前言：一篇好文章的誕生，需要你不斷地搜集資料、整理思路，本站小編為你收集了豐富的白薇阿姨主題范文，僅供參考，歡迎閱讀并收藏。
【摘要】 目的 構建一種能預防Asia Ⅰ型口蹄疫病毒（FMDV）的感染表位重組蛋白疫苗，并對其免疫學活性進行研究。方法 以Asia Ⅰ型FMDV VP1上的B細胞表位和T細胞表位氨基酸序列為抗原位點，設計了包含上述位點的、具有最佳空間構象的重組蛋白，命名為“CZ1”。通過PCR及基因克隆等方法構建了其表達質粒，在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導表達。通過鎳親和層析和G25凝膠過濾層析純化及復性，獲得具有免疫學活性的重組蛋白CZ1。免疫豚鼠獲得含針對AsiaⅠ型FMDV中和抗體的血清，通過細胞中和試驗及乳鼠中和試驗，檢測豚鼠血清中抗FMDV的保護性中和抗體滴度。結果 該基因工程重組蛋白能夠在動物體內誘導產生抗AsiaⅠ型FDMV具有保護性的中和性抗體。結論 該基因工程重組蛋白有望開發成預防AsiaⅠ型FDMV感染的新型疫苗。
【關鍵詞】 基因工程疫苗；FDMV；重組蛋白；活性檢測
口蹄疫（FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的一種人和動物共患的急性發熱性高度接觸性的傳染病〔1〕。傳統FMD疫苗為弱毒疫苗或滅活疫苗，雖具有良好的免疫原性，但由于存在著滅活不徹底以及防護不當，而致病毒擴散傳播的危險，這些不安全因素促使人們尋求新型的疫苗。有研究證明，T和B細胞抗原原位串聯連接構建而成的基因工程疫苗能引起有效的機體免疫應答，有利于具有保護性的中和抗體的產生〔2〕。本研究以Asia Ⅰ型FMDV VP1上的B和T細胞表位氨基酸序列為抗原位點，采用計算機軟件篩選出最佳的表位組合形式，擬利用基因工程方法構建、表達包含上述位點的氨基酸序列的重組蛋白，以探索一種新型的AsiaⅠ型FMDV基因工程疫苗。
1 材料與方法
1.1 菌種、質粒、引物、試劑、動物及FMD滅活疫苗
JM109菌種、BL21(DE3)菌種、質粒pMD18T和pET28a(+)均由本室保存。引物均由上海生工生物工程技術有限公司合成。Taq DNA聚合酶、限制性內切酶、dNTP、T4連接酶均購自TAKARA公司。IPTG購自Promega。其他試劑均為國產分析純或試劑純。層析介質NiSepharose 4B、G25 Superdex 購自Healthcare GE。牛AsiaⅠFMD滅活疫苗購自內蒙古生物藥品廠。豚鼠購自長春高新技術開發區醫學動物實驗研究中心。
1.2 重組質粒pET28aCZ1的構建及鑒定
結合文獻報道，選取Asia Ⅰ型VP1上的B和T細胞表位的氨基酸序列，結合計算機空間構象模擬篩選出多個T、B細胞表位串聯形式的重組蛋白。用PCR法構建表位的基因序列，將其與pMD18T連接后，構建串聯的重復序列；采用EcoRⅠ和Hind Ⅲ雙酶切后，將基因片段亞克隆至經同樣雙酶切的pET28a（+）質粒上，構建成含目的基因片段的pET28aCZ1重組質粒；送上海生工生物工程技術有限公司進行測序。
1.3 CZ1重組蛋白疫苗的表達
將重組質粒pET28aCZ1轉化至E.coli BL21(DE3)表達菌中，經LB平板篩選后，挑取單克隆接種至LB培養液，于37℃、220 r/min振蕩培養，當菌液A600=0.6時，加入IPTG至終濃度為0.5 mmol/L，37℃、220 r/min振蕩誘導、培養3 h，離心收集細菌。取誘導前后樣品進行SDSPAGE鑒定。
