細胞遺傳學(xué)分析精選(九篇)

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第1篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

【摘要】 目的：了解急性粒細胞白血病AML-M2亞型的細胞形態(tài)學(xué)及細胞遺傳學(xué)特征。方法：對23例以FAB分類標(biāo)準(zhǔn)確診的AML-M2初發(fā)患者的細胞形態(tài)學(xué)及細胞遺傳學(xué)資料進行回顧性分析；應(yīng)用骨髓細胞短期培養(yǎng)法制備染色體標(biāo)本，以R顯帶技術(shù)進行核型分析。結(jié)果：34%M2a、92%M2b患者白血病細胞內(nèi)可見Auer小體，Auer小體在M2b患者細胞中檢出率明顯高于M2a患者；M2患者白血病細胞POX染色呈強陽性反應(yīng)，在M2a細胞表達多為彌散細顆粒狀，而在M2b呈局灶團塊狀。23例患者中18例有克隆性染色體異常，異常核型檢出率78.3%（18/23）。16例M2a患者無一致性的染色體異常。7例M2b患者均有特異性的t(8;21)異常，其中3例伴有y染色體丟失。結(jié)論：M2白血病組內(nèi)異質(zhì)性較大，M2a和M2b似乎具有各自獨特的細胞形態(tài)學(xué)及細胞遺傳學(xué)特性。

【關(guān)鍵詞】 急性粒細胞白血病； AML-M2； 細胞形態(tài)學(xué)； 細胞遺傳學(xué)

急性粒細胞部分分化型白血病 (acute myelomonocytic leukemia, AML-M2) 是一組異質(zhì)性較大的髓細胞白血病，常伴有特殊的染色體異常。其診斷標(biāo)準(zhǔn)由FAB協(xié)作組于1976年提出，在FAB分型的基礎(chǔ)上，國內(nèi)又將其分為M2a和M2b，后者由我國首先提出，1980年被列入國內(nèi)急性非淋巴細胞白血病分型標(biāo)準(zhǔn)中的一種特殊亞型。2001年WHO分型別提出4種有再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的急性髓細胞白血病，其中t(8;21)(q22,q22)與M2b密切相關(guān)。細胞形態(tài)學(xué)和細胞遺傳學(xué)對AML-M2白血病的診斷、治療和預(yù)后判斷具有重要意義。為了解AML-M2的細胞形態(tài)學(xué)及細胞遺傳學(xué)特點，報告57例研究資料。

1 資料與方法

1.1 研究對象：57例均為2003年至2006年12月在我院血液室按FAB標(biāo)準(zhǔn)確診的M2初診治患者，其中23例進行了染色體核型分析。M2的診斷標(biāo)準(zhǔn)按文獻［1］。

1.2 試劑：瑞氏-姬姆薩（Wright-Gimsa）染液：珠海貝索生物技術(shù)有限公司。α-NAE,PAS和POX試劑盒購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血研所科技公司。

1.3 形態(tài)學(xué)檢查：骨髓及血涂片經(jīng)瑞氏-姬姆薩染色后分類計數(shù)，常規(guī)進行POX、α-NAE（NaF）和PAS組化染色。

1.4 染色體核型分析：取患者初診治療前的骨髓，經(jīng)24～48h培養(yǎng)后，收集細胞常規(guī)制片，應(yīng)用R顯帶技術(shù)進行核型分析。分析中期細胞數(shù)16～42個，根據(jù)細胞遺傳學(xué)國際命名體制（ISCN，1995）［2］對核型進行描述。至少2個細胞有同樣的染色體增加或結(jié)構(gòu)重排，或者3個細胞有同樣的染色體丟失方可確認為一個異常可隆。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理：兩均數(shù)比較應(yīng)用t檢驗，統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用SPSS10.0分析軟件處理。

2 結(jié)果

2.1 臨床特征：57例患者中男32例，女25例，中位年齡40歲（3～73）。其中13例為M2b亞型，余均為M2a亞型。乏力、面色蒼白為常見臨床表現(xiàn)，肝、脾、淋巴結(jié)腫大例數(shù)分別為12、7、11例，16例有胸骨壓痛，21例有皮膚紫癜、瘀斑。

2.2 血液學(xué)特征：本組57例患者白細胞中位數(shù)20.08×109/L，（0.66～450.01）×109/L，血紅蛋白中位數(shù)70g/L，（36～168）g/L，血小板中位數(shù)40×1012/L，（6～658）×1012/L。其中M2a患者44例，白細胞中位數(shù)27.84×109/L，（0.66～450.01）×109/L ，血紅蛋白中位數(shù)75g/L（38～168）g/L，血小板中位數(shù)44×1012/L，（6～658）×1012/L。M2b患者13例，白細胞中位數(shù)10.43×109/L（1.91～77.0）×109/L ，血紅蛋白中位數(shù)60g/L（36～95）g/L，血小板中位數(shù)29×1012/L，（11～241）×1012/L。M2b患者白細胞、血紅蛋白和血小板減少較M2a更為明顯(p<0.05)。49例患者外周血涂片可見原粒。M2患者骨髓增生多為明顯活躍或極度活躍，2例（3.5%）M2a患者為低增生性急性白血病。約34%（15/44）M2a、92% （12/13）M2b患者白血病細胞內(nèi)可見Auer小體。Auer小體在M2b發(fā)生頻率較M2b明顯增高，有顯著性差異(P<0.01)。M2b患者骨髓細胞異常中性中幼粒明顯增多：胞核與胞質(zhì)發(fā)育極不平衡，胞質(zhì)豐富，易見空泡，內(nèi)外漿明顯，內(nèi)漿含多量細小粉紅色中性顆粒，亦常見粗大橙紅色朝陽紅顆粒，染色質(zhì)細致疏松，核仁大而明顯，該特點有助于M2a與M2b的鑒別診斷。M2患者白血病細胞POX染色呈強陽性反應(yīng)，在M2a細胞表達多呈彌散細顆粒狀分布，而在M2b多表達于異常中幼粒細胞胞核凹陷處（高爾基富含區(qū)）呈局灶團塊狀，此點亦有助于鑒別診斷。

2.3 細胞遺傳學(xué)特征：57例M2患者中23例進行了染色體核型分析，第1～16例為M2a亞型白血病，第17～23例為M2b白血病。23例M2患者異常核型檢出率78.3%（18/23），18例染色體異常患者中，單純數(shù)目異常1例，結(jié)構(gòu)異常12例，5例同時伴有數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常。分別占異常核型總數(shù)的5.5%、66.7%和27.8%。9例患者為異常核型與正常核型的嵌合體。t(8;21)易位8例，占M2亞型的34.8%，其中1例為罕見的伴t(8;21)(q22,q22)的復(fù)雜易位，核型為46,xy,t(8;21;8)(q22,q22,q24)。7例M2b患者均有t(8;21)異常，其中3例伴有y染色體丟失。16例M2a患者無特異性的染色體重排，除2、10、13、16和19號染色體未見受累外，其余染色體均被累及。詳細資料見表1。

3 討論

AML-M2白血病的年發(fā)病率較高，約為0.66/10萬，占急性粒細胞白血病的35.5%［3］。M2b多為全血細胞減少，血紅蛋白、血小板減少較M2a更為明顯，與慢性再生障礙性貧血相似。本組47.4% （27/57）M2患者骨髓白血病細胞內(nèi)可見Auer小體，該小體在M2b更為易見，約占92%（12/13）。異常中性中幼粒細胞在M2b明顯增多：胞核與胞質(zhì)發(fā)育極不均衡，內(nèi)外漿明顯，內(nèi)漿含細小粉紅色中性顆粒，胞核凹陷折疊，呈腎形、馬蹄形，染色質(zhì)細致疏松，核仁大而明顯。M2細胞POX呈強陽性，在M2a細胞表達多為彌散細顆粒狀分布，而在M2b呈局灶團塊狀。從免疫表型看，胞核、胞質(zhì)的多種蛋白形成紊亂遠較核漿發(fā)育不平衡復(fù)雜得多，有以下特點：①代表不同發(fā)育階段的蛋白共存（CD34和CD33共存）；②代表不同細胞系列的蛋白共存（CD33和CD19共存，CD19和CD56共存）；③該共存的同細胞系列的蛋白卻不同時表達（M2b細胞表達CD19卻不表達CD10、 CD20、 CD22）。AML1/ETO融合基因有助于探明這些紊亂現(xiàn)象的發(fā)生機制，最近發(fā)現(xiàn)AML1/ETO對在正常髓細胞分化中起重要作用的轉(zhuǎn)錄因子PU.1和粒細胞分化因子C/EBPα發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用［4,5］。

表1 23例M2患者細胞遺傳學(xué)檢測結(jié)果（略）

大約20%～40%的AML-M2患者有t(8;21)，本組資料t(8;21)占M2的34.8%，與文獻相符［6］。在分子水平上該易位導(dǎo)致原位于21號染色體長臂2區(qū)2帶的AML1基因易位到8號染色體長臂2區(qū)2帶上，與該處的ETO基因融合，形成AML1/ETO融合基因轉(zhuǎn)錄本，在M2白血病發(fā)病中起重要作用［7］。本組7例M2b患者均有t(8;21)異常，提示M2b與t(8;21)存在高度特異性，t(8;21)可作為M2b診斷分型的標(biāo)志。M2b患者t(8;21)可以單獨發(fā)生，也可伴有其它染色體異常，-y是M2b最常見的伴隨改變，本組42.9%（3/7）M2b患者伴有性染色體y丟失。第六屆國際白血病染色體會議對103例復(fù)發(fā)的AML進行分析［8］，發(fā)生多次復(fù)發(fā)的病例大多在t(8;21)組，t(8;21)復(fù)發(fā)時常伴隨出現(xiàn)9q-非隨機性異常或復(fù)雜易位。這可能與AML1/ETO在長期緩解的M2b患者骨髓細胞中持久表達而不能剔除有關(guān)［9］。本組中4例有t(8;21)的M2b患者經(jīng)HA（高三尖杉酯堿、阿糖胞苷）方案治療獲完全緩解8～13個月后復(fù)發(fā)，1例染色體核型為t(8;21;8)復(fù)雜變異易位，另1例為t(8;21)易位伴9q-附加異常，支持上述結(jié)論。具有單純t(8;21)者預(yù)后較佳，完全緩解率高，伴有附加復(fù)雜異常預(yù)后相對較差，尤其-y和9q-的t(8;21)者CR率低。

