清中sEng對妊娠后期并發子癇前期有重要預測價。Salahuddin等證明[5],檢測sEng對預測子癇前期靈敏度和特異度分別為90%和95%。Stepan等[6]通過前瞻性研究發現,在妊娠中期血清sEng升高,意味著不良妊娠結局,其中發展為早發型子癇前期者升高最顯著,研究表明,聯合檢測sEng和sFlt-1,對早發型子癇前期的預測靈敏度達100%,特異度達933%。因此,在妊娠初期檢測sEng水平,對預測后期子癇前期的發生和發展有很大幫助,而且還有助于區別子癇前期與慢性高血壓、腎病等癥狀類似的疾病,這對于及早發現和治療子癇前期意義重大。

        總之,病理性胎盤釋放的“毒性因子”― sEng進入循環,引起血管形成障礙及內皮功能失調,導致子癇前期的發生。sEng與子癇前期關系的研究為探討子癇前期的病因及發病機制開辟了新思路,也為sEng作為子癇前期發生、發展和預后判斷的指標奠定了基礎。

        參考文獻

        1 Venkatesha S,Toporsian M,Lam C,et al.Soluble endoglin contributes to the pathogenesis of preeclampsia.Nat Med,2006,12(6):642-649.

        2 Mutter WP,Karumanchi SA.Molecular mechanisms of preeclampsia.Microvasc Res,2008,75(1):1-8.

        3Robinson CJ,Johnson DD.Soluble endoglin as a second-trimester marker for preeclampsia.Am J Obstet Gynecol,2007,197(2):174-175.

        4 Levine RJ,Lam C,Qian C,et al.Soluble endoglin and other circulating antiangiogenic factors in preeclampsia.N Engl J Med,2006,355(10):992-1005.

        第5篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        異常信號1:孕28周以前,突然出現陰道流血、陣發性下腹痛。

        高度懷疑:流產

        分析:自然流產的發生率約占全部宮內妊娠的15%。流產多發生于妊娠12周前,也有部分流產發生在孕12周以后、孕 28周以前。導致流產的原因很多,胚胎遺傳基因缺陷,刺激子宮收縮,過度疲勞,劇烈運動造成盆腔充血,接觸有害化學物質、射線,長期處于噪聲及高溫環境等,均可引起流產。

        專家建議:無論陰道流血多少,下腹痛輕重程度如何,皆應立即就診。

        處理:如果陰道流血少,下腹痛輕微,婦科檢查子宮頸口未開,子宮大小與停經月份相符,妊娠有希望繼續者,應絕對臥床休息,禁止性生活,口服維生素E、肌注黃體酮保胎。

        提醒:有遺傳基因異常的胚胎,絕大多數將自然淘汰,流產在所難免,不必保胎。

        異常信號2:外陰瘙癢、灼痛,或伴有尿頻、尿痛,白帶稠厚呈凝乳或豆渣樣。

        高度懷疑:念珠菌陰道炎

        分析:念珠菌陰道炎,亦稱真菌性陰道炎,由白色念珠菌引起。妊娠期,胎盤分泌大量雌激素,陰道上皮細胞內糖原含量增加,糖原經陰道桿菌分解生成乳酸增多,陰道酸度上升。當陰道pH小于4.5,而局部免疫力有所下降時,念珠菌即會繁殖,引發炎癥。

        專家建議:一旦出現典型癥狀,應盡早去醫院檢查。若在陰道分泌物中找到白色念珠菌孢子和假菌絲即可確診。

        處理:孕8個月前可以陰道給藥,選用咪康唑、克霉唑或制霉菌素制劑。若局部用藥效果差,可全身用藥,口服伊曲康唑、氟康唑。孕8個月后,不宜再陰道給藥,可口服藥物治療。治療期間應勤換內褲,穿過的內褲、用過的盆及毛巾應用沸水燙洗。

        提醒:念珠菌性陰道炎的治療務必徹底。因為如果母體陰道內有念珠菌繁殖,胎兒娩出時很可能受傳染。如果念珠菌污染與、奶瓶、衣服、床單等,則傳染新生兒的機會更多,會導致新生兒鵝口瘡發生。

        異常信號3:突然出現寒顫、高熱、頭痛、周身酸痛、惡心、嘔吐、腰痛、尿頻、尿急、尿痛、排尿未盡感。

        高度懷疑:急性腎盂腎炎

        分析:孕期的特殊生理特點決定了孕婦易患急性腎盂腎炎,原因主要有以下四點:①胎盤產生的大量孕激素使輸尿管平滑肌松弛及蠕動減弱,容易導致膀胱過度充盈、排尿不盡、膀胱內殘余尿增多,有利于細菌在尿路內繁殖。②增大的妊娠子宮壓迫輸尿管,形成機械性梗阻。③增大的妊娠子宮和胎頭將膀胱向上推移變位,易致排尿不暢或尿潴留。④孕期尿液中葡萄糖、氨基酸及水溶性維生素等營養物質增多,有利于細菌生長。另外,女性尿道短,尿道口與靠近,容易受腸道細菌感染。

        專家建議:出現上述癥狀,應立即去醫院就診。經尿常規及中斷尿細菌培養可確診。

        處理:根據中段尿培養及藥敏試驗,選用敏感抗生素控制感染。除靜脈輸液外,還需多飲水,使每日尿量達2000毫升以上。晚期妊娠者,應取側臥位休息,左右輪換,以減少子宮對輸尿管盆腔段的壓迫,使尿液引流通暢。

        提醒:急性腎盂腎炎的治療必須徹底,以免反復發作而轉為慢性腎盂腎炎。

        異常信號4:妊娠20周后,出現下肢水腫,檢查發現血壓升高、蛋白尿。

        高度懷疑:妊娠高血壓綜合征

        分析:妊娠高血壓綜合征在我國的發生率約為10%,是孕婦特有的疾病。目前病因不明,基本病變是全身小動脈痙攣。妊娠高血壓綜合征若未得到良好控制,會使腦、心、肝及胎盤均發生缺血缺氧損害,使母兒處于險境。

        專家建議:從妊娠早期開始,按時進行產前檢查。一旦發現有上述征兆,應在醫生的指導下進行對癥治療及病情監測。

        處理:一旦確診,輕癥病人可采取休息、左側臥位、加強營養等對癥治療,嚴密監測病情進展情況。中、重癥病人則需住院治療,接受解痙、擴容、利尿、降壓等一系列治療。癥狀極其嚴重,且胎齡超過36周的孕婦,可以考慮提前終止妊娠。

        提醒:孕后保持精神愉快,注意休息,睡眠充足,減少脂肪和鹽的攝入,增加蛋白質、維生素、鐵、鈣和其他微量元素的攝入,對預防妊娠高血壓綜合征很有好處。

        異常信號5:無痛性陰道流血。初次出血一般在妊娠28 周以后,突然發生,量不多,往往一陣就停。

        高度懷疑:前置胎盤

        分析:正常情況下,胎盤附著在子宮體的前壁、后壁或側壁。如果胎盤附著于子宮下段,其下緣達到或覆蓋子宮頸內口,位置低于胎兒先露部(最先進入母親骨盆的胎兒部分),那就是前置胎盤。胎盤的前置部分發生剝離,不僅會導致孕婦失血,還會影響胎兒的氧氣和營養供應,極有可能造成胎兒宮內死亡,對母兒危害巨大。