1.4 CZ1蛋白的純化
取10 g濕菌與裂菌液（含8 mol/L尿素）按1∶5(M/V)重懸后，4℃、攪拌4 h。10 000 r/min離心15 min，取上清加載至預先平衡的NiSepharose 4B層析柱中。用含4 mol/L尿素的洗滌液洗滌至A280到基線后，洗滌液中尿素濃度降至3 mol/L，洗滌1 h后，尿素濃度降至1 mol/L洗滌3 h后，洗脫CZ1蛋白；收集目的蛋白后，加載到預先平衡的G25 Superdex層析柱中，收集CZ1蛋白。將每步驟留取的樣品進行SDSPAGE鑒定。
1.5 豚鼠免疫
取3只體重為300 g左右豚鼠，股內側肌肉注射CZ1蛋白質（200 μg/只），同時設立PBS對照和AsiaⅠ型FMDV滅活疫苗陽性對照。免疫后第21天采集血清。
1.6 中和試驗
①96孔板細胞培養板中加50 μl/孔的細胞維持液，再加入50 μl/孔倍比稀釋的免疫后21 d的豚鼠血清，最后加入50 μl/孔200 TCID50稀釋的病毒，CO2培養箱中孵育1 h后，加入BHK21細胞，CO2培養箱中培養72 h后，萘黑藍染色，Karber法計算血清中和抗體滴度。②取滅活補體的免疫21 d后的豚鼠血清分別按1∶32、1∶64、1∶128、1∶256稀釋，病毒用維持液稀釋至200 TCID50/100 μl，將病毒稀釋液和各稀釋度的血清等量混合后，37 ℃水浴1 h，乳鼠背部注射，100 μl/只，每份血清的每個稀釋度注射4只二日齡乳鼠，觀察并記錄注射后68 h每組乳鼠的存活情況，并以Karber法計算保護性中和抗體的滴度。
1.7 統計學處理
應用SPSS11.0軟件進行兩組間方差檢驗。
2 結 果
2.1 重組蛋白質空間結構的預測
通過DNA star軟件及Expasy網站，對表位的多種構建方式進行蛋白質的二及三級結構預測，篩選出一種能模擬天然構象的表位組合形式，其空間結構預測結果見圖1，其RGD序列（如箭頭所示）充分暴露在細胞表面，可能有利于中和性抗體的產生。后續實驗按照這種表位組合形式構建并表達目的蛋白，并命名為“CZ1”。
2.2 pET28aCZ1重組質粒的構建
通過PCR法合成目的基因經TA連接后，將其亞克隆至原核表達載pET28a，獲得重組質粒pET28aCZ1。pET28aCZ1 經EcoR I和Hind Ⅲ雙酶切后，經1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，與預期相符（預期為945 bp），見圖2。DNA測序結果與預期相符。
2.3 CZ1蛋白的表達及純化
將重組質粒pET28aCZ1轉化至大腸桿菌BL21(DE3)表達菌后，接種至LB培養基中，待細菌生長至A600=0.6時，加入IPTG繼續誘導培養3 h。SDSPAGE分析顯示，目的蛋白質分子量約為42 kD，與預測結果相符，表達產量約占菌體總蛋白的50%左右。經誘導后的菌體，以8 mol/L 尿素裂解包涵體，上清經鎳親和層析和G25凝膠過濾層析純化，得到純度達到90% 的重組蛋白CZ1。見圖3。
2.4 FMDV細胞中和試驗
觀察在牛Asia Ⅰ型FMDV活病毒的攻擊下，CZ1蛋白免疫的豚鼠血清能否中和該病毒對BHK21細胞的感染。若該血清中含有針對牛AsiaⅠ型FDMV的中和抗體，則可中和FMDV對BHK21細胞的感染而使其存活。結果顯示，免疫后第21天的3份豚鼠血清中和抗體滴度的幾何均數為286，滅活病毒組為320，與PBS組（≤3）比較差異顯著(P