16例M2a患者進行了染色體核型分析,異常核型檢出率68.8%（11/16），無一致性的染色體異常。可見較有特異性的異常染色體，包括del(5)，-7，t(8;21)，del(11)，del(12)(p12)等。11q23(MLL)異常主要見于AML-M5患者，該異常為高度異質(zhì)性，可以是缺失或易位，后者中涉及的伙伴染色體不定，以t(9;11)(p21,q23)為最常見，患者預(yù)后差。有文獻報道，del(12)(p12)異常較少見，患者多為M2型，本組2例患者有12p-，并不少見，可能與樣本量偏少有關(guān)。3例（例5、13、15）患者有MDS前驅(qū)病史，涉及der(3)(3;6), del(5q), -11,del(11), del(12p), der(14)(5;14), del(15),-18異常，有MDS前驅(qū)病史患者的CR率明顯低于無MDS前驅(qū)病史的AML患者。值得一提的是本文發(fā)現(xiàn)1例嗜酸細胞明顯增高的病例，嗜酸細胞占骨髓有核細胞總數(shù)的19.5%，其染色體核型為46,xy,inv(1)(p22q44)。嗜酸細胞增多與該染色體異常是否具有內(nèi)在關(guān)聯(lián)，需要進一步研究闡明。

M2患者組內(nèi)異質(zhì)性較大，特別是M2b和M2a似乎具有各自獨特的臨床表現(xiàn)和和生物學(xué)特性。概而言之有6點區(qū)別：①M2b患者白細胞、血紅蛋白、血小板減少較M2a更為明顯。②M2b患者骨髓異常中性中幼粒細胞較M2a明顯增多。③M2b患者POX染色呈局灶團塊狀分布于異常中幼粒細胞胞核凹陷處，而M2a多為彌散細顆粒狀分布。④Auer小體在M2b更為多見。⑤M2b患者有特征性的t(8;21)異常和AML1/ETO融合基因，而M2a多表現(xiàn)為非特異性的基因重排，無一致性的染色體異常。⑥M2b具有單純t(8;21)異常患者易多次復(fù)發(fā)，但預(yù)后較佳，完全緩解率高，中位生存時間長。有鑒于此，WHO在對惡性血液系統(tǒng)疾病分類時，把AML伴t(8;21)(q22,q22)/AML1-ETO作為獨立亞型應(yīng)用于臨床診斷。

【參考文獻】

［1］ 張之南，主編．血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［M］．第2版．北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1998．171-179．

［2］ Mitelman F, edtor. ISCN 1995: An international system for human cytogenetic nomenclature［M］.Basel: S. Karger,1995．1-114.

［3］ 鄧家棟，楊崇禮，楊天楹，等主編．鄧家棟臨床血液學(xué)［M］．第1版．上海：科學(xué)技術(shù)出版，2001．954-965．

［4］ Vangala RK, Heiss-Neumann MS, Rangatia JS, et al. The myeloid master regulator transcription factor PU.1 is inactivated by AML-ETO in t(8;21) myeloid leukaemia［J］. Blood,2003,101:270.

［5］ Pabst T, Mueller BU, Harakawa N, et al. AML-ETO downregulates the granulocytic differentiation factor C/EBP alpha in t(8;21) myeloid leukaemia［J］. Nat Med, 2001,7:444.

［6］ Nucifora G, Rowley JD. AML1 and the 8;21 and 3;21 translocations in acute and chronic myeloid leukaemia［J］. Blood, 1995,86:1-14.

［7］ Nucifora G, Rowley JD. The AML1 and ETO genes in acute myeloid leukemia with a t(8;21)［J］. Leuk Lymphoma,1994,14:353.

第2篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

關(guān)鍵詞：東北蒲公英（Taraxacum. ohwianum Kitam.）；染色體；核型；花粉母細胞；減數(shù)分裂

中圖分類號：S567.21；Q343.2；Q253 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）16-3895-04

東北蒲公英（Taraxacum. ohwianum Kitam.）是菊科（Asteraceae）蒲公英屬（Taraxacum F. H. Wigg.）植物，也是菊科舌狀花亞科（Subfam. Liguliflorae DC.）最進化的類群之一[1]。蒲公英屬全世界約有300多種。中國高等植物數(shù)據(jù)庫中已記錄的、在中國分布的有79個種（包括7個存疑種），廣泛分布于中國的東北、華北、西北及西南各省（區(qū)），其中東北地區(qū)為蒲公英的主產(chǎn)區(qū)[2，3]。東北蒲公英在東北地區(qū)有廣泛的分布，但在收集種子的過程中，發(fā)現(xiàn)東北蒲公英經(jīng)常產(chǎn)生敗育的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象是產(chǎn)生此次試驗的動因。蒲公英屬植物的染色體從2x到10x不等，以3x居多；其二倍體進行有性生殖[4]，但多倍體中也存在兼性無融合生殖的情況[5]，由此造成種子敗育的原因不能確定。所以試驗以東北蒲公英為材料，采用根尖壓片確定其體細胞染色體數(shù)目，通過分析其核型和花粉母細胞減數(shù)分裂過程中染色體的行為與變異來判斷東北蒲公英的倍性水平，并進一步分析其種子敗育的原因。在此基礎(chǔ)上進一步探討東北蒲公英雜交親本的育性，以指導(dǎo)遺傳育種工作，尤其在確定種間雜交組合、誘變育種等方面具有重要的指導(dǎo)意義，可為東北蒲公英的品種選育、雜交后代和新品種的鑒定、分類、推廣提供重要的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

東北蒲公英于2008年采集于遼寧省丹東市，栽種于沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)百草園中草藥試驗基地內(nèi)，常規(guī)管理。供試材料于2011年5月在田間采集新鮮植株，抖凈泥土后自來水沖洗至沒有附著物，晾干。將全株樣品交由中國科學(xué)院沈陽生態(tài)研究所李冀云研究員鑒定，確認是東北蒲公英無疑。

1.2 核型分析方法

核型分析采用根尖壓片法。取東北蒲公英根長0.5 cm左右的前端部分，于觀察日的9：00～11：00放入八羥基喹啉溶液中4 h，然后把根尖轉(zhuǎn)移到卡諾固定液（冰乙酸∶無水乙醇=1∶3）中固定12 h以上，取出后保存在70%乙醇中（可長期保存）。用1 mol/L HCl在60 ℃的水浴中解離根尖樣品15 min，去離子水沖洗3次后， 卡寶品紅染色24 h以上，取根尖1～2 mm部分（分生組織）壓片觀察，中性樹膠封片。在Olympus光學(xué)顯微鏡下選取若干個染色體分散良好、著絲點清晰的根尖細胞進行核型分析[6]與核型分類[7]，并照相。

1.3 花粉母細胞減數(shù)分裂的觀察方法

花粉母細胞減數(shù)分裂的觀察采用花藥壓片法。于2011年4月底到5月初這段時間隔天在取樣日的9：30～11：30取東北蒲公英未開的花蕾（直徑0.2～2.0 cm）， 迅速帶回實驗室將花蕾在卡諾固定液中固定24 h，再轉(zhuǎn)入70%的乙醇中，置4 ℃冰箱內(nèi)保存。制片前取出花蕾樣品，用去離子水清洗3次， 晾干后將花蕾用消毒后的鑷子撕開，最好別損壞里面的小花結(jié)構(gòu)。在操作臺上用鑷子于花序中鑷取3～5朵小舌狀花放于載玻片上，用消毒針將上半部分花冠去掉，只留下半部分的聚藥雄蕊，然后置于酶液（4%纖維素酶與1%果膠酶混合液，用檸檬酸緩沖液溶解）中，在37 ℃水浴鍋中酶解120～150 min，再用去離子水清洗3次后將花藥從中部切開，用鑷子輕輕擠壓，采用卡寶品紅染色法制片，火焰微烤分色，用Olympus光學(xué)顯微鏡鏡檢，統(tǒng)計并照相。

2 結(jié)果與分析

2.1 核型分析

東北蒲公英的染色體為二倍體，試驗中觀察到的根尖細胞染色體數(shù)均為16。用Motic Camera專業(yè)圖像分析軟件對5個根尖細胞典型的中期染色體進行長度測量并計算出核型參數(shù)，結(jié)果見表1。從表1可見，東北蒲公英染色體的核型公式K（2n）=2x=16=10 m+6 sm；染色體組總長為80.4，臂比值大于2的染色體占染色體總數(shù)的12.5%，最長染色體（6.6）與最短染色體（4.1）的比值為1.61（

2.2 花粉母細胞減數(shù)分裂觀察結(jié)果

2.2.1 孢原細胞 東北蒲公英花粉母細胞減數(shù)分裂觀察結(jié)果見圖4。從圖4可見，孢原細胞分裂旺盛，體積較大，核大于周圍的其他細胞，細胞質(zhì)也較濃。圖4-1、圖4-2、圖4-3、圖4-4為不同染色體數(shù)目的孢原細胞，這些孢原細胞大小不一，染色體數(shù)目差異非常大，數(shù)量從幾百條到幾十條不等，這與根尖染色體數(shù)目明顯不同。圖4-5、圖4-6、圖4-7為不同細胞核數(shù)目的孢原細胞，數(shù)量從2～5不等。在觀察過程中還發(fā)現(xiàn)了大量的不完整孢原細胞出現(xiàn)的現(xiàn)象，如圖4-3那樣，有一部分染色體分離了出去，就像原始細胞的裂解方式一樣。圖4-8是裂解后形成的造孢細胞，而后進行減數(shù)分裂。

2.2.2 第一次減數(shù)分裂 在減數(shù)分裂前期Ⅰ的細線期，花粉母細胞的核仁里出現(xiàn)解體，著色能力越來越弱。此時的染色質(zhì)螺旋化形成長細絲狀的染色體，呈“花束”狀形態(tài)（圖4-9）。至粗線期時，染色體逐漸縮短變粗，直到終變期（圖4-10），同源染色體還沒有配對，仍然是16條染色體。這與大多數(shù)植物在粗線期完成同源染色體的配對明顯不同，說明東北蒲公英的同源染色體配對要明顯滯后于其他植物；此時染色體還保持單價體的狀態(tài)。在后期Ⅰ（圖4-11）染色體分離，其后可以觀察到2個子細胞之間沒有明顯的細胞板分隔（圖4-12），因此東北蒲公英花粉母細胞的減數(shù)分裂為非連續(xù)性胞質(zhì)分裂類型。

2.2.3 第二次減數(shù)分裂 到前期Ⅱ（圖4-13）細胞核開始解體，形成染色體，從中可以看出2個細胞核的解體速度并不一致。后期Ⅱ（4-14）觀察到姐妹染色單體的分離，隨后染色單體開始解螺旋，又重新形成染色體（圖4-15）。染色體進一步分離到子細胞的兩極（圖4-16、圖4-17），當(dāng)新的核膜、核仁開始形成時即進入末期Ⅱ。在末期Ⅱ（圖4-18）形成四分體，隨著核與核之間細胞壁的形成，出現(xiàn)十字型四分體（圖4-19）。不斷發(fā)育的小孢子因胼胝質(zhì)壁逐漸解體消失，而被釋放到花藥腔中（圖4-20）。