        專家建議:立即去醫院就診,腹部B超可幫助確診。

        處理:前置胎盤的處理原則是制止出血,糾正貧血。妊娠不滿37周或胎兒體重估計不足2300克,陰道出血量不多的孕婦,可采用期待療法――絕對臥床休息,糾正貧血,等胎兒成熟后再考慮終止妊娠。胎兒已成熟或者大量出血已危及生命的孕婦,則考慮立即終止妊娠。

        提醒:產后或流產后子宮內膜炎,多次生育、引產、刮宮損傷子宮內膜,胎盤面積過大(如雙胎妊娠),胎盤異常(如有副胎盤時),受精卵發育遲緩等因素,均與前置胎盤的發生有一定關聯。因此,積極貫徹計劃生育,堅持避孕,避免人工流產及防治宮腔感染,是減少前置胎盤發生的重要手段。

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        妊娠反應什么時候開始

        妊娠反應的發生時間早晚與孕婦的個人體質有關,但一般都會在停經40天左右會出現妊娠反應。另外,妊娠反應與體內激素水平有關,部分孕婦可能不會出現癥狀,而常見的早孕反應有:惡心、嘔吐、嗜睡、疲倦等。所以不管有沒有妊娠反應,如果沒有做避孕措施,月經延期超過了10天后,就建議去做一下妊娠檢測。

        妊娠頭三個月即0 ~ 12周,稱妊娠早期。此階段正是受精卵向胚胎、胎兒劇烈分化的重要時期,也可以說是胎兒“分化組裝成形”的時期。

        妊娠早期會有妊娠反應,感覺頭暈乏力、倦怠嗜睡,并且食欲減退。有些人還可能有食欲異常、挑食、喜酸味和厭油膩。從胚胎學來看,從受孕到妊娠60天左右是器官發生期,爾后是組織發生和功能形成期。如腦和神經系統形成于受精后15 ~ 20天;心血管系統形成于受精后20 ~ 40天。這里所說的時間是實際受孕時間,并不等于末次月經以后的時間。以末次月經的時間減去兩周即為實際受孕時間。胎兒各器官形成時期,最易受外界的最響。加之胎盤發育還不充分,孕激素分泌處于低潮,這正是易發生流產的時期。所以平時月經準時,當末次月經過期一周仍不見來者,夫婦應首先意識到是懷孕。一旦確診,除生活上注意,避免公共場所活動外,同時也得從心理上做好準備。其次避免影響胚胎分化和胎兒發育的各種危險因素。如:放射線、煙、酒、濫用藥物、各種有毒物質如苯、鉛、汞、砷等,病毒感染,特別是風疹感染,該病在妊娠早期的畸形兒發生率可高達55 ~ 60%。

        妊娠13 ~ 27周為中期妊娠。是母親和胎兒都已安定的時期。早孕反應消失,心情變得愉快起來,肚子還不算大,動作也還方便。此期間胎兒發育較快。

        第6篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        【關鍵詞】 過氧化物酶體增殖物激活受體γ;基質金屬蛋白酶9;妊娠期高血壓疾病;胎盤;免疫組化

        ABSTRACT: Objective To investigate the expressions and clinical significance of PPARγ and MMP9 in the genesis and development of hypertensive disordercomplicating pregnancy (HDCP). Methods The expressions of PPARγ and MMP9 in placenta of 31 normal pregnant women (control group) and 36 pregnant women with hypertensive disordercomplicating pregnancy (experimental group) were detected by using SP method of immunohistochemistry, and the relationship between PPARγ and MMP9 expressions and hypertensive disordercomplicating pregnancy was explored. Results ① PPARγ expression in placental tissues was significantly higher in the experimental group than in the control group (P

        KEY WORDS: peroxisome proliferationactivated receptor γ(PPARγ); matrix metalloproteinase 9; (MMP9); hypertensive disordercomplicating pregnancy (HDCP); placenta; immunohistochemistry

        妊娠期高血壓疾病(HDCP)是妊娠期特有的疾病,我國發病率為9.4%~10.4%, 嚴重影響母嬰健康, 是孕產婦和圍生兒患病率及死亡率的主要原因, 發病機制不明。最近研究發現滋養細胞浸潤能力下降是HDCP的主要原因之一[1]。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferationactivated receptorγ, PPARγ)是一類配體啟動的核轉錄因子, 在轉錄水平上調控多種細胞的增殖、侵襲、分化和凋亡。PPARγ在胎盤形成中起重要作用, 不僅對滋養細胞浸潤分化是必需的, 而且可建立成熟的母胎轉運。研究發現PPARγ的表達或活性增加可以抑制體外培養人類滋養細胞的浸潤,因此其可能影響滋養細胞的正常浸潤,在HDCP的發病過程中起一定作用。MMP9分解基底膜的主要成分Ⅳ型膠原,是參與細胞滋養細胞浸潤的關鍵酶,許多胎盤激素和細胞因子對滋養細胞浸潤的調節都是通過控制MMP9的分泌而實現的,所以MMP9在滋養細胞浸潤過程中起重要作用。本研究通過免疫組化SP染色法,檢測HDCP患者與正常孕婦胎盤組織中PPARγ和MMP9的表達, 揭示其在HDCP發生發展中的表達,探討兩者的關系。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 選取西安交通大學醫學院第一附屬醫院2008年4月~10月住院初產婦HDCP患者36例(妊娠期高血壓10例,輕度子癇前期13例,重度子癇前期13例)作為實驗組,同時隨機選取同期剖宮產結束妊娠的正常初產婦31例為對照組。所有對象均無肝炎、結核等急慢性傳染病史,無心臟病及肝腎疾病史,無其他妊娠合并癥及并發癥。診斷標準依據樂杰教授主編的第七版《婦產科學》。兩組孕婦年齡、孕齡比較均無統計學差異(P>0.05), 實驗組胎盤重量和新生兒體重明顯低于對照組(P

        1.2 檢測方法

        1.2.1 取材 所有標本均于胎盤娩出后10min內收集,迅速稱量胎盤重量,于胎盤母體面近臍帶處避開鈣化點區取胎盤組織約1.5cm×1.0cm×0.5cm大小, 置于40g/L中性多聚甲醛液固定,常規石蠟包埋,5μm連續切片,HE染色后觀察典型組織為入選標本。

        1.2.2 PPARγ、MMP9測定 兔抗人PPARγ多克隆抗體、兔抗人MMP9多克隆抗體、SP型免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自北京博奧森生物技術有限公司,具體操作參照說明書。采用免疫組化SP法測定胎盤組織PPARγ、MMP9的表達。每批染色均設陽性對照(公司提供)和陰性對照[磷酸鹽緩沖溶液(PBS)]代替一抗。

        1.3 結果分析 采用德國LEICA公司生產的生物醫學圖像分析系統(Q550CW)進行灰度定量分析, 由顯微攝像機將切片圖像輸入計算機,每張切片隨機選取5個不重疊高倍視野, 分別計算每個視野PPARγ及MMP9的平均灰度值,求出每例胎盤標本的平均灰度值。用平均灰度值代表PPARγ及MMP9在胎盤的表達水平。陽性區表達的強弱和灰度值呈負相關,灰度值越大則陽性表達越弱,灰度值越小則陽性表達越強。

