動(dòng)物免疫的方法精選(九篇)

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第1篇：動(dòng)物免疫的方法范文

[關(guān)鍵詞]免疫血清；免疫；免疫學(xué)試驗(yàn)；效價(jià)

[中圖分類(lèi)號(hào)]R392.7

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1674-4721(2009)12(b)-139-02

動(dòng)物免疫血清的制備是一項(xiàng)常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，廣泛用于臨床診斷、治療和預(yù)防中，為教學(xué)、科研、檢驗(yàn)之常用。在醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)中，形象、直觀(guān)、簡(jiǎn)易的直接凝集反應(yīng)有助于學(xué)生了解抗原、抗體及抗原抗體間的免疫反應(yīng)等抽象的概念，免疫血清的質(zhì)量直接影響實(shí)驗(yàn)的特異性和敏感性。因此，制備高質(zhì)量的免疫血清是建立高水平檢測(cè)方法的前提條件。但免疫血清的制備較復(fù)雜，且需學(xué)生動(dòng)手操作，用量較大，為達(dá)到這一目的，除了具備理想的免疫原外，還需要選擇適宜的動(dòng)物和設(shè)計(jì)有效可行的免疫程序或方案。通過(guò)多年的工作實(shí)踐，筆者制備了高效價(jià)、高特異性、高親和性的動(dòng)物免疫血清，既經(jīng)濟(jì)又方便，供教學(xué)、科研所用，提高了實(shí)驗(yàn)的開(kāi)出率。

1　方法與結(jié)果

1.1　動(dòng)物的選擇及飼養(yǎng)

制備抗血清的動(dòng)物主要是哺乳類(lèi)和禽類(lèi)。羊、馬、豚鼠、兔都是常用的動(dòng)物，在實(shí)驗(yàn)中，選擇動(dòng)物時(shí)應(yīng)考慮抗原與動(dòng)物的種屬關(guān)系、抗原性質(zhì)與動(dòng)物種類(lèi)、免疫血清的需要量、要求以及動(dòng)物個(gè)體等因素。因不同動(dòng)物對(duì)同一抗原的敏感性不同，免疫時(shí)至少取用2只以上動(dòng)物。選擇制備免疫血清的動(dòng)物必須是適齡、健壯、無(wú)感染的正常動(dòng)物，體重最好在2～3 kg，年齡6個(gè)月以上，因雌性動(dòng)物在性周期的不同階段和懷孕、授乳時(shí)機(jī)體對(duì)抗原的敏感性有較大改變，所以一般挑取雄性動(dòng)物。動(dòng)物免疫后要認(rèn)真做好動(dòng)物的編號(hào)、標(biāo)記、管理和記錄，本實(shí)驗(yàn)用的動(dòng)物是健康家兔。

1.2　抗原的制備

1.2.1　抗原稀釋

用滅菌生理鹽水將抗原稀釋為2mg／ml，放置4℃過(guò)夜，次日取出，與佐劑混合制成乳劑后用于動(dòng)物免疫。免疫原的注射劑量隨抗原的性質(zhì)有較大差異。一般考慮抗原的免疫原性的強(qiáng)弱、分子量大小、抗原的純度、有無(wú)毒性及動(dòng)物個(gè)體狀態(tài)、免疫途徑和時(shí)間、佐劑的使用與否等。對(duì)于純的可溶性抗原，免疫時(shí)需與等量的弗氏完全佐劑混合，其免疫劑量以動(dòng)物體重計(jì)算，一次注入的總劑量以0.5 mg／kg為宜。通常免為100～1000μg／次。另外免疫周期長(zhǎng)者可少量多次注射，免疫周期短者可大量少次注射制備高度特異性的抗血清，選用低劑量抗原短程免疫法。

免疫周期隨抗原和免疫方法的不同以及是否使用佐劑而變化。單次注射抗體產(chǎn)生緩慢，效價(jià)低，維持時(shí)間短，但抗體特異性高；多次注射無(wú)以上缺點(diǎn)，但抗體特異性有所降低，一般以3～4次較合適。注射間隔時(shí)間一般以1～2周為宜。間隔時(shí)間短，起不到再次免疫的作用；太長(zhǎng)，則免疫過(guò)程延長(zhǎng)，從而影響血清的特異性，如無(wú)佐劑時(shí)間隔2～4d，加用佐劑時(shí)可間隔10～30d。初次免疫與第二次免疫的間隔時(shí)間多為2～4周，此后，每次加強(qiáng)免疫的間隔時(shí)間為2～3周。

1.2.2　佐劑和抗原乳劑的配制

1.2.2.1　佐劑的配制。弗氏完全佐劑，各實(shí)驗(yàn)室的配方不盡相同，我室采用的配方如下：醫(yī)用液體石臘20 ml與羊毛脂12g混勻加熱溶化，分裝于青霉素小瓶，用紗布、線(xiàn)繩扎緊瓶塞。高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?。于免疫前?zhǔn)備抗原乳劑制備時(shí)，以活卡介苗代替死結(jié)核菌，每毫升試劑中加入10mg活卡介苗，即為弗氏完全佐劑。

1.2.2.2　抗原乳劑的制備。本實(shí)驗(yàn)選用注射器推注法：將抗原溶液和等量的完全佐劑(注意佐劑必須先加熱融化。不超過(guò)50℃)分別吸入兩個(gè)5 ml注射器內(nèi)，在兩個(gè)注射器的12號(hào)針頭間用一根長(zhǎng)約8-12 cm的醫(yī)用無(wú)毒塑料管。將兩個(gè)注射器連接在一起(塑料管必須浸泡消毒與注射器針頭相連接)。針頭塑料管1～2 cm然后兩人相對(duì)而坐。緩緩?fù)苿?dòng)針?biāo)?，使管?nèi)溶液進(jìn)入塑料管道至對(duì)側(cè)注射器內(nèi)，每次必須把管內(nèi)容物全部推出，另一側(cè)同樣操作，使管內(nèi)液體往返混合直至形成油包水乳劑為止。