3 討論

翟大彤等[8]研究表明，蒲公英屬植物的染色體數(shù)為2n=18、22、24、26、32、34、36、37；而其對東北蒲公英的核型分析結(jié)果與王守軍等[9]、王艷等[10]對蒲公英的核型分析支持x=8的結(jié)論一致。蒲公英屬植物通常具有無融合現(xiàn)象，一般高倍性的物種可進行無融合生殖、低倍性的物種進行有性生殖[11]。東北蒲公英的染色體為二倍體（2n=16），那么它應(yīng)該進行有性生殖、異交并具有孢子體自交不親和系統(tǒng)存在[4，12]。這在雜交育種上確定雜交組合時，就應(yīng)以東北蒲公英為母本、其他蒲公英做父本來完成雜交試驗。

花粉母細胞由孢原細胞發(fā)育而來；但在此次試驗中，發(fā)現(xiàn)有些孢原細胞存在大量染色體的現(xiàn)象，其數(shù)量遠遠超過根尖細胞染色體計數(shù)的16條，出現(xiàn)孢原細胞的染色體數(shù)目多于正常的16條染色體可能是由于細胞的裂解所造成的，孢原細胞染色體在裂解后形成細胞核，繼而分裂開來。孢原細胞究竟是形成細胞核后裂解、還是形成染色體后再裂解、或者兩種方式兼而有之還需要進一步通過試驗來證明。由于在試驗中經(jīng)常觀察到染色體缺失的情況，所以我們更傾向于形成染色體后再裂解。但這些含有大量染色體的孢原細胞是怎么形成的、又是如何精確調(diào)控染色體分離的、這種現(xiàn)象在蒲公英屬植物中是否普遍存在等問題，需要進一步詳細試驗來解釋。

Atlagic等[13]認為，小孢子母細胞減數(shù)分裂過程與花粉育性具有相關(guān)性；Luan等[14]發(fā)現(xiàn)染色體配對正常時，會得到比較高的花粉育性及結(jié)實率。試驗過程中東北蒲公英的花粉母細胞減數(shù)分裂可形成單價體，但未觀察到雙價體或者三價體，這與Peter等[15]對二倍體的蒲公英（Taraxacum officinale L.）減數(shù)分裂觀察到的在前期Ⅰ形成8條二價體的結(jié)果并不一致。形成16條單價體的原因可能為同源染色體沒有發(fā)生聯(lián)會，二價體提早分離；或許是不規(guī)則聯(lián)會，即幾條染色體（并非兩同源染色體）不規(guī)則地聯(lián)在一起等造成的。在試驗中發(fā)現(xiàn)，形成的單價體能正常分離，因此認為東北蒲公英形成單價體的主要原因是同源染色體沒有發(fā)生聯(lián)會造成的。正因為如此，所以在后期可能出現(xiàn)不正常的分離，從而影響東北蒲公英花粉的育性。Khazanehdari等[16]也發(fā)現(xiàn)減數(shù)分裂中期單價體會引起后期的不均等分離，從而降低花粉育性。根據(jù)我們對離體花粉萌發(fā)的研究，東北蒲公英的花粉活性在60%左右，這也佐證了東北蒲公英的花粉發(fā)育存在一些異常的情況。

參考文獻：

[1] 龔祝南，張衛(wèi)明，劉常宏，等.中國蒲公英屬植物資源[J].中國野生植物資源，2001，20（3）：9-14，5.

[2] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1999.

[3] 李冀云.東北草本植物志[M].北京：科學(xué)出版社，2004.

[4] RICHARDS A J. The origin of Taraxacum agamospecies [J]. Botanical Journal of Linnean Society，1973，66：189-211.

[5] JENNISKENS J P J， WETZELS P C J， STERK A A. Aspects of the flowering ecology of taxa of Taraxacum sect[J]. Bot Jahrb Syst Planzengesch Planzengeogr，1984，104：369-400.

[6] 李懋學(xué)，陳瑞陽.關(guān)于植物核型分析的標(biāo)準(zhǔn)化問題[J].武漢植物學(xué)研究，1985，3（4）：297-302.

[7] STEBBINS G L. Chromosomal evolution in higher plants[M]. London：Edward Arnod Lid，1971.

[8] 翟大彤，安爭夕，譚敦炎.新疆蒲公英屬有性生殖與無融合生殖植物的調(diào)查研究[J].西北植物學(xué)報，1997，17（1）：1-7.

[9] 王守軍，楊曉杰，葛繼榮，等.3種蒲公英的核型與進化[J].高師理科學(xué)刊，2007，27（6）：49-52.

[10] 王 艷，閏麗梅，關(guān)雅靜，等.戟片蒲公英的核型研究[J]. 齊齊哈爾大學(xué)學(xué)報，1998，14（4）：58-60.

[11] DIJK P J V， BAARLEN P V， JONG J H D. The occurrence of phenotypically complementary apomixis recombinants in crosses between sexual and apomictic dandelions（Taraxacum officinale）[J]. Sexual Plant Reproduction，2003，16：71-76.

[12] RICHARDS A J. Plant breeding systems[M]. New York：Chapman and Hall，USA，1986.

[13] ATLAGIC J， DOZET B， KORIC S. Meiosis and pollen viability in Helianthus tuberosus L. and its hybrids with cultivated sunflower [J]. Plant Breeding，1993，111：318-324.

[14] LUAN L， TU S B， LONG W B， et al. Cytogenetic studies on two F1 hybrids of autotetraploid rice varieties showing extremely high level of heterosis [J]. Plant Systematics and Evolution，2007，267：205-213.

第3篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

【關(guān)鍵詞】 兩性畸形；遺傳學(xué)；研究性

發(fā)育異常臨床不為罕見，多因生殖器男女分辨不清、第二性征與性腺性別不符就診。此類患者自身病痛不大，但心理與社會壓力較大，部分患者易產(chǎn)生惡變危及生命。盡早明確診斷及治療對患者極為重要。我們對1994—2004年來我室進行遺傳咨詢的16例兩性畸形患者進行了染色體核型分析，現(xiàn)將患者體征及異常核型報告如下。

1 臨床表現(xiàn)

16例患者年齡在11個月~21歲，父母均為非近親結(jié)婚，主要病理體征如下：

1.1 社會性別男性9例

（1）1例先天性尿道下裂，短小，陰囊小，一側(cè)小，一側(cè)無，尿道外口開口于根部，外周血細胞遺傳學(xué)染色體檢查：46，XX。外周血分子遺傳學(xué)PCR檢測結(jié)果：SRY陽性。此為女性假兩性畸形。

（2）2例先天性尿道下裂，有和陰囊，還有大，陰囊內(nèi)無，尿道開口于大內(nèi)，B超檢查：盆腔內(nèi)有卵巢。外周血細胞遺傳學(xué)染色體檢查：46，XX。此為女性假兩性畸形。

（3）1例外陰為并有尿道下裂，有大，尿道開口于大內(nèi)，陰囊外觀與實際年齡相符，內(nèi)有，病理檢查結(jié)果：一側(cè)陰囊內(nèi)為，一側(cè)陰囊內(nèi)為男女混合性腺結(jié)構(gòu)，以女性卵巢組織為主，外周血細胞遺傳學(xué)染色體檢查：46，XX。此為真兩性畸形（即陰陽人）。

（4）2例短小，尿道下裂，陰囊小有分隔，位于兩側(cè)腹股溝。外周血細胞遺傳學(xué)染色體檢查：1例45，XO/46，XY;1例45，XO

（5）3例短小，尿道外口開口于根部，一側(cè)或兩側(cè)發(fā)育不全，陰囊深度分裂如大。外周血細胞遺傳學(xué)染色體檢查：46，XY。此為特發(fā)性男性假兩性畸形。

1.2 社會性別女性7例

（1）5例原發(fā)閉經(jīng)，患者身材高大，乳房發(fā)育差。B超檢查，陰道為盲端，無子宮和卵巢，兩側(cè)腹股溝內(nèi)各有一隱睪。外周血細胞遺傳學(xué)染色體檢查：46，XY，此為男性假兩性畸形。診斷為完全性雄激素不敏感綜合征。

（2）1例女性外陰，肥大似，長3cm，無陰道，剖腹探查見：腹腔組織，精細胞發(fā)育不全。外周血細胞遺傳學(xué)染色體檢查：46，XY。此為男性假兩性畸形。診斷為不完全性雄激素不敏感綜合征。

（3）1例原發(fā)閉經(jīng)，乳房未發(fā)育，幼女型外陰，大發(fā)育差，部分融合，無陰道，B超檢查：無子宮，性腺為索狀結(jié)構(gòu)。外周血細胞遺傳學(xué)染色體檢查：46，XY，此為男性假兩性畸形，診斷為無性腺癥。

2 討論

導(dǎo)致兩性畸形的因素是多方面的，其中遺傳因素是重要因素之一。人的性別分化是經(jīng)一系列復(fù)雜過程才完成的，但性別分化的關(guān)鍵在于有無正常的Y染色體，原始生殖嵴在決定因子（TDF）的作用下發(fā)育為，合成的雄性激素誘導(dǎo)原始生殖器官分化為雄性內(nèi)、外生殖器官，并在出生后促進性腺和第二性征的發(fā)育，若個體細胞中無Y染色體，生殖腺將向卵巢發(fā)育，因原始生殖腺有向卵巢發(fā)展的本能趨勢[1]。

本文檢出3例女性假兩性畸形，核型都為46，XX，其中1例性腺為，但無Y染色體，這可能是SRY基因易位到其他染色體上，使得受累女孩男性化。另2例46，XX的個體性腺為卵巢，而外生殖器異常，導(dǎo)致此種女性假兩性畸形的原因可能是（1）先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥，因21-羥化酶缺乏，使氫化酮不足，從而使垂體的促腎上腺皮質(zhì)激素分泌增加，腎上腺皮質(zhì)增生，雄激素水平升高，使受累女孩男性化[2]。（2）體內(nèi)雄激素增高或母親懷孕期間過量使用雄激素（為了生男孩，此患者母親在孕期服用過雄性激素），可引起女性個體外生殖器或第二性征男性化。由此看來，除了遺傳因素會引起個體性發(fā)育異常外，內(nèi)、外環(huán)境因素也可導(dǎo)致性發(fā)育異常。

本文檢出1例真兩性畸形，核型為46，XX，但此人有卵巢、兩種性腺，有人報道46，XX真兩性畸形是Xp-Yp不等交換的結(jié)果，也有人報道此種患者可能是隱匿性的46，XX/46，XY嵌合體或其他類型嵌合體。本文的1例46，XY/45，XO男性個體，性分化異常的原因可能是受精卵在分裂過程中發(fā)生了Y染色體的丟失，最后形成了嵌合體，由于有Y染色體，故有發(fā)育。本文的45，XO男性形成的原因可能是Y染色體雄性性別決定區(qū)域片段易位到常染色體或X染色體上[3]。