        1.4 統計學方法 所有數據均采用SPSS13.0統計軟件進行處理,結果用(±s)表示,臨床資料和平均灰度值比較采用t檢驗,P

        2 結 果

        2.1 PPARγ在胎盤組織的表達情況 PPARγ主要表達于胎盤絨毛小葉的合體滋養細胞、細胞滋養細胞及蛻膜細胞的細胞核上, 在胎盤絨毛和蛻膜的間質中也有表達。PPARγ在對照組、實驗組灰度值表達有顯著性差異(P0.05), 輕度子癇前期、重度子癇前期與對照組比較存在顯著性差異(P

        2.2 MMP9在胎盤組織的表達情況 MMP9主要表達于胎盤絨毛小葉的合體滋養細胞、細胞滋養細胞及蛻膜細胞的細胞質中,胎盤絨毛血管內皮細胞及間質少量表達。MMP9在對照組、實驗組灰度值比較有顯著性差異(P

        2.3 PPARγ和MMP9的相關性分析 實驗組PPARγ和MMP9在胎盤組織中的表達水平進行Pearson相關分析, PPARγ和MMP9的表達水平呈負相關(r=-0.529,P

        3 討 論

        過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferationactivated receptorγ, PPARγ)屬Ⅱ型核受體超家族成員, 是參與多種生物學效應的核受體, 除與脂質代謝、炎癥、心血管疾病、糖尿病、肥胖等一系列生理過程密切相關外,還對細胞的生長、分化甚至凋亡有重要影響。PPARγ的配體分為天然配體和合成配體。天然配體主要來源于食物和機體的代謝產物,如亞油酸、亞麻酸、前列腺素及其代謝產物等。PPARγ合成激動配體包括:噻唑烷二酮類(TZDs);羧酸類激動劑和其他類型激動劑, 如非甾體類抗炎藥(NSAIDs)等[2]。FOURNIEDR[3]等發現利用PPARγ的激動劑合成配體(羅格列酮)和天然配體(15PGJ2)可以抑制體外培養的人類滋養細胞浸潤, PPARγ的激動受體可以影響滋養細胞的正常浸潤,引起HDCP的發生。FOURNIER等[4]研究發現鼠類在胚胎形成的第8天就可在胎盤中表達PPARγ,其分布在母胎界面的滋養細胞上,而PPARγ基因敲除的小鼠胎盤形成障礙,胚胎死亡率增加,滋養細胞浸潤受阻及血管重鑄障礙, 說明PPARγ在胎盤的發育中起了至關重要的作用。研究發現PPARγ能抑制滋養細胞的浸潤性, 對滋養細胞的侵襲行為起負調控作用。PPARγ受體在胎盤上有許多重要的功能,包括滋養細胞分化、入侵和攝取胎兒宮內發展重要的脂肪酸和在滋養層中作為合成類固醇激素的前體。此外,利用激動劑激活PPARγ受體可能通過抑制胎膜炎癥反應來降低的早產風險[5]。本實驗應用免疫組化SP法檢測HDCP患者和正常孕婦的胎盤組織中PPARγ的表達,結果顯示HDCP患者胎盤組織中PPARγ表達水平明顯高于正常孕婦,且隨病情加重升高,而在二者胎盤組織中PPARγ的分布基本一致,主要位于絨毛滋養細胞,提示PPARγ的過度表達限制了滋養細胞的正常浸潤能力,導致滋養細胞侵入過淺,使胎盤螺旋小動脈重新生成障礙,胎盤淺著床,最終引發HDCP。

        基質金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase9, MMP9)是REPONE和SAHLBERG1994年在小鼠胚胎發育中的破骨細胞內發現的, 分子量為Mr 92×103。MMP9作用底物主要是層粘連蛋白、Ⅳ、Ⅴ型膠原和Ⅰ、Ⅴ型明膠和彈性蛋白, 使用金屬蛋白酶抑制劑和MMP9的特異性抗體能完全抑制細胞滋養細胞的侵蝕性,且Ⅳ型膠原為內皮細胞基底膜所特有,因此MMP9在滋養細胞侵蝕及血管重鑄中發揮重要作用。LI[6]等通過免疫組化方法測量20名正常孕婦和20名妊娠期高血壓疾病患者的胎盤中MMP2、MMP9的表達,同時利用實時PCR技術測量兩組人群的基因MMP2、MMP9,結果發現在妊娠期高血壓疾病患者胎盤中MMP2和MMP9表達顯著下降,妊娠期高血壓疾病胎盤中MMP2、MMP9的低表達可能導致侵滋養層細胞浸潤受阻致胎盤淺著床,從而引起妊娠期高血壓疾病的發生。本研究發現,HDCP患者絨毛上皮細胞的MMP9 陽性表達明顯低于正常妊娠組, 而且與病情的嚴重程度呈正相關,MMP9的表達呈下降趨勢明顯有統計學意義,進一步證明了MMP9分泌不足使滋養細胞對子宮內膜侵蝕表淺和螺旋小動脈侵蝕受阻, 會造成胎盤淺著床和胎盤缺血、缺氧的HDCP特征性病理生理改變,以致最終發展為HDCP。

        妊娠期高血壓疾病是一類具有高血壓、水腫、蛋白尿的妊娠綜合征, HDCP發病常分為兩個階段:第一階段是滋養層細胞淺著床,引起胎盤循環缺氧,同時釋放的可溶性因子和滋養細胞碎片釋放入母體血循環。第二階段上述因子引起相應產科并發癥。但該病的發病機制至今不清,研究發現滋養細胞浸潤能力下降是導致HDCP的主要原因之一[1]。研究發現PPARγ、MMP9在妊娠整個過程中的各環節都有著一定作用,均可使妊娠滋養細胞的浸潤增強及分解細胞外基質成分,為受精卵著床及胎盤的植入、胎盤絨毛血管的新生起到了重要的作用,而PPARγ、MMP9表達的異常可能導致病理妊娠如HDCP的發生。研究發現在一些類型細胞中轉錄因子PPARγ可通過調節下游MMP9發揮作用。LEE[7]等研究在腦缺血組織中,PPARγ被配體吡格列酮激活后可下調MMP9的表達,改變了細胞外基質的成分,利用吡格列酮能減少腦梗死面積,說明PPARγ激活后降低了MMP9活性, 減少了MMP9對細胞外基質的降解作用。本實驗結果顯示,在胎盤絨毛組織中PPARγ表達與MMP9呈負相關(r=-0.529,P

        PPARγ、MMP9在HDCP中的發病機制尚未完全明了, 但已確定的是兩個因子在HDCP發病中起到了非常重要的作用。PPARγ和MMP9可能通過協同作用影響滋養細胞的浸潤過程, 使滋養細胞的侵襲能力降低,從而導致胎盤植入過淺,引發一系列病理生理變化,最終導致HDCP的發生。因此,臨床上可以采取措施維持PPARγ、MMP9的正常表達水平來預防及治療HDCP。