制成的乳劑是否形成油包水乳劑直接影響免疫效果，因此，必須進(jìn)行質(zhì)量檢查。檢查的方法：將制成的乳劑滴在涼的自來(lái)水表面，質(zhì)量合格的乳劑滴入水面保持乳滴珠完整而不分散；如進(jìn)入水面后立即擴(kuò)散，水面油花逐漸擴(kuò)大即不合格，應(yīng)繼續(xù)乳化至合格為止。

1.3　免疫途徑、注射時(shí)間、部位及劑量

不同的免疫途徑，抗原在體內(nèi)的的代謝速度不同，對(duì)免疫系統(tǒng)的刺激強(qiáng)弱也就不同，因而產(chǎn)生抗體的水平也就不同?？乖淖⑸渫緩娇筛鶕?jù)免疫動(dòng)物個(gè)體的大小、抗原及抗體制備目的或要求不同，選用皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈或腹腔等不同途徑免疫。本實(shí)驗(yàn)對(duì)家兔使用皮內(nèi)和皮下多點(diǎn)注射。第1周在足、掌皮內(nèi)注射含佐劑抗原0.1ml，第2周在腹部皮下注射含佐劑抗原0.5 ml，第3周在腹部皮下注射不含佐劑抗原0.5 ml，第4周在腹部皮下注射不含佐劑抗原0.5 ml。

1.4　試血及測(cè)定抗體效價(jià)

末次注射10 d后于耳靜脈采血2 ml，分離血清進(jìn)行試血。筆者選用免疫雙擴(kuò)散法在56℃條件下加熱30 min滅活補(bǔ)體。在瓊脂板中間孔加稀釋的抗原10μl( mg／ml)，周?chē)滓理槙r(shí)針?lè)较?，分別加入用生理鹽水或PBS按1：2，1：4，1：8，1：16，1：32和1：64的比例稀釋的動(dòng)物免疫血清。經(jīng)37℃保溫24 h后觀(guān)察結(jié)果，效價(jià)在1：16以上即可決定采血。選用環(huán)狀沉淀試驗(yàn)將一定濃度的抗原200μl加入到環(huán)狀沉淀管中，然后在抗原液面上加入稀釋的免疫血清，如在20 min內(nèi)，抗原與血清的交界面能出現(xiàn)“++”的沉淀環(huán)，以沉淀環(huán)的直徑、大小來(lái)判斷效價(jià)的高低。一般效價(jià)高達(dá)1：2040以上才可放血。

1.5　取血、分離、分裝及保存

免疫動(dòng)物經(jīng)效價(jià)檢測(cè)合格后即可考慮取血。為減少血清中的脂肪含量，放血前可考慮停食12 h。本實(shí)驗(yàn)采用心臟穿刺取血，無(wú)菌技術(shù)進(jìn)行操作，動(dòng)物于仰臥位固定，用食指探明心臟博動(dòng)量高部位，剪去少許毛。用2.5％碘酒和75％酒精消毒后，以9號(hào)針頭在預(yù)定位置與胸部呈45。角刺入心臟，微微上下移動(dòng)針頭，待血液進(jìn)入針筒后，即將注射器位置固定取血。2.5kg體重的家兔一次可取血20～30ml。取血后由靜脈緩緩注入等量5％葡萄糖液以補(bǔ)足失血量。取血的兔子經(jīng)2～3個(gè)月休息?？稍俅渭訌?qiáng)免疫后取血。

1.6　分離血清及免疫血清的保存

無(wú)菌條件下將平皿或三角瓶?jī)?nèi)的血液凝固血塊收縮后，用無(wú)菌滴管吸取血清，于3 000 rpm離心15 min。取上清液。合格后的抗血清以1：100比例加入1％的硫柳汞或5％的疊氮鈉，最后濃度分別為0.01％或0.05％，用無(wú)菌滴管將抗血清分裝小管，每管裝1ml左右。-20℃以下保存，可保存2年以上。如有條件可將血清冷凍干燥保存于4℃以下冰箱。保存時(shí)間更久。

第2篇：動(dòng)物免疫的方法范文

（兵團(tuán)第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，新疆五家渠831300）

收稿日期：2014—11—24

摘要：實(shí)施動(dòng)物強(qiáng)制免疫是國(guó)家預(yù)防控制重大動(dòng)物疫病的有效手段之一。本文對(duì)六師轄區(qū)內(nèi)畜禽實(shí)施口蹄疫、高致病性禽流感、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病和小反芻獸疫強(qiáng)制免疫抗體檢測(cè)不合格單位進(jìn)行了走訪(fǎng)調(diào)查，查找并分析了影響動(dòng)物免疫水平的相關(guān)因素，為今后進(jìn)一步做好重大動(dòng)物疫病防控工作提供參考。

關(guān)鍵詞 ：動(dòng)物疫病；免疫；調(diào)查

近年來(lái)，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，新的動(dòng)物疫病不斷發(fā)現(xiàn)、傳入，高致病性禽流感、小反芻獸疫、高致病性豬藍(lán)耳病、口蹄疫A型等傳染病先后發(fā)生流行。嚴(yán)重影響了畜牧產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，給我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。我國(guó)高度重視動(dòng)物疫病防控工作，動(dòng)物疫病實(shí)行預(yù)防為主的方針，有計(jì)劃的實(shí)施動(dòng)物疫病控制、消滅和凈化工作。