本文的3例特發(fā)性男性假兩性畸形，核型正常，但外生殖器異常，其發(fā)生的原因可能是由于在雄性激素合成過程中，缺少由孕烯醇酮向雄激素轉(zhuǎn)化所必需的酶（如17羥化酶），使雄激素合成減少而致。或靶細胞對雄激素的反應(yīng)不敏感或部分不敏感所致。其真正原因還有待于進一步進行分子生物學(xué)分析。

本文檢出7例男性假兩性畸形，本病的主要異常是雄激素的靶器官對雄激素和雙氫酮不敏感，因位于X染色體上決定雄激素受體的基因發(fā)生了突變[4]，使雄激素的胞漿受體合成缺陷，因此細胞質(zhì)中無雄激素—受體復(fù)合物傳入細胞核，故對酮或雙氫酮均無生物效應(yīng)，按雄激素受體缺陷的程度分為完全性和不完全性。另1例為無性腺征，有研究發(fā)現(xiàn)，在胚胎發(fā)育的6~8周，尚未分泌苗勒氏管抑制因子（MIF），不發(fā)育，表現(xiàn)為無性腺癥。

性腺發(fā)育異常，發(fā)生腫瘤的機率較高，故應(yīng)及早作預(yù)防性性腺切除。隨著細胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)技術(shù)的發(fā)展，兩性畸形的病因不一定只是常染色體及X染色體上的基因位點。尋找其它與性別決定有關(guān)基因以及這些基因在人類性別分化過程中的作用是很有必要的。

參考文獻

1 宗鐵生.人體胚胎學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，1987.51

2 徐維衡.醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基礎(chǔ)[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)出版社，1993.43

第4篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

關(guān)鍵詞：伊馬替尼；慢性粒細胞白血病；慢性期；效果分析

慢性粒細胞白血病（CML）以BCR/ABL融合基因為基礎(chǔ)，屬于造血干細胞惡性克隆性疾病。甲磺酸伊馬替尼（商品名格列衛(wèi)）是酪氨酸激酶抑制劑，能夠選擇性的抑制CML BCR/ABL融合基因陽性克隆性白血病[1]。當(dāng)今，甲磺酸伊馬替尼已是國際公認的治療CML慢性期的一線藥物，其開辟了分子靶向藥物治療CML的新天地。但因原研甲磺酸伊馬替尼價格昂貴，就全國而言，估計不到20%患者使用原研伊馬替尼，在西北偏遠地區(qū)使用率更低，高價格和低醫(yī)保覆蓋成為限制其使用的關(guān)鍵問題[2]，故伊馬替尼仿制品應(yīng)運而生。國產(chǎn)伊馬替尼是否與原研甲磺酸伊馬替擁有同樣良好的療效及安全性，根據(jù)我院患者使用情況進行了對比，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院自2011年1月～2015年01月收治的40例慢性髓性白血病慢性期患者，按照自愿原則，16例接受國產(chǎn)伊馬替尼治療，24例接受進口伊馬替尼治療，診斷和分期標(biāo)準(zhǔn)符合文獻[3]，結(jié)合患者臨床癥狀，并均經(jīng)過骨髓細胞形態(tài)學(xué)、染色體核型分析、融合基因檢查確診，Ph染色體和BCR/ABL融合基因的檢測結(jié)果均為陽性。國產(chǎn)伊馬替尼組16例患者中男10例、女6例，平均年齡為（36.5±6.8）歲，平均病程為（2.6±0.4）年，進口伊馬替尼組24例患者中男14例、女10例，平均年齡為（36.9±6.9）歲，平均病程為（2.7±0.3）年，兩組患者在性別、年齡、病程等方面的差異均不顯著（P>0.05），不具有統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2方法 國產(chǎn)伊馬替尼組及進口伊馬替尼組初始劑量均為400mg/d，1次/d，當(dāng)患者的白細胞計數(shù)介于1.0～1.5×109/L時，可將用藥劑量減少至200～300mg/d；當(dāng)患者的白細胞計數(shù)

1.3臨床療效判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1血液學(xué)療效判定標(biāo)準(zhǔn) ①完全緩解（CR）：患者的陽性癥狀及體征完全消失，白細胞計數(shù)

1.3.2細胞遺傳學(xué)療效判定標(biāo)準(zhǔn) ①完全細胞遺傳學(xué)緩解（CCyR）：骨髓中未出現(xiàn)Ph染色體。②主要細胞遺傳學(xué)緩解（MCyR）：Ph染色體的比例為1%～34%。③完全分子學(xué)效應(yīng)（CMoR）：BCR/ABL融合基因檢查呈陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，兩組間計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P

2 結(jié)果

2.1兩組患者血液學(xué)療效的比較 國產(chǎn)伊馬替尼方案治療CML的血液學(xué)總有效率達到了93.8%，CR、PR、NR率分別為87.5%、6.3%和6.3%，原研伊馬替尼的血液學(xué)總有效率為95.9%，CR、PR、NR率分別為91.7%、4.2%和4.2%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），兩者均有較高的血液學(xué)緩解率，見表1。

2.2兩組患者血液細胞遺傳學(xué)療效的比較 國產(chǎn)伊馬替尼方案治療CML的CCyR率、MCyR率和CMoR率分別為68.7%、25.0%和81.3%，原研伊馬替尼的CCyR率、MCyR率和CMoR率分別為70.8%、20.8%和83.3%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），兩組均有較高的細胞遺傳學(xué)緩解率及分子生物學(xué)效應(yīng)，見表2。

2.3兩組患者血液學(xué)不良反應(yīng)的比較 兩組在血液學(xué)不良反應(yīng)主要表現(xiàn)為白細胞及血小板的輕度減少，且發(fā)生多系減少情況較少，相對血液學(xué)不良反應(yīng)較輕，發(fā)生嚴重骨髓抑制情況少見，且兩組在血液學(xué)不良反應(yīng)的比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），不良反應(yīng)類似，見表3。

2.4兩組患者非血液學(xué)不良反應(yīng)的比較 兩組在非血液學(xué)不良反應(yīng)主要表現(xiàn)為水腫、惡心、嘔吐、疲勞、脫發(fā)、膽紅素升高，少數(shù)患者可有ALT升高，但反應(yīng)均較輕微，大多數(shù)患者可耐受，甚至國產(chǎn)伊馬替尼的不良反應(yīng)發(fā)生率較原研伊馬替尼更低，見表4。

3 討論

CML是血液系統(tǒng)的常見骨髓增殖性腫瘤，該病傳統(tǒng)的治療方法包括異體造血干細胞移植、干擾素單獨或聯(lián)合化療。酪氨酸激酶抑制劑（TKI）的出現(xiàn)徹底改變了慢性粒細胞白血病的治療理念，使慢性粒細胞白血病藥物治療的目標(biāo)從追求癥狀的緩解轉(zhuǎn)變?yōu)樽非蠓肿铀降木徑猓蔀橹委熉粤＜毎籽〉囊痪€藥物。IRIS試驗5年和6年[4]，結(jié)果均表明甲磺酸伊馬替尼是治療CML慢性期的良好藥物，相比之前的任何治療藥物，具有優(yōu)越的治療效果，且耐受性好。研究表明，分子靶向藥物治療CML比造血干細胞移植具有更好的效果[5]。

但結(jié)合我國國情，原研伊馬替尼尚未納入醫(yī)保范疇，且該藥物價格昂貴，中國CML患者對伊馬替尼的價格敏感，僅37.45%中國CML患者使用原研伊馬替尼治療，羥基脲仍然是中國CML最常用的治療方案，不利于CML疾病的控制及發(fā)展。伊馬替尼仿制品上市有助于降低治療成本，高質(zhì)量伊馬替尼仿制品提供了成本-效益解決方案，將為更多的患者提供治療。伊馬替尼仿制品是否具有和原研伊馬替尼擁有同樣的療效及安全性成為廣大患者關(guān)注的焦點。本研究中可以看出，國產(chǎn)伊馬替尼方案治療CML的血液學(xué)總有效率達到了93.8%，CCyR率、MCyR率和CMoR率分別為68.7%、25.0%和81.3%，原研伊馬替尼的血液學(xué)總有效率為95.9%，CCyR率、MCyR率和CMoR率分別為70.8%、20.8%和83.3%，這也與國內(nèi)文獻報道相近[6]，差異不顯著（P>0.05），不具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明國產(chǎn)伊馬替尼與原研伊馬替尼相比，兩者在血液學(xué)及細胞遺傳學(xué)方面療效相近，均取得了良好的療效。另外本研究可以看出，國產(chǎn)伊馬替尼與原研伊馬替尼擁有相似的不良反應(yīng)，甚至國產(chǎn)伊馬替尼的不良反應(yīng)發(fā)生率較原研伊馬替尼更為低，主要不良反應(yīng)為可逆的輕度骨髓抑制，水腫、惡心、嘔吐、疲勞、膽紅素升高，少數(shù)患者可有ALT升高。但總的來說，不良反應(yīng)輕微，大多數(shù)患者可耐受或予對癥處理后可自行消失，兩者均具有較高的安全性。

但由于國產(chǎn)伊馬替尼進入新疆市場較晚，我院使用時間僅有一年左右，本研究樣本量相對較少，今后還需要進一步積累觀察樣本量，充分論證國產(chǎn)伊馬替尼的有效性和安全性。

4 小結(jié)

綜上所述，國產(chǎn)伊馬替尼與原研伊馬替尼擁有相似的療效及安全性，對于經(jīng)濟相對落后、無法負擔(dān)高額原研伊馬替尼藥物費用地區(qū)的CML患者尤為適用，可以根據(jù)患者的實際情況選擇不同的用藥方案。今后仍需積累樣本量觀察國產(chǎn)伊馬替尼的有效性和安全性。

參考文獻：

[1]Druker B J，Talpaz M，Resta DJ，et al.Efficacy and safty of aspecific inhibitor of the BCR～ABL tyrosine kinasein chronic myeloidleukemia[J].N Engl Jmed，2001，344（14）：1031-1037.

[2]王建祥.中國15家醫(yī)院慢性粒細胞白血病發(fā)病狀況及目前診斷治療模式調(diào)查分析[J].中華血液學(xué)雜志，2009，30（1）：721-725.

[3]中華醫(yī)學(xué)會血液學(xué)分會.中國慢性髓系白血病診斷與治療指南（2011年版）[J].中華血液學(xué)雜志，2011，32（6）：426-432.

[4]Hochhaus A，Druker BJ，Larson RA，et al.IRIS 6 years follow up：Sustained survival declining annual rate of trans formation in patients with newly diagnosed chronic phase chronic myeloid leukemia treated with imatinib[J].Blood，2007，110：25.