        參考文獻

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        第7篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        【摘要】 研究缺氧誘導因子1α (HIF1α)及其靶基因血管內皮細胞生長因子(VEGF)在子癇前期患者胎盤組織中的表達和相關性,探討HIF1α、VEGF在子癇前期發病機制中的作用。方法:采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白過氧化酶連接法(SP)法對20例子癇前期患者(子癇前期組)和15例正常妊娠婦女(對照組)胎盤組織中HIF1α、VEGF蛋白表達進行半定量分析;應用RTPCR技術檢測兩組胎盤組織中HIF1α、VEGFmRNA的水平并進行相關性分析。結果:(1)免疫組化結果顯示,子癇前期組HIF1α蛋白表達明顯增強,其中(+++)陽性表達率分別為45%,顯著高于對照組13.3%(P

        【關鍵詞】 妊娠并發癥;缺氧誘導因子1α;血管內皮細胞生長因子;受體

        Abstract0bjective: To investigate the expression and correlation of HIF1α and VEGF in the preeclamptic placenta, aiming to discuss the significance in the pathogenesis of preeclampsia.Methods:Placenta were collected from 20 pregnant women with preeclampsia as study group and 15 normal pregnant women as control group, the expression of HIF1α and VEGF protein were semiquantitatively analyzed with immunohistochemicall assay and mRNA level was determined by using reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) technique.Results:(1)The expression of HIF1α protein in preeclamptic group obviously increased, with(+++)positive expression rate significantly higher than control group(P

        Key wordspreeclampsia;HIF1α;vascular endothelial growth factor;receptor

        妊娠高血壓綜合征子癇前期(以下簡稱子癇前期)是妊娠期特有疾病,嚴重危及母嬰健康和生命安全。其發病機理是病理產科研究的熱點問題,目前較公認的學說之一是,滋養細胞分化和功能異常導致子宮螺旋動脈生理重鑄過程障礙,引起胎盤絨毛淺著床及胎盤缺血缺氧。胎盤氧含量對滋養層相關的生理和病理有重要的調節作用。研究發現作為激活缺氧反應基因轉錄的調節因子,缺氧誘導因子1α (HIF1α)在低氧條件下可通過調節靶基因血管內皮細胞生長因子(VEGF)的轉錄,參與多種與血管形成有關的疾病。本研究采用免疫組化法和RTPCR技術分別檢測子癇前期和正常胎盤組織中HIF1α、VEGF蛋白和mRNA表達的差異和相關性,初步探討HIF1α及其靶基因在子癇前期發病機制中的作用。

        1 資料與方法

        1.1 研究對象

        選擇2007年5月至2007年7月在沈洲醫院婦產科住院選擇剖宮產結束妊娠者35例,其中子癇前期20例,孕婦年齡24~34歲,平均 (26.9±1.9)歲,平均孕周(36±2)周;子癇前期的診斷標準參照《婦產科學》(第6版)[1]。正常孕婦15例,年齡25~33歲,平均(27.3±1.4)歲,平均孕周(38±2)周。入選病例均無原發性高血壓、心臟病、糖尿病、腎病、貧血及前置胎盤等、近期無急、慢性感染。兩組孕婦年齡及孕周差異均無統計學意義(P>0.05)。

        1.2 方法

        1.2.1 標本采集

        胎盤娩出后立即切取近臍帶附著處全層胎盤組織兩塊,每塊1 cm×1 cm×1 cm,用滅菌生理鹽水反復漂洗后分成兩份,一份置入4%中性多聚甲醛固定,用于免疫組化測定;另一份用無菌紗布吸去水分,裝入RNA酶滅活的凍存管,迅速投入液氮中,整個操作在5 min內完成,過夜后轉入-80℃冰箱保存用于RNA的提取及RTPCR技術檢測。

        1.2.2 免疫組化法檢測胎盤組織中HIF1α、VEGF蛋白的表達

        固定標本常規脫水,石蠟包埋并制成3cm厚度連續切片,經HE染色判斷切片質量后,采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶(SP)連接法在同一時間,同一條件下進行免疫組化檢測。鼠抗人HIF1α單克隆抗體、鼠抗人VEGF單克隆抗體均為美國Novus公司產品。染色步驟參照SP試劑盒(北京中山生物技術有限公司提供)說明書進行,微波修復抗原,一抗滴度均為1:100。 磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。每張切片觀察l0個高倍視野,根據陽性細胞比例及著色深淺計分,細胞無著色或無陽性細胞為0分;細胞染色為淺棕色或陽性細胞1%~25%為1分;細胞染色為棕褐色或陽性細胞26%~49%為2分;細胞染色為深棕色或陽性細胞>50%為3分。根據計分結果判斷陽性等級:0~1分為(-); 2分為(+);3~4分為(++);5~6分為(+++)。

        1.2.3 RTPCR技術檢測胎盤組織中HIF1α、VEGFmRNA的表達 RTPCR擴增引物根據Genebank提供的資料設計,HIF1α、VEGF引物序列見表1。引物及試劑盒由大連寶生生物公司提供。采用Trizol一步法提取胎盤組織總RNA。反應總體積20μl, RNA模板量1μg,參照試劑盒說明進行逆轉錄酶反轉錄。PCR反應條件:94℃預變性5min、94℃變性 40s、,52℃退火1 min,72℃延伸1min,在PCR擴增儀上(美國Perkin Elmer公司產品)共完成32個循環。取5μl PCR產物進行2%瓊脂糖凝膠電泳,β肌動蛋白作為內參照,紫外透射成像系統顯像,測定特異條帶的密度并與內參照比較,得出目的基因片段的相對表達量。表1 HIF1α、VEGF及βactin引物序列(略)

        1.3 統計學方法

        采用SPSS10.0統計軟件進行統計學分析。所測數據以x±s表示,組間比較采用t檢驗和χ2檢驗,相關資料采用Spearman等級相關分析。

        2 結果

        2.1 兩組孕婦胎盤組織中HIF1α、VEGF蛋白表達的比較

        組孕婦胎盤組織中,HIF1α蛋白主要表達在合體滋養細胞和細胞滋養細胞的細胞核中,間質細胞少見。子癇前期胎盤組織中陽性表達明顯增強,棕黃色陽性顆粒主要分布在合體滋養細胞中,強陽性表達率為 45%,明顯高于對照組的13.3%,兩組比較,差異有統計學意義(P

        VEGF在兩組孕婦胎盤組織中的分布基本一致,主要分布在細胞滋養細胞,血管內皮細胞及絨毛間質細胞,在子癇前期組胎盤中VEGF的陽性表達明顯減輕,其中10例染色強度為(+),7例(++),3例(+++);與對照組相比較,子癇前期組VEGF(+++)陽性表達率為15%,明顯低于對照組,兩組比較差異有統計學意義(P

        2.2 兩組孕婦胎盤組織中HIF1α、VEGFmRNA表達水平的比較

        瓊脂糖凝膠電泳擴增結果顯示,子癇前期胎盤組織中HIF1α表達水平分別(0.604±0.013)明顯高于對照組的(0.208±0.007),兩組比較,差異有統計學意義(P0.05);兩組HIF1α、VEGFmRNA表達的圖像分析結果見表3,瓊脂糖凝膠電泳擴增結果見圖1。表3兩組孕婦胎盤組織中HIF1α、VEGFmRNA表達水平的比較(略)注:與對照組比較,11P