六師對(duì)轄區(qū)內(nèi)畜禽實(shí)施口蹄疫、高致病性禽流感、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病和小反芻獸疫按照重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫的要求，在3月、7月、11月開(kāi)展集中免疫，月月補(bǔ)免，新生畜、補(bǔ)欄畜禽及時(shí)實(shí)施初免和加強(qiáng)免疫，應(yīng)免畜禽100%免疫，常年免疫密度達(dá)90%以上。并對(duì)口蹄疫、高致病性禽流感等免疫情況進(jìn)行抗體檢測(cè)，評(píng)價(jià)免疫效果，要求口蹄疫、高致病性禽流感等免疫抗體合格率達(dá)70%以上。通過(guò)檢測(cè)，口蹄疫、高致病性禽流感等個(gè)體免疫合格率基本上達(dá)到了70%以上，但是部分檢測(cè)場(chǎng)點(diǎn)合格率低于70%。對(duì)此，我們對(duì)免疫抗體檢測(cè)不合格單位進(jìn)行了走訪(fǎng)調(diào)查，查找并分析了影響動(dòng)物免疫抗體產(chǎn)生的相關(guān)因素，現(xiàn)總結(jié)如下。

1漏免

動(dòng)物流動(dòng)性大，調(diào)運(yùn)頻繁，導(dǎo)致部分動(dòng)物沒(méi)能及時(shí)免疫。尤其是一些專(zhuān)門(mén)從事活畜買(mǎi)賣(mài)的活動(dòng)者，他們根據(jù)活畜交易價(jià)格進(jìn)行靈活交易，其飼養(yǎng)活畜的時(shí)間長(zhǎng)短不一，而動(dòng)物防疫采取的是定期免疫，易導(dǎo)致漏免。而且，受養(yǎng)殖場(chǎng)舍建設(shè)條件限制，已免動(dòng)物和未免動(dòng)物混群飼養(yǎng)。隨機(jī)采樣時(shí)，未免動(dòng)物的樣品占到一定比例，從而導(dǎo)致免疫群體免疫合格率低，還有一部分動(dòng)物在免疫過(guò)程中由于保定不徹底，逃脫免疫，采樣時(shí)采集到該動(dòng)物樣品，也降低了免疫合格率。

2實(shí)際免疫情況不詳

《動(dòng)物防疫法》規(guī)定，飼養(yǎng)動(dòng)物的單位和個(gè)人應(yīng)該履行動(dòng)物防疫義務(wù)，即畜主作為防疫主體，有義務(wù)做好動(dòng)物防疫工作。獸醫(yī)機(jī)構(gòu)對(duì)其進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo)、培訓(xùn)、宣傳教育和監(jiān)督。而當(dāng)前的現(xiàn)狀是，大型的、公司化運(yùn)作的養(yǎng)殖企業(yè)，有專(zhuān)職的防疫人員開(kāi)展免疫工作，中、小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)仍然依賴(lài)獸醫(yī)站人員為其實(shí)施免疫。防疫人員在任務(wù)量大時(shí)，把疫苗交給養(yǎng)殖戶(hù)，由養(yǎng)殖戶(hù)自己免疫。在監(jiān)管不力時(shí)，不管養(yǎng)殖企業(yè)，還是中、小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)，其免疫是否實(shí)施，免疫時(shí)間、免疫數(shù)量、免疫劑量等不得而知。另外，由于工作待遇較低，防疫任務(wù)繁重，防疫員工作積極性受到影響，個(gè)別防疫員免疫工作不到位。

3疫苗質(zhì)量問(wèn)題

目前市售疫苗廠(chǎng)家多，疫苗品種、類(lèi)型繁多，有單苗、雙價(jià)苗、聯(lián)苗，有滅活苗、弱毒苗，也有合成肽疫苗、基因工程疫苗等，可能部分批次的疫苗質(zhì)量存在問(wèn)題。筆者曾遇到一起疫苗質(zhì)量事件，某口蹄疫A型疫苗，外觀(guān)、包裝完好，且按照要求保存，在第一次吸取液體后，剩余液體出現(xiàn)分層現(xiàn)象。近年來(lái)，牛、羊口蹄疫O型和亞I型免疫抗體檢測(cè)出現(xiàn)以下情況：牛、羊口蹄疫O型免疫抗體檢測(cè)均合格的單位，其亞I型免疫抗體檢測(cè)卻不合格；或者出現(xiàn)牛、羊口蹄疫O型、亞I型免疫抗體檢測(cè)均合格的單位，其口蹄疫O型免疫抗體檢測(cè)合格的數(shù)量要比亞I型多，二者免疫合格率相差較大，認(rèn)為也可能是疫苗的質(zhì)量問(wèn)題。

另外，未按照疫苗保存溫度要求保存，滅活疫苗緊貼冰箱內(nèi)壁結(jié)冰；或冷凍疫苗未用疫苗專(zhuān)用車(chē)輛運(yùn)送，造成疫苗有效成分下降、失活，都會(huì)影響免疫質(zhì)量。

4免疫操作不當(dāng)

常用疫苗免疫方法有注射免疫、飲水免疫、滴鼻和點(diǎn)眼等方法。不管使用那種免疫方法進(jìn)行免疫，如果操作不當(dāng)，就會(huì)造成疫苗污染、免疫劑量不足等問(wèn)題，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生的抗體水平低下。另外，如果免疫器械受損，未能及時(shí)進(jìn)行檢查和更換，將直接導(dǎo)致免疫劑量不足，影響免疫抗體水平。

5免疫期過(guò)長(zhǎng)

動(dòng)物在免疫后免疫抗體水平呈上升趨勢(shì)，當(dāng)達(dá)到一定水平后會(huì)維持一段時(shí)間，之后逐漸下降[1]。因此，免疫期長(zhǎng)，免疫抗體效價(jià)也越低，免疫合格率就會(huì)越低。以小反芻獸疫為例，2014年1月份實(shí)施緊急免疫接種，3月份檢測(cè)，免疫合格率達(dá)到70%以上，8月份檢測(cè)，免疫合格率僅為60%。免疫合格率下降了10%，如果不進(jìn)行加強(qiáng)免疫，在以后的檢測(cè)中，小反芻獸疫免疫抗體水平還會(huì)下降。