第5篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

骨髓細胞形態(tài)學(xué)檢查是一門具有百年悠久歷史的血液病診斷技術(shù)，一百多年來一直都是使用瑞氏及其先驅(qū)者發(fā)明的涂片染色法，它是血液病理學(xué)重要的診斷工具。因為其制片的過程容易簡單，能快速的對樣品做出初步檢查，即使在血液病檢測手段與日俱進的今天，傳統(tǒng)的骨髓細胞形態(tài)學(xué)檢查仍然具有獨一無二的魅力，它為現(xiàn)代血液病理診斷的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。本文通過骨髓細胞形態(tài)學(xué)檢查對其本身的不斷完善進步，并結(jié)合其他現(xiàn)代血液病診斷技術(shù)，在MICM方法上對各種白血病的發(fā)病機理的研究現(xiàn)狀作一綜述。

一、血細胞的生成，發(fā)育規(guī)律及正常形態(tài)學(xué)特征

(一) 血細胞的生成

目前認為，所有血細胞均起源于共同的造血干細胞。造血干細胞是造血組織中一類目前尚無形態(tài)學(xué)特征描述的功能細胞。其功能特點為：①具有高度自我更新的能力；②具有多向分化的能力。

血細胞的生成過程可劃分為三個連續(xù)的階段，即造血干細胞，造血祖細胞和形態(tài)學(xué)上可辨認的各系原始幼稚細胞階段，然后進一步成熟為具有特定功能的各系血細胞。

(二) 血細胞發(fā)育過程中形態(tài)學(xué)演變的一般規(guī)律

1、細胞大小及外形

(1)大小：從原始細胞到成熟細胞，胞體由大逐漸變小。但巨核細胞則與此相反。

(2)外形：紅細胞系始終呈圓形，粒細胞和淋巴細胞系保持圓形或橢圓形不變；單核細胞系和巨核細胞系則均由圓形或橢圓形變?yōu)椴灰?guī)則形。

2、核質(zhì)比例(N/C)胞核逐漸縮小(巨核細胞例外)，胞質(zhì)量逐漸增多，由核大質(zhì)少變?yōu)楹诵≠|(zhì)多。

3、細胞核

(1) 大小：由大變小，巨核細胞的胞核則由小明顯變大。

(2) 核形：幼紅細胞胞核始終呈圓形，核逐漸縮小，核染質(zhì)固縮，最后脫核而消失，成熟紅細胞無細胞核；粒細胞系原始及早幼粒細胞階段呈圓形或橢圓形，隨著細胞成熟，胞核的一側(cè)逐漸凹陷，最后形成分葉狀。

(3)核位置：居中，常偏位，側(cè)這邊。

(4)核染色質(zhì)：結(jié)構(gòu)由細致疏松逐漸凝集變?yōu)榫o密粗糙，著色則由淺變深。

(5)核膜：由不明顯到明顯。

(6)核仁：由清晰可見到消失。

4、細胞質(zhì)

(1)胞質(zhì)量：一般由少逐漸增多，淋巴細胞例外。

(2)著色。

(3)顆粒：多從無到有，從非特異性顆粒到特異性顆粒。

(4)空泡：正常情況下，漿細胞胞質(zhì)中可見小空泡，其他細胞系列中一般無空泡，出現(xiàn)空泡多由于細胞退行性變。

二、常見血液病的形態(tài)學(xué)特征[1]

(一) 貧血

1.缺鐵性貧血 是因體內(nèi)貯存鐵缺乏而使血紅蛋白合成不足所致。

【血象】

(1)紅細胞，血紅蛋白均減少，以血紅蛋白減少更為明顯。

(2)輕度貧血時成熟紅細胞的形態(tài)無明顯異常。中度以上貧血才顯示小細胞低色素性特征，紅細胞體積減小，淡染，中央蒼白區(qū)擴大。

(3)網(wǎng)織紅細胞輕度增多或正常。

(4)白細胞計數(shù)和分類計數(shù)，以及血小板計數(shù)一般正常。

【骨髓象】

(1)骨髓增生明顯活躍。

(2)紅細胞系統(tǒng)增生活躍。

(3)貧血早期程度較輕時，幼紅細胞形態(tài)無明顯異常。中度以上貧血時，幼紅細胞內(nèi)血紅蛋白合成不足，細胞體積減小，胞質(zhì)量少。

(4)粒細胞系相對減少。

(5)巨核細胞正常。

2、再生障礙性貧血(AA)簡稱再障，是由于多種原因所致骨髓造血干細胞減少和(或)功能差異常及造血微環(huán)境損傷，導(dǎo)致紅細胞，粒細胞和血小板生成減少的一組綜合征。

(1)急性期：急性型再生障礙性貧血(AAA)又稱重型再障I型(SAA-I)，起病急，發(fā)展迅速，常以嚴重出血和感染為主要表現(xiàn)。

【血象】呈全血細胞減少。①紅細胞，血紅蛋白顯著減少，兩者平行性下降，呈正常細胞正常色素性貧血；②網(wǎng)織紅細胞明顯減少，絕對值

【骨髓象】急性型再障的骨髓損害廣泛。①骨髓增生明顯減低；②粒、紅兩系細胞極度減少，淋巴細胞相對增高；③巨核細胞顯著減少；④漿細胞分類比值增高。

(2)慢性型：CAA起病和進展緩慢，以貧血和輕度皮膚，粘膜出血癥狀多見，嚴重出血和感染少見。

【血象】①紅細胞，血紅蛋白平行性下降，血紅蛋白多為中度或重度減低，呈正常細胞正常色素性貧血。②網(wǎng)織紅細胞減少，絕對值低于正常，常小于15×109/L；③白細胞減少，多在(2、0~3、0) ×109/L；④血小板減少，多在(30~50) ×109/L。【骨髓象】慢性型再障的骨髓中可出現(xiàn)一些局灶性代償性造血灶，故不同部位骨髓穿刺的結(jié)果可有一定的差異。①骨髓增生程度多為增生減低；②巨核細胞、粒細胞、紅細胞三系細胞均不同程度減少。巨核細胞減少常早期就出現(xiàn)，治療有效時恢復(fù)也最慢，故在診斷上的意義較大。③淋巴細胞相對增多。

如穿刺部位為代償性造血灶，則骨髓象呈增生活躍，粒系百分率可呈正常或減低，紅系細胞百分率增高，但巨核細胞仍顯示減少或明顯減少。

(二) 白血病

1、急性白血病

【血象】

(1)紅細胞及血紅蛋白中度或重度減少，呈正常細胞正常色素性貧血。

(2)白細胞計數(shù)不定：白細胞數(shù)增多者，多在(10~50) ×109/L之間，也有白血病計數(shù)在正常范圍或減少。白細胞分類計數(shù)可見一定數(shù)量的白血病性原始或幼稚細胞，所占百分率不定。

(3)血小板計數(shù)常減少。

【骨髓象】

(1)骨髓增生在極盛期明顯活躍或極度活躍，但在疾病過程中會出現(xiàn)島狀增生，非均一性增生，局部增生(混雜性浸潤)及間質(zhì)變，再障樣變等多種變化需要通過骨髓活檢來鑒定。

(2)一系或二系原始細胞明顯增多。≥30%ANC(all nucleated cell,所有有核細胞)。

(3)因白血病細胞類型的不同，其他系列血細胞均受抑制而減少。

(4)涂片中分裂型細胞核退化細胞增多。在急診白血病中，“藍細胞”較其他類型白血病中多見；在急粒和急單白血病中，可見到Auer小體。

2、慢性白血病

慢性粒細胞白血病：CML為起源于造血干細胞的克隆性增殖性疾病，以粒系細胞增生為主。多見于青壯年，起病緩慢。突出的臨床變現(xiàn)為脾明顯腫大和粒細胞顯著增高。細胞遺傳學(xué)的特征為具有特異性的Ph染色體。

【血象】①紅細胞及血紅蛋白早期正常或輕度減少，隨病情發(fā)展貧血逐漸加重，急變期呈重度貧血。一般為正常細胞正常色素性貧血；②白細胞顯著增高為突出表現(xiàn)。疾病早期可在(20~50) ×109/L,多數(shù)在(100~300) ×109/L。分類計數(shù)粒細胞比例增高，可見各階段粒細胞，尤以中性晚幼粒細胞為多見，原粒細胞和早幼粒細胞

【骨髓象】①骨髓增生極度活躍；②粒細胞系顯著增生，原粒和早幼粒細胞

3、急性骨髓纖維化

急性骨髓纖維化臨床進展迅速，臟器浸潤輕，外周血常呈全血細胞減少，無淚滴狀紅細胞，但伴少量原始細胞；骨髓穿刺常呈干抽，骨髓象增生低下，可伴少量原始細胞。

【骨髓活檢】骨髓增生極度活躍，紅系前體細胞、粒系、巨核三系增生活躍；幼稚細胞簇狀及散在分布，幼稚紅細胞簇突出，巨核細胞較多，不同大小的均可見，核分葉少；大多數(shù)網(wǎng)狀纖維增生顯著，膠原纖維增生不明顯。

4、多毛細胞白血病

外周血及骨髓涂片染色見直徑10-15μm、胞漿 淡染有多毛狀突起的毛細胞。相差顯微鏡下多毛突起最明顯。外周血單核細胞減少(HCL 亞型時不減少)。骨穿常見干抽。骨髓活檢是金標(biāo)準(zhǔn)。

【骨髓活檢】毛細胞胞漿豐富、透明(HCL 亞型時嗜堿性)，核圓、橢圓，居中呈“煎蛋樣，多無核仁，有的核呈粗塊狀似成熟漿細胞胞核，有胞核似豆形核。根據(jù)毛細胞浸潤骨髓程度不同，可呈間質(zhì)性、大片狀或彌漫均勻分布，胞漿豐富，胞核彼此間距寬而類似“鋪藥片”樣或“蜂窩”狀是其特征，在骨髓“血湖樣”改變不常見。粒、紅、巨核三系細胞隨毛細胞浸潤加重而減少，網(wǎng)狀纖維可增多。

5、冒煙型白血病

冒煙型白血病涂片檢測可為陰性，僅表現(xiàn)為骨髓活檢陽性。骨髓活檢：見體積大，有異型的成片的幼稚細胞。由于成片存在，極易誤診為轉(zhuǎn)移性腫瘤。這種早期白血病的診斷需要非常謹慎，必須結(jié)合相關(guān)特異性免疫標(biāo)記，才可做出診斷。否則其診斷僅可作為參考，不能認為是最后診斷，更不能作為治療依據(jù)。