2.5 中和試驗
觀察在活的Asia Ⅰ型FMDV的攻擊下，CZ1蛋白免疫的豚鼠血清能否保護乳鼠抵抗該病毒的攻擊。將PBS組和CZ1蛋白免疫的各3份豚鼠血清分別按1∶32、1∶64、1∶128、1∶256稀釋，分別與FMDV孵育1 h后，注射4只乳鼠。如豚鼠血清中含有針對AsiaⅠ型FMDV的中和抗體，則乳鼠存活。結果顯示，CZ1重組蛋白免疫的3份豚鼠血清中，針對Asia I型FMDV的中和抗體滴度分別為1∶90、1∶256和1∶90，幾何均數為1∶127，與PBS組比較差異顯著(P
3 討 論
FMDV共有 A、O、C、Asia 1、SAT 1、SAT 2、SAT 3等7個血清型，血清型之間沒有交叉免疫〔3〕；在我國，FMD疫情主要以O型、A型、AsiaⅠ三個血清型為主。2005 年初，我國江蘇、山東等省相繼暴發了AsiaⅠ型FMD，感染動物以牛為主，波及我國大多數省區〔4〕。基因工程疫苗由于安全有效、價廉、易于大規模生產等，成為新型疫苗研究的熱點。
在本研究中，根據蛋白質的一級結構決定三級結構從而決定蛋白質功能的原理，通過計算機模擬空間構象的方法篩選最適的基因序列，這種方法大大節省了時間、節約了成本。在設計時，考慮我國及周邊國家AsiaⅠ型 FMDV 流行株VP1 基因的抗原位點，以 FMDV VP1 的B和T細胞表位串聯的方式，成功地構建了由6個表位組成的重組蛋白。選用大腸埃希氏菌作為表達系統，并考慮了大腸桿菌密碼子的偏愛性，對部分基因序列進行了同義突變，以便提高多表位基因在大腸桿菌中的表達效率〔5，6〕，極大提高了重組蛋白CZ1的表達量，約占菌體總蛋白的50%。雖然pET表達系統所表達的蛋白產物帶有6個His標簽，易于純化，但大腸埃希氏菌表達系統表達的蛋白缺少諸如糖基化和磷酸化之類的翻譯后修飾作用，常形成包涵體，不利于表達產物的純化回收，且對獲得有生物學活性的表達產物造成極大的困難。重組蛋白CZ1為包涵體表達，本室采用了在NiSepharose層析純化的同時，通過逐步降低洗滌緩沖液中的尿素濃度，使重組蛋白CZ1復性，實現了重組蛋白質純化和復性同時進行，極大簡化了工藝。
本試驗結果表明，該重組蛋白疫苗能夠誘導豚鼠產生具有針對Asia Ⅰ型FMDV的保護性中和抗體，可以中和該病毒對BHK21細胞的感染，且能夠保護乳鼠抵抗同型活病毒的攻擊，原因可能是由于重組蛋白CZ1能形成類似于天然FMDV VP1蛋白的三維構象。以上結果表明，該重組蛋白具有保護牛抵抗Asia Ⅰ型 FMDV 的潛能，有可能開被發成為Asia Ⅰ型FMD基因工程疫苗。
致謝：感謝內蒙古金宇生物公司實驗中心協助完成細胞中和試驗和乳鼠保護試驗。
參考文獻
1 姚玉紅.口蹄疫流行現狀及防制措施〔J〕.中國公共衛生，2007;23(6)：7667.
2 冉 波，邵明玉，張培因，等.O型口蹄疫病毒VP1表位重組蛋白疫苗的構建、表達和純化〔J〕.免疫學雜志，2006;22(3)：2658.
3 Grubman MJ，Baxt B.Footandmouth disease〔J〕.Clin Microbiol Rev，2004；4:46593.
4 Guo H，Liu X，Liu Z，et al.Recent outbreaks of footandmouth disease type Asia 1 in China〔J〕.J Vet Med B Infect Dis Vet Public Health，2006；53:2933.