6個(gè)體差異

部分牲畜體質(zhì)虛弱，免疫后不能很好的產(chǎn)生免疫抗體。部分牲畜有免疫耐受性，疫苗免疫不敏感，導(dǎo)致免疫抗體處于低水平狀態(tài)。

7未加強(qiáng)免疫

按照免疫程序，新生畜禽在初免后，間隔1個(gè)月時(shí)間應(yīng)實(shí)施加強(qiáng)免疫，且劑量加倍。但是調(diào)查發(fā)現(xiàn)，部分畜禽沒(méi)有很好地實(shí)施加強(qiáng)免疫。尤其是在小規(guī)模肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)，由于飼養(yǎng)周期短，受其它疫苗免疫程序影響，禽流感H5N1亞型滅活疫苗只免疫1次。與加強(qiáng)免疫的群體抗體效價(jià)和免疫合格率相比，其免疫效價(jià)和免疫合格率均低于加強(qiáng)免疫的樣品。

8應(yīng)激反應(yīng)

在實(shí)施免疫時(shí)，畜禽很容易受到高溫天氣、驚嚇、保定、劇烈運(yùn)動(dòng)等因素的影響，發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)。另外，疫苗免疫也是一種應(yīng)激因素。發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)會(huì)影響機(jī)體免疫系統(tǒng)和功能，降低機(jī)體防衛(wèi)能力，造成免疫抑制。同時(shí)，防衛(wèi)機(jī)能減弱，容易引發(fā)其它疾病發(fā)生，也可造成免疫抑制。

9免疫抑制性疾病

免疫抑制性疾病不僅引起原發(fā)感染和繼發(fā)感染，而且損害機(jī)體免疫功能，導(dǎo)致免疫耐受、免疫麻痹，降低疫苗免疫應(yīng)答能力，甚至不產(chǎn)生免疫應(yīng)答，致免疫失敗。如豬病有繁殖障礙和呼吸障礙綜合征、豬圓環(huán)病毒II型、豬瘟、偽狂犬病、豬氣喘病等，雞病有傳染性法氏囊病、馬立克氏病、雞傳染性貧血病、禽白血病等。

參考文獻(xiàn)

[1]胡輝忠.湟中縣重大動(dòng)物疫病防控現(xiàn)狀調(diào)查與思考[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊， 2012（2）： 69-70.

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第3篇：動(dòng)物免疫的方法范文

【關(guān)鍵詞】 ，，重癥肌無(wú)力;受體，膽堿能;小鼠，轉(zhuǎn)基因

［摘要］ ［目的］ 探討電鰩乙酰膽堿受體誘導(dǎo)人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力的機(jī)制. ［方法］ 將電鰩電器官分離并純化的乙酰膽堿受體作為免疫原，免疫人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠，以放射免疫方法測(cè)定小鼠血清中抗乙酰膽堿受體抗體滴度，以免疫熒光技術(shù)觀(guān)察小鼠骨骼肌中抗乙酰膽堿受體抗體的結(jié)合性. ［結(jié)果］ 小鼠血清中的抗乙酰膽堿受體抗體滴度為155～539pmol，小鼠肌肉中具有人抗乙酰膽堿受體抗體. ［結(jié)論］ 電鰩乙酰膽堿受體刺激人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生的人抗乙酰膽堿受體抗體，可與肌肉組織中的乙酰膽堿受體結(jié)合，導(dǎo)致肌肉收縮無(wú)力，可誘導(dǎo)重癥肌無(wú)力.

［關(guān)鍵詞］ 重癥肌無(wú)力;受體，膽堿能;小鼠，轉(zhuǎn)基因

ABSTRACT:OBJECTIVE To investigate the pathogenesis of experimental autoimmune myasthenia gravis（EAMG），induced with Torpedo acetylcholine receptor（AChR），in mice transgenic for human immunoglobulin（Ig）loci.METHODS Mice transgenic for human Ig loci were immunized with Torpedo AChR，isolated and purified from electronic organs of Torpedo.The titers of anti-mouse AChR antibody in the sera of mice were determined by radioimmunoassay.The binding of human anti-AChR antibodies to the AChR in the muscle of mice was measured by immunofluorescence technique.RESULTS The titers of anti-mouse AChR antibodies in the sera ranged from155to539pmol.The human anti-AChR antibodies were found to bind to the muscle section.CONCLUSION The human anti-AChR antibodies，secreted from the mice transgenic for human Ig loci，induced with Torpedo AChR，are able to bind to AChR in the mouse muscles，which leads to the damages of AChR，resulting in the animal EAMG.

Key words:myasthenia gravis;receptors，cholinergic;mice，transgenic

抗乙酰膽堿受體抗體與神經(jīng)肌肉接頭處的乙酰膽堿受體結(jié)合，可激活補(bǔ)體而使突觸后膜乙酰膽堿受體遭到破壞，導(dǎo)致肌肉收縮無(wú)力，出現(xiàn)重癥肌無(wú)力癥狀.引起重癥肌無(wú)力的病因目前尚不清楚，但若給動(dòng)物免疫乙酰膽堿受體或注射抗乙酰膽堿受體抗體，可引發(fā)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力 ［1，2］ .在以乙酰膽堿受體作為免疫原建立重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型中，常用由電鰩電器官制備的乙酰膽堿受體，是因?yàn)殡婗幍囊阴Ｄ憠A受體含量及與哺乳類(lèi)動(dòng)物骨骼肌乙酰膽堿受體的同源性均較高 ［3］ .電鰩乙酰膽堿受體刺激動(dòng)物產(chǎn)生的抗電鰩乙酰膽堿受體抗體可與動(dòng)物本身骨骼肌的乙酰膽堿受體進(jìn)行交叉反應(yīng).本實(shí)驗(yàn)室曾報(bào)道了以電鰩乙酰膽堿受體免疫人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠建立重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型 ［4］ ，其中發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)重癥肌無(wú)力的關(guān)鍵癥狀，即肌肉收縮無(wú)力，血清中亦檢測(cè)到了抗電鰩乙酰膽堿受體抗體.本文探討了電鰩乙酰膽堿受體誘導(dǎo)人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力的機(jī)制.