三、骨髓檢查的新進展：

1、骨髓活檢是用一種環(huán)鉆(trephine)切取骨髓作活組織檢查，可觀察骨髓完整的組織結(jié)構(gòu)，真實反映骨髓局部的增生情況，發(fā)現(xiàn)局灶性壞死等。而抽吸取樣破壞了骨髓原來的結(jié)構(gòu)并被血液稀釋，故骨髓活檢被認為是觀察骨髓各細胞系列比例和增生情況的金標(biāo)準(zhǔn)。

2、細胞免疫表型分析即細胞分化抗原簇(CD)分析。用各種熒光染料標(biāo)記的抗CD單克隆抗體與流式細胞術(shù)結(jié)合，鑒定包括造血干細胞、各種淋巴細胞、髓系細胞、單核細胞、巨核細胞等的CD表型。目前在血液細胞學(xué)分析，特別是淋巴瘤和白血病分型方面應(yīng)用越來越廣。

3、細胞遺傳學(xué)分析淋巴瘤，白血病、MDS等惡性血液病，往往有染色體異常。通過直接制片用熒光原位雜交(FISH)技術(shù)可以作細胞分裂間期的細胞遺傳學(xué)分析或通過短期培養(yǎng)，即可進行常規(guī)染色體鑒定，目前以FISH和常規(guī)染色體鑒定為基礎(chǔ)的細胞遺傳學(xué)已逐步發(fā)展為診斷淋巴瘤，白血病乃至多種實體腫瘤的常規(guī)診斷手段。

4、分子遺傳學(xué)分析從基因(DNA或RNA)水平研究和診斷血液系統(tǒng)疾病[2]，是當(dāng)前熱點，例如由于9號和22號染色體易位t(9:22)形成的，在慢粒白血病常見的Ph染色體，以往多用染色體分析法鑒定，后來發(fā)現(xiàn)這種易位形成了一個新的融合基因bcr-abl，從而可用基因探針技術(shù)或PCR進行定性和定量分析。

5、直接查找微生物如黑熱病的利-杜體、弓形蟲等。近年來，由于臨床免疫抑制劑的大量使用和艾滋病的發(fā)生率增高，許多以往很少見的微生物如鳥分枝桿菌、組織胞漿菌(Histoplasma)等。這些病原微生物的檢測近來多利用包括分子生物學(xué)技術(shù)在內(nèi)的先進實驗室檢驗技術(shù)進行，但也常可在骨碎片中找到。

隨著時展，骨髓檢查的內(nèi)容愈加豐富，技術(shù)手段也越來越多。現(xiàn)代的骨髓檢查已從早期單純的細胞涂片發(fā)展到以細胞形態(tài)學(xué)和組織形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)結(jié)合細胞化學(xué)、免疫組織化學(xué)、流式細胞分析，細胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)、超微結(jié)構(gòu)分析等諸多方面的綜合診斷學(xué)。常規(guī)的形態(tài)學(xué)檢查也逐步規(guī)范化。

參考文獻

第6篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

【關(guān)鍵詞】

慢性粒細胞白血病;α-2b干擾素;高三尖杉酯堿;阿糖胞苷

慢性粒細胞白血病(CML)是一種起源于骨髓多能干細胞的惡性增殖性疾病,是血液系統(tǒng)的常見病。95%CML伴有特異性的染色體異(Ph)或bcr/abl融合基因的出現(xiàn)[1]。傳統(tǒng)方法馬利蘭治療CML緩解率較高,但對推遲急變、延長生存期等療效尚不滿意[2]。我院2005年12月至2009年1月應(yīng)用α-2b干擾素聯(lián)合HA(高三尖杉酯堿,阿糖胞苷)方案治療慢性粒細胞白血病22例,取得了較好療效,現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料我院2005年12月至2009年1月經(jīng)臨床、血象、骨髓象及染色體檢查確診為慢性粒細胞白血病患者42例,診斷均符合張之南等主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[3]。所有患者均有肝脾腫大,肝腫大右肋下1~5 cm,脾腫大左肋下4~14 cm。血常規(guī):Hb 103~145 g/L,WBC(45~560)×109/L,Plt(150~1274)×109/L。Ph染色體檢查陽性38例,陰性4例。42例患者按隨機分配的原則分為治療組22例和對照組20例。治療組22例中,男14例,女8例,年齡33~68歲,中位年齡46.4歲。對照組20例中,男13例,女7例,年齡31~70歲,中位年齡48.1歲。兩組性別、年齡、脾腫大比例、血常規(guī)等均無顯著性差異(均P>0.05),具有可比性。

1.2治療方法①對照組:采用重組α-2b干擾素3×106 U皮下注射或肌內(nèi)注射,3次/周,連續(xù)應(yīng)用;②治療組:在對照組治療基礎(chǔ)上聯(lián)用小劑量HA方案,皮下注射阿糖胞苷12.5 mg,1次/12 h;高三尖杉酯堿2 mg/d加于10%葡萄糖溶液500 ml中,靜脈滴注4 h以上,聯(lián)用7~14 d為1個療程,每月重復(fù)1次。所有患者用藥時間均達到或超過12個月,用藥時間12~19個月。

1.3療效判斷標(biāo)準(zhǔn)療效根據(jù)《血液病學(xué)斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[3]分為:完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、未緩解(NR)三級。有效=CR+PR。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 10.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理,計數(shù)資料以百分數(shù)表示,比較采用χ2檢驗,P

2結(jié)果

2.1治療組22例中,CR 19例(86.4%),PR 2例(9.1%),NR 1例(4.5%),總有效率95.5%;對照組20例中,CR 7例(35.0%),PR 7例(35.0%),NR 6例(30.0%),總有效率70.0%。治療組療效優(yōu)于對照組,兩組總有效率比較,差異有顯著性(P

表1

治療組和對照組療效比較(例,%)

組別例數(shù)CRPRNR總有效率(%)

治療組2219(86.4)2(9.1)1(4.5)95.5*

對照組207(35.0)7(35.0)6(30.0)70.0

注:兩組總有效率比較,*P

2.2治療組在治療初期出現(xiàn)發(fā)熱5例,體溫均未超過38.5℃,其中4例自行退熱,用藥2周后未再出現(xiàn)發(fā)熱,1例應(yīng)用吲哚美辛后體溫恢復(fù)正常;治療過程中,3例出現(xiàn)輕度消化道反應(yīng),3例白細胞輕度下降,乏力1例。對照組在治療初期出現(xiàn)發(fā)熱6例,其中4例自行退熱,其余2例口服對乙酰氨基酚后退熱;骨關(guān)節(jié)痛和乏力各1例。兩組患者不良反應(yīng)均可耐受,未退出治療。

3討論

CML是造血干細胞水平的惡性克隆性疾病,多數(shù)患者確診后經(jīng)過1~4年的慢性期后進入加速期和(或)急變期,表現(xiàn)為對羥基脲耐藥,肝脾進行性腫大,血小板持續(xù)增高,骨髓中原始幼稚細胞增多或出現(xiàn)附加染色體異常等。

目前,干擾素是最可能使慢粒患者獲得完全緩解并延緩急變和延長生存期的藥物。IFNα-2b可選擇性抑制CMLph陽性細胞,增強CML原始造血祖細胞與骨髓基質(zhì)細胞的黏附性,調(diào)節(jié)造血微循環(huán)從而促進正常各系列細胞的增殖[4]。作用于CML細胞后,IFNα-2b使自身反應(yīng)性T細胞對CML細胞的識別能力加強,從而增設(shè)了免疫調(diào)節(jié)的功能。文獻報道[5],α干擾素聯(lián)用阿糖胞苷在細胞遺傳學(xué)完全緩解、細胞遺傳學(xué)部分緩解及長期生存率等方面的療效優(yōu)于單用α干擾素。高三尖彬酯堿和阿糖胞苷均有抑制慢性粒細胞、促進其凋亡的作用。IFNα-2b聯(lián)合HA方案治療CML具有協(xié)同作用,可產(chǎn)生較好的細胞遺傳學(xué)反應(yīng),縮脾快、降低白細胞效果明顯、血液學(xué)緩解率高。

本研究采用α-2b干擾素聯(lián)合HA方案治療CML結(jié)果顯示,HA方案誘導(dǎo)緩解近期療效較好,CR率86.4%,總有效率95.5%。本方案采用劑量偏小,骨髓抑制作用輕弱,故感染機會小,無明顯出血表現(xiàn),且醫(yī)療費用較低,患者不良反應(yīng)均可耐受。總之,α-2b干擾素聯(lián)合小劑量HA方案是治療CML經(jīng)濟、合理且有效的方法,值得推廣應(yīng)用。

參考文獻

[1]鄧家棟.鄧家棟臨床血液學(xué).上海科學(xué)技術(shù)出版社,2001:998.

[2]孫敬光.干擾素聯(lián)合小劑量HA治療慢性粒細胞白血病.白血病?淋巴瘤,2003,6(12)3:169.

[3]張之南,沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn).科學(xué)出版社,2007:232-234.

第7篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

1資料與方法

1．1臨床資料32例患者均為2012年6月至2015年5月收治的確診為慢性淋巴細胞白血病的患者，其中男性25例，女性7例，中位年齡61歲（40～83歲）。Binet分期為A期3例，B期4例，C期25例。A組18例患者骨髓涂片計數(shù)幼稚淋巴細胞比例≥5％，其中男性13例，女性5例，中位年齡為63歲（41～83歲），Binet分期為A期2例，B期3例，C期13例。B組14例患者骨髓涂片計數(shù)幼稚淋巴細胞比例＜5％，其中男性12例，女性2例，中位年齡59歲（40～78歲），Binet分期為A期1例，B期1例，C期12例。

1．2骨髓形態(tài)學(xué)檢查所有患者入院后均行骨髓穿刺抽取骨髓血0．2ml涂片，經(jīng)瑞氏染色后觀察骨髓增生程度，在涂片佳、染色良好、細胞分布均勻處每張骨髓涂片計數(shù)200個有核細胞，計算幼稚淋巴細胞和成熟淋巴細胞的比例。

1．3免疫表型檢測采用肝素抗凝的新鮮骨髓血5ml，應(yīng)用CD45／SSC設(shè)門對所有慢性淋巴細胞白血病患者進行免疫表型檢測。使用的單克隆抗體包括：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD10、CD11c、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD23、HLA－DR、FMC－7、Kappa、Lambda、CD45。使用流式細胞儀（美國BD公司）進行檢測，白細胞分化抗原陽性細胞數(shù)以＞30％為該表型抗原表達陽性。