        3 討論

        3.1 HIF1α在胎盤組織中的表達及意義

        HIF1屬于bHLHPAS蛋白家族,由α和β兩個亞基組成的異二聚體。缺氧條件下HIF1α和細胞核內穩定存在的HIFβ亞基結合形成有活性的二聚體,從而調控缺氧反應基因的表達。目前已經證實由HIF1α介導轉錄的基因有:VEGF及其受體sFlt1、細胞生成素、內皮素1、Bcl2及糖酵解有關的酶基因等[2]。這些靶基因的產物參與血管的發生及功能調節、細胞能量代謝和細胞凋亡的病理生理過程,是機體對缺氧產生耐受和適應的重要調節機制,HIF1α則是缺氧調節通路上的關鍵環節之一。

        在胎盤形成過程中,滋養細胞的侵潤能力決定妊娠的結局,而滋養細胞的侵潤和胎盤局部氧含量密切相關,低氧可以促進滋養細胞的增殖和分化卻抑制滋養細胞對子宮內膜的侵潤。隨著絨毛間隙血流的增加,滋養細胞的侵潤能力在孕10~12周左右達高峰,然后下降。有研究表明作為氧敏感調控因子,HIF1α在妊娠早期絨毛組織中的表達與TGFβ3的表達同步,妊娠5-8周表達增高,并于妊娠10~12周胎盤氧含量上升時下降,同時證明低氧分壓條件下培養絨毛組織并用反義核酸抑制HIF1α,可以抑制TGFβ3mRNA的表達,故推測缺氧可通過HIF1α下調TGFβ3的表達,從而促進早期滋養細胞向侵襲型分化,有利于胎盤血管重鑄[3]。本研究發現在子癇前期胎盤組織中,HIF1α的蛋白表達明顯增強,其中強陽性表達率顯著高于對照組,同時HIF1αmRNA水平也明顯升高,說明HIF1α從mRNA和蛋白兩個水平參與子癇前期的病理生理過程。

        3.2 胎盤組織中VEGF表達的意義

        VEGF是一種高效特異的內皮細胞有絲分裂原,與其受體sFlt1結合發揮強烈的促血管生長及增加微血管通透性的作用。研究表明VEGF及其受體在早孕期主要表達于細胞滋養細胞,而在中、晚孕期主要位于合體滋養細胞,并且滋養細胞源性VEGF可通過旁分泌調節滋養細胞的分化和代謝[4]。作為重要的血管誘生因子,VEGF在妊娠早期參與胎盤血管網的形成,而在妊娠晚期主要調節血管內皮細胞的通透性,有利于胎兒生長發育。然而關于VEGF在子癇前期胎盤組織中表達的研究結論不一,Chun[5]等研究發現子癇前期胎盤組織中VEGF表達升高同時伴有VEGF受體表達升高,VEGF受體通過抑制VEGF介導的滋養細胞和血管內皮細胞功能調節,導致子癇前期的發生。本研究結果顯示,在子癇前期胎盤組織中,VEGF蛋白表達明顯降低, mRNA表達水平雖有升高,但與對照組比較,差異無顯著性。隨著對VEGF研究的深入,目前至少已發現4種VEGF分子亞型,它們在生物學和結構特性上有所不同[6,7],以往研究應用抗體的不同可能是導致這種差異表達的原因,說明對VEGF亞型在子癇前期發病機制中的作用還需深入研究。

        3.3 胎盤組織中HIF1α、VEGF表達的相關性及意義

        作為HIF1α轉錄調節的一個靶基因,VEGFmRNA在子癇前期胎盤組織中表達雖有升高但不顯著,VEGF蛋白表達明顯降低,推測是子癇前期細胞滋養細胞功能缺陷的結果,即缺氧激活HIF1α的表達并誘導下游VEGF基因的轉錄,表現為VEGFmRNA代償性升高,但由于滋養細胞功能受損VEGFmRNA升高并不明顯,并且蛋白表達顯著降低,從而影響導致胎盤血管構建障礙及血管內皮細胞通透性的改變,加重子癇前期的病理變化。

        目前認為子癇前期的發生是滋養細胞侵潤功能障礙導致胎盤血管重鑄不良的結果,而滋養細胞侵潤受胎盤局部氧含量的精細調控。本研究結果提示,作為缺氧敏感調節因子的HIF1α在子癇前期胎盤組織中蛋白和mRNA表達均增高,可能通過調節下游基因VEGF的轉錄影響滋養細胞的侵潤功能,參與子癇前期的發生發展。因此關于胎盤滋養細胞中HIF1α在低氧應激中的轉錄調節活性,以及對下游基因VEGF表達調控的確切機制有待深入研究,為探討子癇前期的發病機理提供理論基礎。

        【參考文獻】

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        第8篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        [關鍵詞] 單核苷酸多態性;亞甲基四氫葉酸還原酶;甲硫氨酸合成酶還原酶

        [中圖分類號] R715.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210(2014)08(b)-0008-04

        Polymorphisms of MTHFR and MTRR among the Han women in Shouguang City

        TANG Hongying1 LU Yanqiang2 LI Ying2 LI Dongqing1 YANG Qi3

        1.Department of Clinical Laboratory, Shouguang Women and Children Health Care Hospital, Shandong Province, Shouguang 262700, China; 2.Shanghai Institute of Targeted Therapy and Molecular Medicine, Shanghai 200433, China; 3.Center for Women and Children's Health, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100101, China

        [Abstract] Objective To explore the 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) and 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase (MTRR) gene polymorphisms among the Han women in Shouguang City. Methods A total of 787 Han women were recruited. And their oral epithelial cells were collected to extract genome DNA in order to detect gene polymorphisms of MTHFR C677T, A1298C and MTRR A66G using fluorescence quantitative PCR. Then the results were compared with those in other cities in China. Results The frequency distribution of MTHFR C677T among Shouguang women was significantly different with Zhengzhou, Yantai, Zhenjiang, Wuhan, Deyang, Kunming, Huizhou, Qionghai (P < 0.05). The frequency distribution of MTHFR A1298C among Shouguang women was significantly different with Yantai, Zhenjiang, Wuhan, Deyang, Kunming, Huizhou, Qionghai (P < 0.05). The frequency distribution of MTRR A66G among Shouguang women was significantly different with Qionghai (P < 0.05). Conclusion The MTHFR C677T, A1298C and MTRR A66G polymorphism distributions of Han women in Shouguang City are different with other regions, which have visible difference.