1 材料與方法

1.1 材料 含人免疫球蛋白μ，γ1，κ胚系基因的轉(zhuǎn)基因小鼠由荷蘭馬斯特里赫特大學(xué)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)學(xué)系神經(jīng)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室根據(jù)文獻(xiàn)［5，6］介紹的方法建立.電鰩乙酰膽堿受體由本實(shí)驗(yàn)室從電鰩電器官（Pacific Biomarine，California，USA）中分離，并經(jīng)眼鏡蛇毒素親和層析純化獲得 ［7］ ; 125 I-α-銀環(huán)蛇毒素為英國(guó)Amersham Pharmacia Biotech公司產(chǎn)品;小鼠乙酰膽堿受體粗提液由本實(shí)驗(yàn)室從小鼠骨骼肌中提取;羊抗人免疫球蛋白血清為本實(shí)驗(yàn)室自制;羊抗人免疫球蛋白G購(gòu)自美國(guó)Cappel，ICN Pharma-ceuticals公司，用時(shí)以1∶100稀釋;異硫氰酸熒光素標(biāo)記的兔抗羊免疫球蛋白抗體購(gòu)自德國(guó)Cappel，ICN Biochemicals公司，用時(shí)以1∶50稀釋.

1.2 動(dòng)物的免疫 15μg純化的電鰩乙酰膽堿受體中加入完全弗氏佐劑，注射于9只小鼠尾根部皮下，3，5周后分別以15μg純化的電鰩乙酰膽堿受體加入不完全弗氏佐劑行加強(qiáng)免疫;對(duì)照組3只小鼠只注射完全弗氏佐劑或不完全弗氏佐劑.

1.3 抗乙酰膽堿受體抗體的測(cè)定 應(yīng)用放射免疫方法測(cè)定小鼠血清中抗乙酰膽堿受體抗體的滴度. 將2nmol25 I-α-銀環(huán)蛇毒素混合入200μL小鼠乙 酰膽堿受體粗提液內(nèi)，在4℃條件下標(biāo)記4h，加入5μL動(dòng)物血清，4℃過(guò)夜，以過(guò)量的羊抗人免疫球蛋白血清沉淀小鼠乙酰膽堿受體-抗體復(fù)合物，用磷酸鹽緩沖液洗滌后，在γ計(jì)數(shù)儀上測(cè)定放射比活性.抗體滴度用每升α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合摩爾數(shù)表示.

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1.4 骨骼肌抗乙酰膽堿受體抗體結(jié)合性測(cè)定 應(yīng)用免疫熒光技術(shù)觀(guān)察小鼠骨骼肌中抗乙酰膽堿受體抗體的結(jié)合性.將小鼠骨骼肌冰凍切片并以丙酮固定后，用20g/L牛血清白蛋白封閉15min，加入羊抗人免疫球蛋白G，作用45min，洗滌，加入異硫氰酸熒光素標(biāo)記的兔抗羊免疫球蛋白抗體，繼續(xù)作用45min，觀(guān)察結(jié)果.

2 結(jié)果

2.1 小鼠血清抗乙酰膽堿受體抗體滴度 在行第2次加強(qiáng)免疫注射電鰩乙酰膽堿受體3d后，心臟穿刺采血，檢查血清中抗體滴度.9只實(shí)驗(yàn)小鼠的抗乙酰膽堿受體抗體滴度為155～539pmol（Fig1）.

2.2 骨骼肌抗乙酰膽堿受體抗體的結(jié)合 免疫熒光觀(guān)察結(jié)果表明，小鼠肌肉冰凍切片中可見(jiàn)抗乙酰膽堿受體抗體（Fig2略）.

3 討論

自從1973年P(guān)atrick和Lindstrom ［8］ 應(yīng)用電鰻乙酰膽堿受體免疫家兔建立第一個(gè)重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型以來(lái)，已經(jīng)在小鼠、大鼠、豚鼠、猴及豬等多種動(dòng)物中成功地建立了重癥肌無(wú)力模型，為研究重癥肌無(wú)力的發(fā)病機(jī)制和免疫治療提供了有效途徑.制作出與人重癥肌無(wú)力更為接近的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型已成為緊迫的研究課題.較為理想的動(dòng)物模型應(yīng)含有人免疫球蛋白、主要組織相容性抗原和乙酰膽堿受體基因.1994年Lonberg等 ［5］

建立了表達(dá)人免疫球蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，這使制作 這種新的重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型成為可能.人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠無(wú)論接受何種乙酰膽堿受體的免疫刺激，均將產(chǎn)生人免疫球蛋白，得到的重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型在免疫學(xué)方面更接近人重癥肌無(wú)力.本研究結(jié)果表明，人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠在接受電鰩乙酰膽堿受體刺激后，小鼠血清中抗乙酰膽堿受體抗體滴度在155～539pmol范圍內(nèi)，僅為抗電鰩乙酰膽堿受體（免疫原）抗體滴度（6～296nmol） ［4］ 的0.2%，與Berman等 ［9］ 研究結(jié)果相一致.免疫熒光觀(guān)察證實(shí)，小鼠肌肉中存在人抗乙酰膽堿受體抗體.上述結(jié)果表明，電鰩乙酰膽堿受體作為免疫原，可刺激人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生人抗乙酰膽堿受體抗體，它可與肌肉組織中乙酰膽堿受體結(jié)合，導(dǎo)致乙酰膽堿受體功能失調(diào)，最終誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力.人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型的建立及其機(jī)制的闡明，為研究制作理想的重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型奠定基礎(chǔ)，亦為獲得人源性抗乙酰膽堿受體單克隆抗體及基因工程抗體提供了新的途徑.