1．4熒光原位雜交檢測取骨髓血5ml行熒光原位雜交（fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH）檢測：每份標(biāo)本加CLL組套探針：GLPD13S25、GLPATM、GLPRB1、GLPp53序列特異性探針及CSP12染色體著絲粒特異性探針、雜交緩沖液混勻，滴至玻片的待雜交處，蓋上蓋玻片，封片。將玻片放至濕盒，置78℃水浴鍋預(yù)溫5min，移至42℃培養(yǎng)箱雜交過夜；洗片，復(fù)染，放入4℃冰箱中10min左右觀察。隨機計數(shù)200個細胞。正常細胞為兩紅兩綠，p53缺失者及RB1基因缺失者為1綠基因信號，ATM基因缺失者及D13S25基因缺失者為1紅基因信號，12號染色體三體者顯示3紅基因信號。

1．5隨訪及統(tǒng)計學(xué)分析隨訪截止日期為2015年5月1日，采用SPSS13．0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，P＜0．05認為有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。

2結(jié)果

2．1慢性淋巴細胞白血病患者骨髓形態(tài)學(xué)特征所有患者骨髓均為增生活躍或極度活躍骨髓象，淋巴細胞比例顯著增多，多為成熟的小淋巴細胞，染色質(zhì)呈塊狀，胞漿少，同時可見數(shù)量不等的幼稚淋巴細胞，染色質(zhì)較成熟淋巴細胞疏松，胞漿比例增加，部分可見核仁（圖1）。紅系、粒系及巨核細胞均不同程度減少。

2．2慢性淋巴細胞白血病患者的免疫分型檢測情況所有患者均表達CD5、CD19、CD20、CD23，其中A組患者4例表達FMC－7，3例表達CD38，各有1例患者表達CD2、CD15、CD235a。B組患者均未檢測到FMC－7及CD38表達。

2．3熒光原位雜交檢測情況應(yīng)用GLPD13S25、GLPATM、GLPRB1、GLPp53序列特異性探針及CSP12染色體著絲粒特異性探針進行原位雜交檢測結(jié)果顯示：A組患者3例存在p53缺失，2例存在ATM缺失，5例存在12號染色體三體，9例患者可同時檢測到多種基因缺失；B組患者1例存在p53缺失，1例存在ATM缺失，3例存在12號染色體三體，5例患者可同時檢測到多種基因缺失（表1）。

2．4慢性淋巴細胞白血病患者的生存情況32例患者無1例失訪，中位隨訪時間為42個月（6～120個月）。A組患者1年、3年及5年總生存率分別為93．3％、83．3％和59．3％，B組患者均存活超過5年（圖3）。

3討論

CLL是一種單克隆性小淋巴細胞凋亡受阻、存活時間延長而大量聚集在骨髓、血液、淋巴結(jié)和其他器官，最終導(dǎo)致正常造血功能衰竭的低度惡性疾病。在歐美國家占慢性白血病的50％以上，在我國發(fā)病率低，僅占慢性白血病的10％。但是，該病是一種異質(zhì)性疾病，生存期長短不一，長者可達10余年，預(yù)后差者病程不足2～3年。臨床上用于判斷預(yù)后的指標(biāo)包括疾病分期、外周血幼稚細胞及涂抹細胞比、β2－微球蛋白水平、外周血單核細胞比例，ZAP70陽性、CD38陽性為獨立的預(yù)后不良因素。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)p53基因缺失者，病情進展快，腫瘤負荷高，多處于疾病的晚期，對常用化療藥物耐藥，預(yù)后差。ATM基因位于染色體11q22，伴有ATM基因缺失者發(fā)病年齡較輕，且病程常表現(xiàn)為侵襲性，預(yù)后差，其可作為疾病進展的一個早期指標(biāo)。具有12號染色體三體遺傳學(xué)異常的CLL患者容易出現(xiàn)不典型的形態(tài)，容易向幼淋細胞白血病轉(zhuǎn)化，表達更強的SmIg與FMC－7，預(yù)后更差，Binet分期多為B或C期。D13S25探針標(biāo)記的是13q14．3，遠離著絲粒端；RB1探針標(biāo)記的是13q14，在近著絲粒端。兩者缺失者預(yù)后同染色體核型正常者相似，預(yù)后相對較好。

第8篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

1光鏡檢查

由于間皮瘤細胞形態(tài)的多樣性，光鏡下惡性間皮瘤組織學(xué)分型尚不統(tǒng)一。世界衛(wèi)生組織曾將彌漫性惡性間皮瘤（DMM）分為上皮型、肉瘤型和混合型。Adams等〔1〕根據(jù)胸膜DMM尸檢材料將該瘤分為上皮樣型、腺管狀型、肉瘤樣型、粘液樣型、硬纖維瘤樣型及混合型。并提出在彌漫性胸膜腫瘤中，如發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞產(chǎn)生膠原物質(zhì)就可確定其為DMM。否則，就應(yīng)存在胞漿內(nèi)微小空泡和均勻的輕到中度核／漿比。于國等〔2〕根據(jù)瘤細胞排列方式、瘤細胞分化不同及一種瘤細胞成分至少占50％以上將該瘤分為11種類型：腺管樣型、腺管狀型、未分化型、纖維母細胞型、印戒樣細胞型、粘液樣型、肌纖維母細胞型、淋巴組織細胞樣型、血管母細胞型、小細胞型及混合細胞型。并認為以下幾點有助于從光鏡方面診斷此瘤：①結(jié)合該瘤發(fā)生的特殊部位；②尋找腫瘤雙向分化，尤其當(dāng)懷疑此瘤時應(yīng)多取材制片觀察；③瘤細胞移行過渡現(xiàn)象；④多種不同類型瘤細胞混合存在；⑤臨床表現(xiàn)危重，但瘤細胞核分裂象較少見。

2電鏡檢查

瘤細胞表面及瘤細胞內(nèi)腔面有細長的蓬發(fā)樣微絨毛，胞漿內(nèi)豐富的張力微絲及糖原顆粒，有雙層或斷續(xù)的基底膜，瘤細胞間有較多的橋粒為DMM的超微結(jié)構(gòu)特征〔3〕。并將微絨毛、中間絲和細胞漿內(nèi)新腔稱為間皮瘤三聯(lián)征。而腺癌微絨毛粗而短，胞漿內(nèi)有分泌顆粒，細胞外腺腔形成為腺癌特征。于國等〔4〕研究發(fā)現(xiàn)DMM平均微絨毛長寬比值均＞11，而胸膜轉(zhuǎn)移性肺腺癌平均毛絨長寬比值均＜5，提出平均微絨毛長寬比值可作為DMM與腺癌鑒別的一個指標(biāo)。胸膜DMM和胸膜轉(zhuǎn)移性腺癌之間橋粒平均長度差異不明顯，但胸膜DMM均有不同數(shù)量橋粒長度超過1.5μm，而胸膜轉(zhuǎn)移性肺腺癌均無1例橋粒長度大于1.5μm。因此，應(yīng)用超微結(jié)構(gòu)測量最大橋粒長度對胸膜DMM診斷及與胸膜轉(zhuǎn)移性腺癌的鑒別診斷亦有一定價值。

3組織化學(xué)檢查

dMM分泌透明質(zhì)酸，可被奧辛藍或膠質(zhì)鐵染色。預(yù)先用透明質(zhì)酸酶處理后呈陰性反應(yīng)。而少部分腺癌亦可呈陽性反應(yīng)，但用透明質(zhì)酸酶處理后仍陽性。肺腺癌分泌中性粘蛋白，PAS-D染色陽性。而DMM因含大量糖原，PAS染色可陽性，但預(yù)先用淀粉酶處理后陰性。故組織化學(xué)染色在DMM與肺腺癌鑒別診斷中有一定幫助。但透明質(zhì)酸為水溶性，在標(biāo)本固定、染色過程中易丟失。而50％以上肺腺癌不產(chǎn)生中性粘蛋白。故組織化學(xué)染色假陰性率高，將逐漸被免疫組化取代。

4免疫組織化學(xué)檢查

免疫組織化學(xué)檢查是DMM鑒別診斷中最常用的輔助診斷方法。但目前尚沒有哪一種抗體對間皮瘤或腺癌是完全特異性的，大多數(shù)常用抗體僅對腺癌有反應(yīng)。間皮瘤的診斷是建立在陰性反應(yīng)的基礎(chǔ)上。常聯(lián)合應(yīng)用幾種抗體來降低假陰性率。而近年出現(xiàn)的間皮相關(guān)抗原，或特異性低，或敏感性差，或僅適用于冰凍切片，故未能廣泛應(yīng)用。免疫組化常用于以下方面：

4.1惡性上皮型間皮瘤與腺癌的鑒別Brown等〔5〕研究發(fā)現(xiàn)區(qū)分上皮型間皮瘤和腺癌最好的兩種標(biāo)記物為CEA和B72.3。同時陽性對腺癌的特異性為100％，敏感性為88％；同時陰性對間皮瘤的特異性為99％，敏感性為97％。CEA、B72.3和Leu-M1聯(lián)合應(yīng)用可使74％的病例得到明確診斷。Ordonez〔6〕研究認為CEA、Leu-M1、B72.3為最佳標(biāo)記物，和Ber-EP4一起應(yīng)用可使90％以上的間皮瘤和腺癌得到明確診斷。Riera等〔7〕應(yīng)用熱抗原修復(fù)方法對常用抗體進行再評價，發(fā)現(xiàn)大部分抗體在熱抗原修復(fù)后其敏感性增加，而特異性不降低。并發(fā)現(xiàn)CEA，Bg8和Ber-EP4為區(qū)分上皮型間皮瘤與腺癌的最佳標(biāo)記物。三者組合，順序應(yīng)用，幾乎可將所有的間皮瘤與腺癌正確區(qū)分開來。間皮相關(guān)抗原HBME-1，Thrombomodulin和Calretinin的敏感性和特異性較上述抗體低。但和上述抗體聯(lián)合應(yīng)用有助于間皮瘤的診斷。

4.2惡性上皮型間皮瘤和腺癌與反應(yīng)性間皮增生鑒別良惡性間皮細胞的鑒別診斷是病理診斷中的一個難點。EMA和p53〔8〕在良惡性間皮細胞鑒別診斷中具有一定價值。Wolanski等〔9〕利用胸腺膜活檢標(biāo)本研究，發(fā)現(xiàn)EMA在惡性病變中陽性率達73％，而良性病變中無1例陽性。而CEA、EMA和B72.3聯(lián)合應(yīng)用為區(qū)分腺癌和良性間皮增生的有用標(biāo)記物。B72.3在乳腺腺癌、肺腺癌、卵巢腺癌積液中均呈陽性反應(yīng)，而良性積液中無1例陽性〔10〕。