人胎球蛋白A （Fetuin-A）即α2-HeremansSchmid glycoprotein（AHSG） 胎球蛋白A于1944年由Pederson發現，是一種59kD的糖蛋白，是cystatin超家族（半胱氨酸蛋白酶抑制劑家族）的一員，由兩個cystatin樣決定區和一個小的無關決定區組成［1］。AHSG具有多種生物學功能：與骨重塑、胎腦發育密切相關，并能維持體外細胞生長；在腫瘤細胞表面，AHSG結合MMPs，可能涉及到腫瘤的發生、發展。AHSG主要在肝臟合成，含有兩個肽鏈結構糖蛋白。在腦皮質和骨骼骨髓也有人AHSG的分布。研究表明，AHSG在血液循環中可形成可溶性的AHSG鈣磷酸復合物，是體內最強大的抑制軟組織鈣化作用的蛋白質，因此慢性腎病患者非常高的組織或心血管組織鈣化的發生率與此有關。此外，AHSG可以用來觀察代謝綜合征血管鈣化、腎臟移植后軟組織的鈣化、血管和心臟瓣膜的鈣化、動脈粥樣硬化等的生物學指標。本文就AHSG在鈣化、炎癥及胰島素抵抗中的病理作用作一綜述。
1 胎球蛋白A與異位鈣化
目前，國際上對慢性腎病患者的血管鈣化有較深入的研究，引起血管鈣化的原因主要與磷、甲狀旁腺素相關肽、維生素D、骨調節蛋白及脂質紊亂等相關［2］。但體內也存在一些鈣化抑制物，充分利用鈣化抑制物，可減慢尿毒癥病人的血管鈣化的速率，AHSG就是近年發現的主要的系統鈣化抑制物。AHSG廣泛大量地存在于細胞外液，是一重要的循環鈣化抑制劑，在血液中能與基質G1a蛋白（MGP）和鈣、磷形成復合體［3］，抑制磷灰石前體礦物質的形成和沉積，占抑制血清鈣磷沉積作用的50％［4］，AHSG是屬于胎球蛋白族的血漿糖蛋白，主要由肝細胞合成和分泌，隨后進入循環，聚集于骨骼中，在血液和腦脊液中含量都比較高，在鈣化的骨質中濃度最大。AHSG分子的氨基末端存在與轉化生長因子-β（TGF-β）受體相似的序列，可與TGF-β結合，抑制依賴其的成骨細胞增生。TGF-β由骨基質釋放的生長調節因子，在骨形成過程中起重要的調節作用。ASHG的N端富含酸性氨基酸殘基，是堿性磷酸鈣（BCP）的結合位點，可與Ca2+、PO43-形成可溶性的無定形膠體微球，抑制血清過飽和的鈣磷鹽沉積［5］。
AHSG是一種體循環內的系統鈣化抑制物，胎球蛋白的減少可引起異位鈣化，包括軟組織鈣化和血管鈣化，抑制鈣化的作用機制可能是通過與基質Gla蛋白（MGP）、鈣、磷形成復合物，抑制磷灰石前體的形成和沉淀有關，而不影響骨骼礦化。血管鈣化在老年病人，特別是腎功能衰竭的透析病人中大量存在，已有臨床證據顯示ESRD患者血AHSG水平降低，而且低AHSG水平與心血管死亡率、全因死亡率相關［6］。Coen等應用CT對血液透析患者進行了冠狀動脈和腹主動脈鈣化的檢測，同樣發現血AHSG水平與冠狀動脈鈣化積分和腹主動脈鈣化面積相關［7］。Jahnet-Dechent等發現AHSG敲除的老鼠發生嚴重的軟組織鈣化和血管鈣化［4］。近來在腎功能衰竭病人中發現AHSG明顯減少的病人血管鈣化和軟組織鈣化的發生率明顯增加，從而心血管疾病發病率也明顯提高。Kettleler等［8］通過對312例透析病人研究發現，透析病人血清胎球蛋白A水平明顯低于對照組，最近的一項研究顯示低的胎球蛋白A是一個與營養狀態、炎癥和動脈粥樣硬化相關的因素，隨著腎臟替代治療的進行，胎球蛋白A水平進一步下降。這種下降與病人的血磷和鈣磷乘積相關，但與血鈣水平無關。Cozzolino等［9］研究認為透析病人與正常人有相似的AHSG基因多樣性分布，但血清胎球蛋白A減少。透析病人的胎球蛋白A的減少原因認為透析病人營養不良發生率較高，身體抵抗力下降，長期存在一些慢性炎癥有一定的關系，當然透析病人的血管鈣化還與鈣磷代謝、甲狀旁腺功能亢進有關。
2 胎球蛋白A與炎癥
研究認為胎球蛋白也是一種負性炎癥急性相蛋白［10］，感染性疾病（敗血癥、肺炎、腦膜炎、外傷等）的患者在急性炎癥階段血清胎球蛋白A水平明顯下降，而在炎癥控制后其水平升至正常［11］。其原因可能是由于在炎癥狀態下，肝臟對其合成受損，溶菌酶及其他蛋白水解酶對其的降解增加有關。高水平胎球蛋白A可抑制TGF－α的產生，具有對抗炎癥的作用［12］。胎球蛋白參與巨噬細胞滅活，提高細胞攝取陽離子能力以減輕炎癥因子如TGF－α、L－1β和L－6對細胞的損害［13］。近來一些研究認為胎球蛋白不僅是急性炎癥階段明顯下降，透析病人慢性炎癥及慢性重癥肝炎也是明顯下降的，張磐等［14］證實了慢性重型肝炎病人胎球蛋白A水平明顯下降，認為急性肝衰竭時，大量的肝細胞凋亡或壞死，胎球蛋白A合成減少，在抑制TNF－α 過程中被大量消耗和TNF－α通過抑制mRNA轉錄來抑制胎球蛋白A的分泌有關。因此，胎球蛋白A可作為體內反映炎癥狀態的標志物。
3 胎球蛋白A與胰島素抵抗