［參 考 文 獻(xiàn)］

［1］ Meng F，Stassen M，Schillberg S，et al..Constructionand characterization of a single chain antibody fragment derived from thymus of a patient with myasthenia gravis ［J］.Autoimmunity，2002，35:125.

［2］ De Baets M，Stassen M.The role of antibodies in myas- thenia gravis［J］.J Neurol Sci，2002，202:5.

［3］ Lennon VA，Lindstrom JM，Seybold ME.Experimental autoimmune myasthenia:a model of myasthenia gravis in rats and guinea pigs［J］.J Exp Med，1975，141:1365.

［4］ 李紅花，金桂花，孟繁平，等.重癥肌無(wú)力轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立［J］. 延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào) ，2006，29（2）:79.

［5］ Lonberg N，Taylor LD，Harding FA，et al..Antigen- specific human antibodies from mice compressing four distinct genetic modifications［J］.Nature，1994，368:856.

［6］ Fishwild DM，O'Donnell SL，Bengoechea T，et al.. High-avidity IgGκmonoclonal antibodies from a novel strain of minilocus transgenic mice［J］.Nat Biotechnol， 1996，14:845.

［7］ 楊康鵑，孟繁平，de Baets M.電鰩乙酰膽堿受體的分離 和純化［J］. 延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào) ，2004，27（1）:5.

第4篇：動(dòng)物免疫的方法范文

【關(guān)鍵詞】動(dòng)物吸傷;傷口處理;注射狂犬疫苗;免疫球蛋白血清

動(dòng)物咬傷是門(mén)診常見(jiàn)疾病，而寵物、家畜等溫血?jiǎng)游镆蜃梢砸鹑诵蠊不嫉募膊?，如狂犬病，鑒于狂犬病的100%致死性和暴露后處置的安全性，傷口的處理尤為重要，現(xiàn)報(bào)告如下：

1臨床資料

1.1 一般資料:全部傷者來(lái)自2008.3.13-2011.5.30本院門(mén)診病人，男142例，女89例，年齡1-5歲20人，6-14歲64人，15-60歲138人，60歲以上9人。致傷動(dòng)物：貓20例，狗196例，鼠1例，猴1例，兔1例。處理時(shí)間：1小時(shí)處理198例，4小時(shí)處理23例，8小時(shí)處理25例，≥24小時(shí)處理：2例。傷勢(shì)程度：II期228例，III期3例，縫合2例，全部狗咬，1例肌注免疫球蛋白，肌注破傷風(fēng)112例，肌注狂犬疫苗231例:其中1小時(shí)內(nèi)肌注113例，1-8小時(shí)內(nèi)62例，8-24小時(shí)51例，24小時(shí)以上5例。

1.2處理方法：傷口用皂水或肥皂、流動(dòng)水徹底沖洗，無(wú)論是否自行處理經(jīng)傷口，未結(jié)痂，處理至少15分鐘，由醫(yī)務(wù)人員規(guī)范處理，用生理鹽水將傷口洗凈，然后用干菌脫脂棉將傷口處殘留液吸盡，避免在傷口處理留肥皂水，較深傷口清洗時(shí)，用注射器插入傷口深部進(jìn)行灌注清潔，做得全面徹底，傷口較大時(shí)可使局部麻后進(jìn)行沖洗，傷口深時(shí)應(yīng)用雙氧水，最后碘伏或碘酒進(jìn)行消毒。2例顏面部給予縫合，3例給予5天靜滴抗生素防感染，10例給予抗生素口服。1例處理傷口用免疫球蛋白在傷口及周?chē)鹘?rùn)注解。

2結(jié)果

傷口全部治愈，無(wú)并發(fā)癥，1例肌注狂犬疫苗后發(fā)熱39。C，給予對(duì)癥處理。隨訪(fǎng)無(wú)并發(fā)癥。

3討論

討論：狂犬病是引起人類(lèi)共的急性傳染病，狂犬病在人體內(nèi)潛伏期可以是幾天長(zhǎng)至數(shù)年，發(fā)病后病程進(jìn)度較快，一般1月患者即痛苦地死亡，死亡率高達(dá)100%，狂犬病疫苗的使用對(duì)減少狂犬病的發(fā)生起到了至關(guān)重要的使用。

3.1狂犬病預(yù)防:

表1 WHO推薦的暴露后治療指南

3.2及時(shí)處理傷口:盡快用20%肥皂水或0.1%新潔爾滅反復(fù)沖洗，辦求去除狗涎，擠出污血。如果是穿通傷口，應(yīng)用插管插入傷口內(nèi)，用注射器灌清水沖洗，沖洗后用5%碘酊反復(fù)燒灼傷口。除非傷口大血管需緊急止血外，即使傷口深大，也不應(yīng)縫合、包扎。對(duì)傷口周?chē)钠つw有針刺，盡量擠壓出血或用火罐拔毒，。切忌用嘴吮吸傷口，以防止口腔黏膜感染。嚴(yán)重咬傷及傷口靠近頭部的病人，用抗狂犬病免疫血溥 或免疫球蛋白在傷口及周?chē)鹘?rùn)注射。此外，需要防止細(xì)菌感染或破傷風(fēng)[1]。