        [Key words] Single nucleotide polymorphism; 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase; 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase

        葉酸在人體的代謝需要大量的酶催化,其中5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase,MTRR)是完成葉酸代謝利用的關鍵酶,其基因多態性會影響到酶的活性,進而影響體內同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)水平。體內HCY在甲硫氨酸合成酶的催化下,以維生素B2為輔酶,接受5-甲基四氫葉酸提供的甲基生成甲硫氨酸。5-甲基四氫葉酸由MTHFR催化5,10-亞甲基四氫葉酸還原而來,而維生素B12需要MTRR催化其甲基化維持輔酶的活性,使甲硫氨酸合成酶的催化反應正常進行。因此,這兩種酶的活性與神經管畸形[1]、復發性流產[2]、妊娠期高血壓[3]等疾病的發生密切相關,嚴重影響母嬰健康。

        本研究針對壽光市漢族女性,開展大樣本的分子流行病學調查,旨在闡明本地區人群MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G的遺傳特征,獲取相關群體遺傳數據,為個體化保健提供依據。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2011年12月~2014年1月到壽光市婦幼保健院進行孕前與孕期檢查的漢族女性,排除籍貫非本市者,入組對象共787名,平均年齡(27.65±3.79)歲。根據知情同意原則,采集口腔黏膜上皮細胞。

        1.2 方法

        樣本的基因組DNA提取采用硅膠吸附方法。MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G位點的單核苷酸多態性檢測采用熒光定量PCR技術。相關試劑和儀器均購自美國ABI公司。每個反應體系10 μL,包含1 μL DNA模板(20 ng/μL),5 μL Taqman Universal Master Mix,0.5 μL Taqman-MGB探針和3.5 μL去離子水。反應條件為95℃預變性10 min,92℃變性15 s,60℃延伸1 min,20個循環;89℃變性15 s,60℃延伸90 s,30個循環。反應完成后,在ABI 7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點熒光,利用分析軟件確定各個樣本的基因分型結果。

        1.3 統計學方法

        采用SPSS 18.0軟件進行統計學處理,應用HaploView 4.2軟件分析SNPs的Hardy-Weinberg平衡、LD水平和單倍型結構。計數資料采用率表示,對基因型及等位基因頻率進行χ2檢驗,以P < 0.05為差異有統計學意義。

        2 結果

        2.1 Hardy-Weinberg平衡分析

        MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多態性檢驗結果符合Hardy-Weinberg遺傳平衡,說明樣本具有本區域群體代表性。

        2.2 MTHFR、MTRR基因型和等位基因頻率在不同地區漢族女性中的比較

        如表1、2所示,MTHFR C677T位點的基因型和等位基因頻率,壽光市漢族女性與鄭州、煙臺、鎮江、武漢、昆明、德陽、惠州、瓊海等地差異有統計學意義(P < 0.05)。T等位基因頻率呈現北方高南方低的趨勢。MTHFR A1298C位點的基因型和等位基因頻率,壽光市漢族女性與煙臺、鎮江、武漢、昆明、德陽、惠州、瓊海等地差異有統計學意義(P < 0.05),與鄭州差異無統計學意義(P > 0.05)。C等位基因頻率呈現北方低南方高的趨勢。MTRR A66G位點的基因型和等位基因頻率,壽光市漢族女性與瓊海的差異有統計學意義(P < 0.05),與鄭州、煙臺、鎮江、武漢、昆明、德陽、惠州等地差異無統計學意義(P > 0.05)。

        2.3 MTHFR C677T和A1298C兩位點連鎖情況及單倍型分析

        MTHFR C677T和A1298C兩位點組合情況顯示,TT/AA組合、CT/AA組合占比最高,分別是38.9%和32.5%;CT/AC組合次之,所占比例為14.9%;未發現CT/CC和TT/CC組合,其余組合所占比例均在7%以下。單倍型分析表明,4種組合頻率分別為677T-1298A(62.6%)、677C-1298A(25.2%)、677C-1298C(12.1%)、677T-1298C(0.1%)。兩位點間存在高度連鎖不平衡現象(D'=0.989),單倍型以677T-1298A所占比例最高。張婷等[12]報道貴州布依族、苗族的兩位點間也存在高度連鎖不平衡現象,但單倍型以677C-1298A所占比例最高,表明研究位點在漢族與少數民族間的分布或存在差異。

        3 討論

        我國每年新增出生缺陷約90萬,被成為不光彩的“珠穆朗瑪峰”。山東是我國出生缺陷高發省份之一,2007~2010年出生缺陷監測結果顯示,先天性心臟病、多指(趾)、總唇裂、腦積水、神經管畸形是排名前5位的出生缺陷種類,并且出生缺陷發生率逐年上升[13]。出生缺陷的發生受環境、營養和遺傳因素的共同影響。作為參與體內葉酸代謝的關鍵酶,MTHFR C677T和A1298C位點的多態性會降低酶活性,影響葉酸代謝和利用,與出生缺陷(神經管畸形、先天性心臟病、唇腭裂、唐氏綜合征等)以及孕產婦疾病(復發性流產、妊娠期高血壓等)密切相關。C677T和A1298C存在協同作用,雙雜合子個體與僅含C677T突變的個體相比,同型半胱氨酸濃度顯著升高。本研究顯示雙雜合子占14.9%,與Benrahma等[14]報道的結果一致。

        本研究顯示,壽光市漢族女性MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G位點的單核苷酸多態性與其他地區漢族女性的情況存在差異。其中,MTHFR C677T位點的基因型和等位基因頻率,壽光市漢族女性與鄭州、煙臺、鎮江、武漢、昆明、德陽、惠州、瓊海等地差異有統計學意義(P < 0.05);MTHFR A1298C位點的基因型和等位基因頻率,壽光市漢族女性與煙臺、鎮江、武漢、昆明、德陽、惠州、瓊海等地差異有統計學意義(P < 0.05),與鄭州差異無統計學意義(P > 0.05);MTRR A66G位點的基因型和等位基因頻率,壽光市漢族女性與瓊海的差異有統計學意義(P < 0.05),與鄭州、煙臺、鎮江、武漢、昆明、德陽、惠州等地差異無統計學意義(P > 0.05)。此外,MTHFR基因C677T和A1298C兩位點在研究人群中存在連鎖不平衡現象,單倍型以677T-1298A所占比例最高。

        這種地域分布差異可能與人群對多種疾病的群體易感性有關。MTHFR 677T等位基因頻率呈現北方高南方低的趨勢,與我國出生缺陷發病率北方高南方低的趨勢一致。有研究表明,T基因型女性在未服用葉酸增補劑及低葉酸飲食的情況下,其胎兒唇腭裂的發生風險均會增加,若以上兩種情況同時存在,則風險進一步增高。反之,如果能夠補服葉酸增補劑、提高飲食中葉酸的含量則可以降低胎兒唇腭裂的發生風險[15]。

        目前的孕期保健措施是從孕前3個月到孕早期3個月,每天增補葉酸400 μg。對于那些由于基因多態性造成葉酸代謝障礙的人群,在補充相同劑量葉酸的情況下,血漿葉酸的濃度較正常人低,HCY水平明顯升高。因此,通過對育齡女性進行遺傳篩查,針對在遺傳上存在葉酸代謝障礙風險的人群,采取增加葉酸等B族維生素的補充、定期監測紅細胞葉酸水平、提高產前篩查和孕期管理依從性等干預措施,是有效達到出生缺陷及孕期疾病一級預防目的的重要方法,也是提高人口素質的必要手段。

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        第9篇:妊娠高血壓基因檢測范文

        關鍵詞:環狀RNA 生殖 妊娠 復發性流產 產前診斷

        新進入人們視野的環狀RNA廣泛存在于真核細胞質中,是具有調控基因表達作用的內源性非編碼RNA分子。不同于以線性拼接方式形成的RNA,環狀RNA呈閉合環狀結構,無5′端帽子和3′端尾巴。人們最早從病毒及類病毒中得到對環狀RNA認知[1],但早期的研究者認為環狀RNA是RNA產生過程中發生了錯誤的剪接而形成的,無明確的生物學功能,從而使其未得到重視和充分的研究[2]。隨著近年來高通量測序技術的發展,環狀RNA不斷從各種真核生物細胞中被發現[3-4],使人們不斷對其功能進行深入研究。因其特殊的生物學特性,環狀RNA在疾病的發生發展機制及早期診斷方面成為近年來的熱點研究項目[5]。目前環狀RNA在人類生殖與妊娠方面的相關研究較腫瘤相關疾病要少的多,因此本文將簡要介紹環狀RNA的形成、特性及生物學功能,并重點著眼于環狀RNA在不孕癥輔助生殖、復發性流產(recurrent spontaneous abortion,RSA)、妊娠合并癥及產前診斷中的相關研究及應用前景。