胎球蛋白A不但具有促異位鈣化，調節炎癥反應，而且具有抑制胰島素受體的酪氨酸酶活性作用［15］。動物實驗表明該蛋白兼有抑制胰島素活性的作用［16］。Mori等發現，降低血清胎球蛋白A是吡格列酮改善胰島素抵抗的可能機制之一［17］，體內缺乏胎球蛋白A增加病人對胰島素的敏感性。肥胖是代謝綜合征的重要組成成分，腹部脂肪過多與重要的代謝異常有關，如胰島素抵抗、高胰島素血癥、高甘油三酯血癥、高血壓病、糖耐量受損和糖尿病等。Norbert等［18］通過對47例無糖尿病的健康白種人進行縱向分析，發現體重減輕后，肝臟脂肪的下降，隨之伴有胎球蛋白A水平的降低。動脈實驗也證實，胎球蛋白A基因敲除的鼠在喂高脂飲食后，體重并不增加，血脂也明顯下降［16］，說明胎球蛋白A與肥胖有明顯相關。高水平胎球蛋白A與罹發代謝綜合征風險增大和所有致動脈粥樣硬化脂質譜異常皆明顯獨立相關［19］。因此它是冠狀動脈病的危險因素之一。
綜上所述，胎球蛋白A是體液中存在的系統性鈣化抑制物，它的缺乏引起組織鈣化，透析病人中存在血液胎球蛋白A明顯下降的現象，透析病人異位鈣化發生率也遠高于正常人，但透析病人引起胎球蛋白A下降的機制并不清楚，能否通過胎球蛋白A作為治療靶點，減少透析病人的異位鈣化是今后研究探索的方向。血液胎球蛋白A水平增高與代謝綜合征相關，致罹發MS風險增大。另外，胎球蛋白A作為體內炎癥標志物指導臨床治療有一定的意義。
參考文獻
1 Pederson KQ.Fetuin，a new globulin isolated from serum．Nature，1944，154：575-576．
2 Chen NX， Moe SM. Vascular calcification in chronic kidney patients. Sem Nephrol， 2004，24:61-68.
3 Thomas GR， Pardini AW． Di seovery of ahigh moleeular weight complex of calcium， phosphate，fetuin，and matrix gamma carboxyglutamie acid protein inthe serum of etidronate-treated rats． J Biol Chem，2002，277：3926-3934．
4 Jahnen-Dechent W，Schinke T，Trindl A， et al．Cloning and targeted deletion of the mousefetuin gene．J Biol Chem，1997，272（50）：31496- 31503.
5 Price PA， Lim JE. The inhibition of calcium phosphate precipitation by fetuin is accompanied by the formation of a fetuin-mineral complex. J Biol Chem， 2003，278（24）:22144-22152.
6 Hermans MM， Brandenburg V， Ketteler M， et al． Associationof serum fetuin A 1eve1S with mortality in dialysis patients．Kidney International advance online pub1ication，2007，7，［Epub ahead of print］．
7 Coen G， Manni M， Agnoli A， et al．Cardiac ca1eifications：Fetuin A and other risk factors in hemodialysis patients．ASAIO J，2006，52（2）：150-156.
8 Ketteler M， Bongartz P， Westenfeld R， et al. Association of low fetuin -A（AHSG） concentrations in serum with cardiovascular mortality in patients on dialysis:a cross-sectional study. Lancet， 2003， 361:827-833.
9 Cozzolino M. Gene polymorphisms and serum alpha-2-Heremans-Schmid levels in Italian haemodialysis patients. Am J Nephrol. 2007，27（6）:639-642.