4.3肉瘤樣間皮瘤與肉瘤、局限性纖維瘤和反應(yīng)性漿膜纖維化鑒別肉瘤樣間皮瘤表達低分子量角蛋白，肉瘤、局限性纖維瘤和反應(yīng)性漿膜纖維化不表達任何形式角蛋白。用廣譜角蛋白標(biāo)記物AE1／AE3和低分子量角蛋白CAM5.2可以將肉瘤樣間皮瘤與局限性纖維瘤、硬纖維瘤樣間皮瘤及反應(yīng)性漿膜纖維化區(qū)分開來。Montag等〔11〕研究發(fā)現(xiàn)30例肉瘤樣型和混合型間皮瘤的肉瘤樣區(qū)均對AE1／AE3有反應(yīng)，而10種組織類型的39種梭形細胞腫瘤和腫瘤樣過程均陰性，僅少數(shù)梭形細胞腫瘤如滑膜肉瘤、上皮樣肉瘤、肉瘤樣癌、癌肉瘤偶爾陽性。間皮相關(guān)抗原（HBME-1，thrombo-modulin、calretinin）在肉瘤樣間皮瘤中陰性，在肉瘤樣間皮瘤的鑒別診斷中無價值〔10〕。

5核仁組成區(qū)嗜銀蛋白（AgNOR）檢查

agNOR反映了細胞核的增殖活性。近年研究認為Ag-NOR的不同特征（數(shù)目、大小、分布）在良惡性病變的鑒別診斷中具有一定價值。吳霞等〔12〕研究發(fā)現(xiàn)惡性間皮瘤與反應(yīng)性增生間皮二者主要區(qū)別為：①惡性間皮瘤AgNOR顆粒總平均值為4.26±1.28，反應(yīng)性增生間皮細胞為1.28±0.38；②惡性間皮瘤細胞核內(nèi)含1～2個顆粒，平均值為4.42±1.20，2.38±0.38；反應(yīng)性增生間皮細胞分別為1.28±0.31，1.7±0.48；③惡性間皮瘤細胞核內(nèi)AgNOR顆粒直徑≥2.6μm，占84.33％，反應(yīng)性增生間皮只占0.48％。這三項指標(biāo)可作為鑒別惡性間皮瘤與反應(yīng)性增生間皮的客觀依據(jù)。但良惡性間皮細胞平均AgNOR計數(shù)有重迭區(qū)，如將Ag-NOR顆粒面積0.6677μm2作為良性間皮的上限，則對惡性間皮瘤診斷特異性達100％，敏感性為63.8％；和EMA聯(lián)合應(yīng)用，可將敏感性提高到95％，而極少有假陽性〔9〕。最近使用圖像分析定量研究，使該方法具有快速、準(zhǔn)確、客觀的優(yōu)點。可以作為良惡性間皮細胞鑒別診斷的一種輔助診斷方法。

6、細胞學(xué)檢查

dMM常伴有胸腔積液。因此，胸水細胞學(xué)檢查仍是最常用、最重要的檢查方法。胸水中惡性間皮細胞常呈狀、結(jié)節(jié)狀分布，典型者呈“桑葚樣”，可伴纖維血管樣核心；亦可呈單一細胞散在分布，或兩者混合存在。惡性多核巨細胞伴細胞漿濃染和微小的周圍型空泡為有用的診斷特征。細胞核及核仁輕度不規(guī)則，但核／漿比基本正常。而其它類型惡性腫瘤細胞大小和形態(tài)差異很大，一個惡性細胞的大小可以是另一個惡性細胞大小的數(shù)倍，核仁大，核／漿比值上升。但上述任一特征均非特異性的，胸膜間皮瘤是建立在各種異常發(fā)現(xiàn)的綜合評價上。DMM胸水細胞學(xué)陽性率低，Renshaw綜合文獻報道在7％～77％之間，而做出間皮瘤特異性診斷的敏感性在4％～63％。因此，如臨床懷疑DMM而胸水的細胞學(xué)檢查陰性，應(yīng)進行其它方法檢查，如胸部CT、經(jīng)皮胸膜活檢、胸腔鏡檢查，開胸胸膜活檢等。薛立福等〔13〕報道胸腔鏡檢查對胸膜間皮瘤的診斷率達100％，可代替開胸胸膜活檢。

7、胸水細胞遺傳學(xué)檢查

細胞遺傳學(xué)檢查能夠在克隆水平辨別惡性腫瘤細胞數(shù)量上和（或）結(jié)構(gòu)上異常，并發(fā)現(xiàn)間皮瘤細胞存在一致性染色體畸形〔14〕，其中大部分為特異染色體區(qū)域的丟失，最常見染色體丟失區(qū)為1、3、9號染色體短臂和22號染色體長臂。其中9號染色體著絲點的丟失最常見，其發(fā)生率為73％±3％，丟失部分恰好為MTS1基因所在部位。推測MTS1基因的丟失與DMM的發(fā)生有關(guān)。Granados等〔15〕對10例臨床懷疑為DMM的病人進行胸水細胞遺傳學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)在所有的病例中均存在一種或幾種染色體區(qū)域的部分丟失。而6例非典型增生間皮均未發(fā)現(xiàn)克隆性染色體畸形。并提出觀察多種標(biāo)記染色體和（或）克隆性數(shù)值上的變化可以提高細胞遺傳學(xué)診斷的準(zhǔn)確率。其它類型腫瘤細胞，包括非小細胞肺癌，亦可出現(xiàn)DMM特征性的染色體區(qū)域性丟失。但DMM的核型沒有腺癌核型復(fù)雜，肺腺癌有10種以上克隆性畸形，且在每一細胞內(nèi)有多克隆的改變。而惡性間皮瘤克隆改變不超過10種，且細胞間極少變異。因此，細胞遺傳學(xué)檢查可以作為DMM細胞學(xué)檢查的一個有用的輔助診斷方法，在鑒別反應(yīng)性間皮細胞和惡性間皮瘤細胞方面具有重要價值。

第9篇：細胞遺傳學(xué)分析范文

【關(guān)鍵詞】 急性髓系白血病；染色體核型；化療

隨著白血病研究領(lǐng)域的不斷深入及治療技術(shù)的不斷提高 ， 急性白血病治療已經(jīng)取得了一定的臨床效果 ， 然而復(fù)發(fā)、老年、骨髓增生低下及骨髓增生異常綜合征可轉(zhuǎn)化為急性髓系白血病 ， 患者治療難度較大且化療中并發(fā)癥較多 ， 嚴重影響患者康復(fù) ， 同時緩解率較低[1]。因此探討提高緩解率的有效方法對于延長患者的生存期有著顯著的臨床價值 ， 染色體核型對治療方法、化療反應(yīng)及預(yù)后判斷有著重要的指導(dǎo)作用 ， 作者對河南省駐馬店市中心醫(yī)院收治的 106例急性髓系白血病患者臨床資料進行研究， 具體報告如下。 1 資料與方法

1. 1 一般資料 本院自 2010年 8月至 2012年 8月收治的58例急性髓系白血病患者， 男30例， 女28例， 年齡21～82歲 ，平均 49.2歲。所有患者均在知情下參與研究 ，依據(jù)患者骨髓象、血常規(guī)、流式細胞術(shù)免疫分型、AML特異相關(guān)融合基因檢測、細胞化學(xué)染色等檢查 ，依據(jù) FAB分型：其中M05例， M 13例， M 24例， M 321例， M 46例， M 56例， M 611例， M72例。

1. 2 細胞遺傳學(xué)分析 取骨髓液 5～6 ml， 加入肝素抗凝 ， 對有核細胞計數(shù)后采用短期培養(yǎng)法或者直接培養(yǎng)法制備染色體 ， 參照 （1～2）×10 6/ml進行 ， 同時采用常規(guī) R現(xiàn)代技術(shù)對染色體核型進行分析。觀察每例患者 20～30個中期細胞 ， 依照

《人類細胞遺傳學(xué)國際命名體制 （ ISCN2005） 》對核型進行描述 ， 若出現(xiàn) 3個細胞丟失相同染色體或者 2個以上細胞出現(xiàn)同樣染色體重構(gòu)或者增加可視為異常克隆。對于一些難以判定標(biāo)準(zhǔn)采用熒光原位雜交技術(shù)輔助證實[3]

1. 3 方法 給予所有患者全反式維甲酸亞砷酸 （0.15 mg/kg）或者全反式維甲酸 （20～25 mg/m 2）誘導(dǎo)緩解 ， 1次 /d， 給予聯(lián)合（。）

高白細胞血癥患者吡喃阿霉素藥物治療；本次研究患者中 ， 60歲以下 35例 ， 采用 TA方案：前三天采用吡喃阿霉素 20 mg/m2治療 ， 前 7天采用 100～150 mg/m 2治療。60歲以上患者 23例患者采用 CAG誘導(dǎo)方案：第 1～4天使用阿克拉霉素 14mg/m2， 第 1～14天采用阿糖胞苷 10 mg/m 2聯(lián)合粒系集落刺激因子 200 μg/m2治療。

2. 3 TA方案中， 核型優(yōu)良組患者緩解率明顯優(yōu)于其他兩組 ， P

3 討論

急性髓系白血病是抑制性較大疾病 ， 在治療初期對患者進行有效的誘導(dǎo)緩解 ， 同時對疾病危險度進行準(zhǔn)確判斷 ， 針對患者的病情選擇合適的誘導(dǎo)方案有助于提高緩解率 ， 延長患者的生命。染色體核型是對預(yù)后判斷的重要因素 ， 同時也是治療方案確立的關(guān)鍵因素 ， 因此深入研究染色體核型與化療、預(yù)后的關(guān)系有著重要的臨床價值。相較其他蒽環(huán)類藥物 ， 吡喃阿霉素的多藥耐藥機制存在著一定的差異 ， 能夠有效提高治療效果 ， 同時減少用藥時的不良反應(yīng) ， 且藥物對心臟的毒副作用較小 ， 值得推廣使用。因此采用 TA治療有助于患者病癥的緩解， 在治療核型優(yōu)良患者中可使用。而 CAG方案能夠誘導(dǎo)非增殖周期或者耐藥白血病細胞死亡 ， 因此在預(yù)后中等組、差組及初始原發(fā)老年患者及增生性患者的治療中具

有顯著療效。因此 ， 對患者的染色體核型進行分析研究 ， 選擇最佳治療方案很有必要。

本次研究顯示 ， 核型不同患者采用不同治療方案治療效果不同 ， 核型優(yōu)良組患者采用 TA方案治療 ， 緩解率更高 ， 而差組患者采用 CAG方案治療具有較高緩解率 ， 因此醫(yī)護人員要針對患者染色體核型給予適當(dāng)?shù)氖中g(shù)方式， 提高緩解率。患者首次治療緩解后， 應(yīng)立即進行骨髓移植， 避免耽擱治療。

參考文獻

[1]馬海珍. 阿糖胞搟 +阿克拉霉素 +粒系集落刺激因子方案治療急性髓系白血病療效與染色體核型關(guān)系 .蘭州大學(xué)學(xué)報 ， 2010， 36（3）：61.