        1 環狀RNA簡介

        1.1 環狀RNA的形成

        環狀RNA的產生機制及過程尚未徹底明確,其目前主要可分為五類,包括外顯子來源的環狀RNA(ecircRNAs)、內含子來源的環狀RNA(ElciRNAs)、環狀基因組間RNA(包括類病毒和丁型肝炎病毒)、RNA加工過程中的環狀RNA中間產物(tRNA或r RNA加工過程中的中間體)、具有持家基因功能的環狀RNA(ciRNAs)(RnaseP或某些snoRNA)[6]。在環狀RNA的形成機制上,最早由Jeck等[7]提出RNA成環模型,即套索驅動環化和固有配對環化。環狀RNA分子主要是由反向拼接形成,即下游外顯子與上游外顯子反方向拼接在一起形成環狀轉錄物。此外,環狀RNA還有另一種形成模式,即依賴于RNA結合蛋白。剪接因子Quaking(QKI)[8]和Muscleblind(MBL)[9],作為連接2個側翼內含子相互靠近的橋梁促進環狀RNA形成。因此推測RNA結合蛋白在RNA環化過程中起重要作用,通過互補序列橋梁和抑制典型拼接促進環化。以上為可能性較大的學說,環狀RNA具體形成機制仍需進一步研究證實。

        1.2 環狀RNA的特征

        目前發現環狀RNA的特征包括以下幾個方面。(1)高豐度:與線性mRNA相比,環狀RNA是分布在人類細胞中最普遍的分子。(2)穩定性:環狀RNA是共價閉合環狀結構,因此可避免被脫支酶和核酸內切酶降解。(3)物種保守性:環狀RNA在不同物種中具有進化過程的高度保守性[10]。(4)環狀RNA在不同組織及發育的不同階段具有特異性[11]。(5)環狀RNA在真核生物中主要分布于細胞核,且可能在轉錄或轉錄后過程中調節基因的表達,ecirc RNA主要分布于細胞質中,可能與miRNA的功能特性有所重疊[12]。(6)某些環狀RNA包含miRNA拼接位點,可競爭性抑制內源性miRNA的調節活動[7]。

        1.3 環狀RNA的生物學功能

        環狀RNA在真核細胞中可與多種分子相互作用,其生物學功能可概括為以下五種:(1)部分環狀RNA可充當miRNA競爭結合miRNA受體,降低miRNA對靶基因的抑制作用,從而調節靶基因的表達水平[13]。(2)環狀RNA可與m RNA部分堿基配對,直接調控m RNA,也可通過特異的RNA-RNA途徑來調控轉錄過程[14]。(3)環狀RNA可通過調節親本基因的表達參與生物學過程的調控。外顯子來源的ecirc R-NA及內含子來源的ElciRNAs主要位于細胞核內,通過聚合酶Ⅱ和小核糖核蛋白相互作用調控親本基因轉錄。(4)環狀RNA可通過與蛋白結合抑制蛋白活性、募集蛋白質復合體的組分或調控蛋白質的活性。Du等[15]發現環狀RNA-Foxo3可與細胞周期依賴激酶2(CDK2)形成復合體,抑制CDK2對細胞分裂的促進作用,阻礙細胞周期進展。(5)環狀RNA可翻譯為蛋白質。有研究證明[16],哺乳動物或人類細胞中的環狀RNA可以不依賴任何核糖體進入位點、Poly A尾或帽子結構,以滾環式擴增,翻譯出足量的蛋白產物。

        2 環狀RNA與人類生殖

        隨著人們生活壓力、環境污染及飲食安全問題等的加劇,不孕不育的發病率在逐年上升,生殖醫學也隨之蓬勃發展,但也有許多治療困難或多次移植失敗的病例,為此了解在環狀RNA領域與人類生殖疾病,如不孕癥、RSA的相關研究進展,從中可能找出提高成功率的方法。不孕癥的定義是夫婦有規律性生活、未采取任何避孕措施至少1年未受孕。不孕癥的發生受許多因素影響,這里只簡要介紹在環狀RNA領域研究較多的不孕癥相關因素。

        2.1 環狀RNA與女性不孕

        可明確的女性不孕原因較多與環狀RNA研究相關的疾病有多囊卵巢綜合征(PCOS)、子宮內膜異位癥(EMs)等。Che等[17]的研究在20例PCOS患者中篩選出與對照組表達差異明顯的4個環狀RNA,并發現其相應的microRNA結合位點與PCOS疾病相關。Ma等[18]檢測出在PCOS患者的卵丘細胞中有286個環狀RNA差異表達,斯皮爾曼等級相關(Spearman rank correlation)系數表明PCOS組中血清睪酮水平與hsa_circ_0043533和hsa_circ_0097636的表達成正相關。分析顯示環狀RNA可能參與細胞周期、卵母細胞減數分裂、孕酮介導的卵母細胞成熟、FOXO信號通路及甘油磷脂代謝等。Zhang等[19]則發現PCOS組顆粒細胞中27個顯著差異表達的環狀RNA,在涉及炎癥、增殖和與血管內皮生長因子相關的信號傳導途徑中發揮作用,表明這些環狀RNA參與了PCOS的發生發展,并存在作為PCOS生物標志物的可能。

        EMs是指因內膜細胞種植到子宮腔以外的部位而導致的以痛經和不孕為表現的一種婦科疾病,其發病機制目前不明。有研究[20]對4對卵巢巧克力囊腫及子宮在位內膜檢測,篩選出553個差異表達的環狀RNA,涉及9個信號轉導通路可能與EMs的發病機制相關。Wang等[21]的研究結果篩選發現294個環狀RNA差異表達,功能分析揭示了它們與絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)信號通路等的調控相關,可能是該病發病機制及治療靶點之一。還有研究[22]發現hsa_circ_0067301/miR-141-5p/Notch-1軸在EMs的上皮-間質轉化過程中起著重要的調節作用,提示了EMs發病機制的分子基礎。臨床輔助生殖中胚胎的反復移植失敗亦是不容忽視的問題之一,已有研究[23]以環狀RNA微陣列技術篩選出反復植入失敗的女性子宮內膜活檢組織中的環狀RNA表達譜,結果表明,有856種環狀RNA有顯著表達差異,其中hsa_circ_070 616,hsa_circ_103716等七種最為明顯,有成為臨床輔助生殖提高移植成功率新標志物的價值。

        此外亦有女性生殖系統結核等,關于結核病與環狀RNA的研究已有多篇文獻報道[24-26]人外周血單個核細胞中表達的hsa_circ_0005836、hsa_circ_001937等數個具有生物標志物前景的環狀RNA,但未明確提到女性生殖器結核,仍需進一步研究。