10 Daveau M，Christian-Davrinche，Julen N，et a1．The synthesis of human alpha-2- HS glycoprotein is down-regulated by cyto-kines in hepatoma HepG2 cells．FEBS Lett，1988，241：191-194．
11 Ruminy P， Gangneux C. Gene transcription in hepatocytes during the acute phase of a systemic inflammation:from transcription factors to target genes. Inflamm Res， 2001，50（8）:383-390.
12 Ombrellino M， Wang H， Yang H， et al. Fetuin， a negative acute phase protein ， attenuates TNF synthesis and the innate inflammatory response to carrageenan. Shock， 2001， 15（3）:181-185.
13 Wang H，Zhang M，Bianchi M，et a1．Fetuin（alpha2-HS-gly-coprotein） opsonizes cationic macrophagede activating mole-cules．Proc Natl Acad Sci USA，1998，95（24）：14429-14434.
14 張磐.慢性重型肝炎患者血清胎球蛋白A的臨床意義.中國感染控制雜志，2007，6（4）：227-230.
15 Ren J，Davidoff AJ．alpha2-Heremans Schmid glycoprotein，aputative inhibitor of tyrosine kinase，prevents glucose toxicityassociated with cardiomyocyte dysfunction．Diabetes MetabRes Rev，2002，18（4）：305-310．
16 Mathews ST， Singh GP. Improved inslin sensitivity and resistance to weight gain in mice null for the Ahsg gene. Diabetes，2002，51（8）:2450-2458.
17 Mori K， Emoto M.Association of serum fetuin-A with insulin resistance in Type 2 diabetic and nondiabetic subjects.Diabetes Care，2006， 29（2）: 468-468.
【關鍵詞】 小牛血清去蛋白；阿魏酸鈉；高壓氧；急性一氧化碳中毒
[Abstract] Objective Discuss the treatment effect of deproteinized calf bloodserum，sodium ferulate and high pressure oxygen on acute carbon monoxide poisoning. Methods Seventy-five cases with coma acute carbon monoxide poisoning were randomly pided into two groups: the treated group (37) and the control group(38). The two groups were treated with high pressure oxygen，high flow oxygen uptake and support treatment，The treated group were treated with deproteinized calf bloodserum and sodium ferulate . The control group were treated with Bao’erlindanjian act medicaments. Results The occurrence and injury degree of myocardial damage and delayed encephalopathy were markedly attenuated（P
[Keywords] deproteinized calf bloodserum; sodium ferulate; high pressure oxygen; acute carbon monoxide poisoning