3.3狂犬疫苗接種:我國(guó)對(duì)暴露后接種的方案為：一般咬傷按5針?lè)庖撸?、3、7、14、28天各接種1針），嚴(yán)重咬傷者應(yīng)于第0、3天加倍量注射。疫苗應(yīng)在上臂三角肌肌內(nèi)注射，兒童應(yīng)在大腿前外側(cè)區(qū)肌內(nèi)注射，嚴(yán)禁臀部注射。

對(duì)于某些免疫低下和特殊人群應(yīng)在首針注射加倍或3倍劑量注射，如：注射疫苗前1個(gè)月內(nèi)注射過(guò)免疫球蛋白或抗血清；慢性病病人如肝硬化；先天性或獲得性免疫缺陷病病人；接受免疫抑制藥物（包括皮質(zhì)類(lèi)固醇和抗瘧疾藥物）病人；老年人；暴露后48小時(shí)更長(zhǎng)時(shí)間接種疫苗者；嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良者。由于狂犬病的潛伏期很長(zhǎng)，因此對(duì)暴露后已過(guò)數(shù)月者也應(yīng)與剛被暴露者一樣以相同方案接種疫苗。

關(guān)于禁忌證的問(wèn)題，專(zhuān)家認(rèn)為因?yàn)榭袢∈侵滤赖募膊?，?duì)高度危險(xiǎn)的暴露者由于某種原因而不給予全程治療的做法應(yīng)慎重考慮?；颊邔?duì)一種疫苗發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)可以改用另一種類(lèi)型的疫苗。只有在接種疫苗后出現(xiàn)無(wú)法控制的嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)時(shí)才能中斷疫苗接種。有嚴(yán)重變態(tài)反應(yīng)史的患者接種疫苗時(shí)應(yīng)備有腎上腺素。孕婦不應(yīng)作為狂犬病疫苗接種的禁忌證。對(duì)于一般患者必須給予全程足量的疫苗免疫[2]。

3.4狂犬人免疫球蛋白 狂犬人免疫球蛋白主要用于接觸狂犬病動(dòng)物對(duì)象的預(yù)防，被病犬2咬傷后立即按每公斤體重肌內(nèi)注射20IU狂犬人免疫球蛋白，若與狂犬疫苗聯(lián)合使用，效果更好。在預(yù)防狂犬病過(guò)程中，疫苗可作為重要補(bǔ)充，生效快，使用安全可靠，不會(huì)引起變態(tài)反應(yīng)[3]。

4動(dòng)物咬傷處理應(yīng)注意

4.1動(dòng)物咬傷，會(huì)造成狂犬病的傳染，可疑動(dòng)物、溫血?jiǎng)游?、野生?dòng)物、嚙齒動(dòng)物、貓、蝙蝠等，一定要接種疫苗。

4.2可疑動(dòng)物舔傷抓傷，傷口處理是預(yù)防狂犬病的關(guān)鍵，傷口處理愈早愈好。

4.3預(yù)防傷口較深、較寬可給予破傷風(fēng)疫苗，狂犬病疫苗、狂犬病等免疫球蛋白的預(yù)防。在經(jīng)濟(jì)條件的一定給予用抗狂犬病免疫血清或免疫球蛋白在傷口及周?chē)鹘?rùn)注解。

4.4健康教育：尤其是學(xué)校、幼兒園的小朋友，掌握狂犬病的常識(shí)，在被抓傷、舔傷后能及時(shí)告訴家長(zhǎng)得到及時(shí)處理，更好防病。

參考文獻(xiàn)

[1]蔡淑清.狂犬病.楊紹基主編.傳染病學(xué).2006.6.100

第5篇：動(dòng)物免疫的方法范文

一、指導(dǎo)思想

堅(jiān)持“預(yù)防為主、防控結(jié)合”的原則，深入科學(xué)發(fā)展觀(guān)統(tǒng)領(lǐng)防控工作全局，切實(shí)履行“村不漏戶(hù)、戶(hù)不漏畜、畜不漏針”的職責(zé)，以高致病性禽流感、口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病、雞新城疫、豬瘟等重大動(dòng)物疫病和狂犬病等人畜共患病為防控重點(diǎn)，統(tǒng)籌兼顧牛出敗等動(dòng)物疫病，以建立長(zhǎng)效機(jī)制為基礎(chǔ)，為提高防控能力為核心，以控制重大動(dòng)物疫病、保障公共衛(wèi)生為目標(biāo)，以建立完善的技術(shù)服務(wù)體系為依托，不斷提高預(yù)警、預(yù)報(bào)、預(yù)防控制和應(yīng)急處置能力。堅(jiān)持“加強(qiáng)領(lǐng)導(dǎo)、密切配合、依靠科學(xué)、依法防治，群防群控、果斷處置”的防控方針，確保我鎮(zhèn)全年無(wú)重大動(dòng)物疫情發(fā)生。

二、總體目標(biāo)

（一）免疫目標(biāo)。

2014年對(duì)高致病性禽流感、口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、雞新城疫五種強(qiáng)制免疫的總體要求是，群體免疫密度常年維持在90%以上，其中應(yīng)免疫畜禽免疫密度要達(dá)到100％，免疫抗體合格率全年達(dá)到70%以上。

（二）檔案的建立和保存。

在完成免疫工作基礎(chǔ)上，要以村委會(huì)為單位建立動(dòng)物免疫檔案，對(duì)豬全面實(shí)施佩戴二維碼標(biāo)識(shí)，牛羊佩戴免疫耳標(biāo)。農(nóng)村散養(yǎng)戶(hù)及養(yǎng)殖專(zhuān)業(yè)戶(hù)的免疫檔案由鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站建立保存。