        2.2 環狀RNA與男性不育

        導致男性不育的因素很多,包括先天性的發育不良、炎、輸精管梗阻、萎縮、免疫性不育、內分泌失調等,除上述因素外,畸形、無精、少弱精等更為常見。Dong等[27]通過高通量測序技術揭示了人類組織中的環狀RNA譜,對首次發現能產生環狀RNA的1017個宿主基因進行基因本體論(gene ontology,GO)分析,結果顯示,這些基因與發生、運動、減數分裂細胞周期和受精作用等過程相關。李穎[28]的研究顯示,約83%環狀RNA為外顯子來源環狀RNA,而差異表達的環狀RNA在鞭毛、鞭毛軸絲、甲基轉移酶活性等方面富集較多。研究篩選出了hsa_circ_MYO9B、hsa_circ_WHsci(8)等五條環狀RNA,檢測結果發現hsa_circ_WHSCI(8)、hsa_circ_WHSCI(6)、hsa_circ_CAMSAP1三種環狀RNA在弱精組中的表達水平顯著上調。另有學者[29]研究發現,DAZ(Deleted in Azoospermia)家族基因中Boule基因上產生的環狀RNA可能參與調控Boule的生殖特異表達,從而影響男性的少弱精癥。環狀RNA的高穩定性使其在精漿等體液中可以被檢測,未來具有成為男性不育疾病標志物的臨床價值。

        2.3 環狀RNA與RSA

        RSA是生殖醫學研究中的重要課題之一,美國生殖醫學學會將≥2次的妊娠失敗定義為RSA[30]。導致RSA的因素并不完全明確,基因表達異常是發生RSA的重要因素,故環狀RNA在RSA的病因及發病機制的深入研究中有著重要的作用。Qian等[31]對RSA孕婦與正常孕婦的絨毛膜組織中的環狀RNA表達進行差異性分析,結果顯示,hsa_circ_104948、hsa_circ_104547等8種環狀RNA在兩組之間有顯著的差異性表達,進一步分析表明,絨毛中環狀RNA的差異性表達可能與其充當miRNA調節靶基因的表達水平的功能相關。目前對與RSA相關的環狀RNA的研究較少,未來仍有廣闊的研究空間。

        3 環狀RNA與妊娠

        3.1 妊娠合并癥

        臨床產科常見的妊娠合并癥有妊娠期糖尿病(gestation diabetes mellitus,GDM)、妊娠合并高血壓疾病、胎盤異常等,嚴重的妊娠合并癥可導致不良的妊娠結局,甚至威脅母兒生命。以環狀RNA的生物學特性在未來有可能用于早期預測妊娠合并癥的發生,從而指導臨床工作者得以提前預防或干預。子癇前期(preeclampsia,PE)具有發病迅速、病情進展快等特點,在妊娠合并高血壓疾病中是造成不良母兒結局較多的一種[32],有多項研究[33-35]從患有PE孕婦的血細胞或胎盤組織中篩選與正常孕婦組表達差異較大的環狀RNA,而Zhang等[34]發現12種環狀RNA呈現明顯的差異性表達,其中hsa_circ_101222的表達差異更是高達10倍左右,提示其可能作為PE的診斷標志物以輔助臨床,但Prefumo[36]也提出距離環狀RNA正式進入臨床作為檢測指標還有很多的困難需要克服。

        GDM是指妊娠期首次發生任何程度的由糖耐量異常引起的高血糖,在中國的發病率高達14.8%[37],其具體原因及發病機制尚未明確,可能與遺傳、胰島素分泌等因素有關。近年有研究[38]通過檢測孕婦外周血中環狀RNA豐度表達發現,GDM孕婦和正常孕婦有2678個差異表達倍數>2.0的環狀RNA,其中hsa_circ_0042852、hsa_circ_0004001兩種環狀RNA及其參與的調控網絡與調節能量代謝的信號通路相關,提示了環狀RNA可能參與調控GDM發病機制的某些代謝環節。Yan等[39]發現GDM孕婦胎盤絨毛中227種環狀RNA表達顯著增高,255種明顯降低,并存在大量的GDM發病相關的miRNA結合位點,提示環狀RNA的異常表達可能與GDM的發生相關。還有研究[40]檢測出GDM孕婦胎盤組織中有46個環狀RNA差異表達明顯,分析結果提示這些環狀RNA的來源基因與內分泌抵抗以及晚期糖基化終產物受體通路(AGE-RAGE)有關,在多種糖尿病并發癥中發揮重要作用,并與GDM的不良妊娠結局密切相關。

        3.2 產前診斷

        胚胎發育是一個復雜的過程,環狀RNA在胚胎發育過程中可能具有獨特而重要的功能,可作為研究胚胎發育不同階段的標志物。Xu等[41]的研究系統檢測出了胎兒與成人各類組織中含有的環狀RNA表達水平并不相同。而在人類胎兒腦部的發育期間,環狀RNA在某些特殊區域富集較為明顯[42]。在臨床應用中,隨著轉錄組測序(RNA-seq)技術的發展,以體液中的環狀RNA作為檢測指標具有較強的發展潛力及可操作性。目前應用廣泛的產前篩查主要使用全基因組測序學方法來研究人類三體征(包括13-三體、18-三體和21-三體綜合征),以鑒定這些特定非整倍性染色體中的每一個基因表達特征。林南新等[43-44]研究得到了13-三體綜合征患者臍帶血或母血中差異表達的環狀RNA,并推測hsa_circ_0002473、hsa_circ_0005 651等環狀RNA及其靶基因可能成為13-三體綜合征無創性產前篩查診斷的新生物標志物;而hsa_circ_0001649可能成為18-三體綜合征潛在的新標志物[45]。常燕[46]的研究顯示hsa_circ_103112在21-三體綜合征患兒的臍帶血及其母體外周血均有顯著差異性表達,其靶基因USP25也與臨床癥狀的產生有關,可能成為21-三體綜合征的臨床標志物。

        4 小結與展望

        因環狀RNA擁有廣泛性、穩定性、特異性等生物學特性且具有調控基因表達的重要功能,近年來逐漸成為生物醫學領域的研究熱點,但目前僅少量研究環狀RNA與人類生殖及妊娠相關。隨著生物信息及測序技術的發展,環狀RNA在人類繁衍、優生優育方面具有廣闊的研究價值及發展前景。

        環狀RNA可以被分泌至細胞外環境中,可通過臨床普遍檢測標本如血液、尿液、分泌物等檢測出來,用于臨床診斷或研究較為方便。目前的相關研究主要流程為找出患病組較正常組獨特上調或下降表達的某些環狀RNA,構建環狀RNA-miRNA-mRNA相關網絡,并分析其與某些蛋白或信號通路的關聯,從而揭示疾病的病理發病機制并期望以之作為生物標志物應用于臨床早期預測干預以及治療。但如何從大量差異表達的環狀RNA中較為準確地篩選出與目標疾病相關聯的某一個或幾個還是目前亟待改善的問題,實驗室的研究成果距離臨床應用亦有很長的一段路要走,尚需生物技術與器材的繼續發展和對基因調控研究的繼續深入。研究人員對已知的差異調控的環狀RNA進行深入挖掘及大數據分析可能促進環狀RNA與疾病關系的進一步確定,從而加快臨床應用的步伐,這需要研究者們的共同努力。

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