急性一氧化碳（CO）中毒患者經搶救在急性中毒癥狀恢復后易發生遲發性腦病，近年來遲發性腦病及其嚴重的后遺癥已引起高度重視。自2008 年10 月我們對收治的中、重度急性CO中毒37 例患者應用阿魏酸鈉、小牛血清去蛋白聯合高壓氧治療，收到較好的臨床效果。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
在有昏迷史的75 例急性CO中毒住院病人中，隨機分為治療組和對照組。治療組37 例，男16 例，女21 例，年齡14～80 歲，平均年齡47 歲；對照組38例，男18 例，女20 例，年齡13～82 隨，平均47.5 歲。2 組性別、年齡、既往史、中毒程度無顯著差異性（P>0.05）。
1.2 治療方法
2 組均在確診后生命體征平穩的情況下即行高壓氧治療，急性期每天2 次，恢復期每天1 次，療程15～30 次，同時給高流量氧氣吸入3～5 天及對癥支持治療。治療組應用阿魏酸鈉300 mg入5%葡萄糖250 ml中靜脈滴入，小牛血清去蛋白1.2 g入5%葡萄糖250 ml中靜脈滴入，連用14 天。對照組應用胞二磷膽堿等藥物。
1.3 觀察指標
入院后第1、3、5 天靜脈查心肌酶譜及心電圖，觀察心肌損傷的發生率及其嚴重程度，記錄神智轉清的時間，出院后2 個月內電話隨訪病人了解遲發性腦病發生的情況。
1.4 診斷標準
有明確CO氣體接觸史，均有昏迷過程，除外其他疾病導致的昏迷，碳氧血紅蛋白均大于50%；心肌損傷的診斷標準及評分按2008 年1 月北京市科委重大項目“多器官功能障礙綜合征/降低病死率研究”課題組發表的《多器官功能中障礙綜合征（MODS）診斷標準、病情嚴重程度評分及預后評估系統和中西醫結合證型診斷》標準[1]。
1.5 統計方法
計數資料采用x2檢驗，計量資料采用兩樣本t檢驗分析，P
2 結果
2.1 2 組心肌損傷的發生率及其嚴重程度評分
見表1。
表1 2組心肌損傷的發生率及嚴重程度評分比較
組別例數（n）心肌損傷（n）嚴重程度評分(n)
1分2分3分
治療組3716*（43.2）114*1
對照組3825*（63.1）714*4
與對照組比較P*
2.2 2組昏迷時間遲發性腦病發生率及死亡率比較
見表2。
表2 2組昏迷時間、遲發性腦病發生率及死亡率比較
組別例數（n）昏迷時間（h）遲發性腦病（n）死亡（n）
治療組374.62±2.46**1*（2.7）1（2.7）
對照組387.25±3.319*（23.6）2（5.2）
與對照組比較P*
3 討論
急性一氧化碳中毒導致腦缺氧后，腦血管隨即麻痹擴張，腦容積增大，腦內神經細胞ATP很快耗盡，鈉泵不能運轉，納離子積累過多，導致嚴重的細胞內水腫而血管內皮細胞腫脹，造成腦血液循環障礙，進一步加劇腦組織缺血缺氧，導致昏迷，經搶救在急性中毒癥狀恢復后經過數天或數周表現正常或接近正常的“假愈期”后，再次出現以急性癡呆為主的神經精神癥狀和錐體外系癥狀的腦功能障礙。其機理：①微栓子學說：急性中毒后缺氧致血管內皮細胞遭受損害，內膜粗糙引起血小板聚集形成微栓子，使白質彌散缺氧缺血致脫髓鞘改變，②自由基學說：缺氧后新供氧時產生大量自由基(類似缺血再灌注)，自由基所誘發的脂質過氧化反應對神經纖維髓造成損害。由于腦組織對缺氧的耐受能力最差，最先受累的是腦組織其次是心肌。與本研究結果相似：心肌損傷的發生率54.7%。
阿魏酸鈉是從當歸川芎中提取的有效單體成分，其化學名3—甲基—4羧基桂皮酸鈉鹽2 水化合物，阿魏酸鈉能擴張心腦血管，增加組織血液灌流量，改善微循環，減少組織細胞的缺血缺缺氧，促進細胞修復及再生。阿魏酸鈉已被證實能直接捕獲氧自由基，其分子結構中的酚羥基具有消除自由基的功能。許多研究表明， 阿魏酸鈉對羥自由基和過氧化氫有直接清除作用，可減少超氧自由基和H2O2引起的膜脂質過氧化，降低MDA的生成，是一種很強的天然抗氧化劑[2]。小牛血清去蛋白注射液，由多種游離氨基酸、小分子肽和寡糖等成分制成，能夠提高局灶性腦缺血大鼠腦血管的化學儲備能力[3]，對缺氧引起腦細胞損傷可改善腦細胞能量代謝，促進細胞對氧的攝取，保護在缺氧狀態下的腦神經細胞[4]。其藥理作用有：①作用于神經細胞膜上的葡萄糖載體，促進細胞對氧和葡萄糖的攝取；②促進線粒體合成ATP，改善缺血狀態下細胞對氧的利用，活化細胞；③轉變細胞的無氧糖酵解為有氧糖代謝，延長細胞在缺血缺氧狀態下生存的時間，增加組織細胞的抵抗力；④可以抑制缺血瀑布中的重要介質一氧化氮的合成，從而全方位阻斷缺血瀑布反應；⑤小分子激活肽能夠阻斷并修復損傷的神經細胞[5]。
本研究顯示中、重度急性CO中毒后應用小牛血清去蛋白、阿魏酸鈉聯合高壓氧治療，治療組較對照組心肌損傷的發生率及嚴重程度評分顯著降低（p
參考文獻
[1] 北京市科委重大項目“多器官功能障礙綜合征/降低病死率研究”課題組.多器官功能中障礙綜合征診斷標準、病情嚴重程度評分及預后評估系統和中西醫結合證型診斷[J].中國危重病急救醫學，2008，20(1):1-3.
[2] 劉文林，楊曉風，胡曉紅.阿魏酸鈉的臨床應用[J].中國醫藥指南，2009，07(12):213-214.
[3] 劉博，閔連秋.小牛血清去蛋白注射液對局灶性腦缺血大鼠腦血管儲備能力的影響[J].中國生物制品學雜志，2011，1:61-63.