（三）建立免疫示范村。

每個(gè)村委會(huì)至少建立2個(gè)以上免疫示范村。在免疫示范村范圍內(nèi)，強(qiáng)制免疫動(dòng)物的免疫率、豬二維碼標(biāo)識(shí)的佩帶率、免疫證的發(fā)證率和建檔率均達(dá)100%。非免疫示范村的豬二維碼標(biāo)識(shí)的佩帶率和動(dòng)物免疫的建檔率至少達(dá)90%以上。以后各村委會(huì)的免疫示范村以每年2個(gè)村以上的速度增加。

三、免疫原則及免疫程序

各種疫苗免疫接種劑量和方法按相關(guān)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)規(guī)定使用。

四、實(shí)施步驟

春季集中免疫時(shí)間短，接種的疫苗種類(lèi)多，技術(shù)要求高。各村要科學(xué)安排豬的高致病性豬藍(lán)耳病、口蹄疫和豬瘟等各種疫苗的接種時(shí)間，避免在短時(shí)間內(nèi)連續(xù)注射疫苗的現(xiàn)象。春季免疫分五個(gè)階段進(jìn)行：

（一）準(zhǔn)備動(dòng)員

3月初召開(kāi)春季動(dòng)物免疫工作部署會(huì)議，廣泛宣傳動(dòng)物免疫的重要性和必要性。做好疫苗組織、器械購(gòu)置、人員組織等準(zhǔn)備工作，抓緊時(shí)間安排做好春季免疫操作技術(shù)培訓(xùn)班。

（二）集中免疫階段

按上述的免疫原則和要求，3月10日至5月上旬，對(duì)所有的家禽和家畜開(kāi)展禽流感、口蹄疫、豬瘟、豬藍(lán)耳病、雞新城疫等重大動(dòng)物疫病集中免疫接種。并在規(guī)定的免疫時(shí)間后抽檢血清進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)。

（三）補(bǔ)漏復(fù)查階段

5月初，各村委會(huì)自行組織檢查驗(yàn)收，查漏補(bǔ)缺，補(bǔ)免補(bǔ)防，并進(jìn)一步完善免疫檔案。

（四）總結(jié)階段

5月30日前，春季動(dòng)物免疫工作全部結(jié)束，認(rèn)真做好春防的總結(jié)，檔案材料匯總和上報(bào)工作。

（五）迎檢階段

6月份，準(zhǔn)備迎接國(guó)家和省里的檢查，做好相關(guān)的材料準(zhǔn)備。

五、保障措施

（一）加強(qiáng)領(lǐng)導(dǎo)，明確責(zé)任

重大動(dòng)物疫病集中免疫工作是預(yù)防動(dòng)物疫病的重要環(huán)節(jié)，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)政府和有關(guān)單位要進(jìn)一步增強(qiáng)對(duì)免疫工作的責(zé)任感、使命感和緊迫感，充分認(rèn)識(shí)做好重大動(dòng)物疫病防控工作的重大意義，堅(jiān)決克服麻痹思想、厭戰(zhàn)情緒。一定要充分做好春防的準(zhǔn)備工作，做到措施更具體，目標(biāo)更明確，要求更嚴(yán)格。要相應(yīng)成立免疫領(lǐng)導(dǎo)小組、技術(shù)小組，制定免疫方案，組織召開(kāi)主要領(lǐng)導(dǎo)、村委會(huì)干部和村畜牧獸醫(yī)員參加的動(dòng)物免疫動(dòng)員大會(huì)，部署任務(wù)，分片包干，落實(shí)責(zé)任，扎扎實(shí)實(shí)地開(kāi)展動(dòng)物免疫工作，向社會(huì)宣傳動(dòng)物免疫的重要性和必要性，爭(zhēng)取全社會(huì)各界的支持。

（二）技術(shù)培訓(xùn)

技術(shù)培訓(xùn)采用縣、鎮(zhèn)二級(jí)培訓(xùn)機(jī)制。培訓(xùn)內(nèi)容包括免疫操作方法、疫苗的使用及注意事項(xiàng)、免疫效果監(jiān)測(cè)、疫苗的運(yùn)輸、儲(chǔ)存、免疫檔案的建立等內(nèi)容，采用理論和實(shí)際相結(jié)合的方式，注重培訓(xùn)內(nèi)容的針對(duì)性和實(shí)用性，以切實(shí)提高基層防疫隊(duì)伍業(yè)務(wù)素質(zhì)和工作能力。

（三）經(jīng)費(fèi)保障

鎮(zhèn)政府應(yīng)采取多種辦法和多種渠道，積極籌措疫苗費(fèi)用、耳標(biāo)鉗、免疫器具、消毒藥品、急救藥品、業(yè)務(wù)培訓(xùn)、冷鏈維修運(yùn)轉(zhuǎn)、村級(jí)防疫員補(bǔ)助等經(jīng)費(fèi)。

（四）疫苗組織及供應(yīng)

鎮(zhèn)政府必須加強(qiáng)強(qiáng)制免疫用疫苗管理，規(guī)范疫苗進(jìn)出庫(kù)制度。要按“高效、精確、節(jié)約”的原則使用疫苗，嚴(yán)格根據(jù)免疫進(jìn)度領(lǐng)取疫苗，杜絕浪費(fèi)現(xiàn)象的發(fā)生?？h畜牧獸醫(yī)局負(fù)責(zé)強(qiáng)制免疫用疫苗的組織和供應(yīng)工作。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)對(duì)疫苗儲(chǔ)存的冷鏈設(shè)備要進(jìn)行檢查和維修，確保疫苗安全存放，有效使用。特別是在集中免疫工作開(kāi)展前，要對(duì)村級(jí)防疫員使用的攜帶式冷藏箱的保溫性能進(jìn)行全面檢查，有問(wèn)題的應(yīng)及時(shí)修理或報(bào)廢，以保證疫苗質(zhì)量。

（五）免疫效果監(jiān)測(cè)

免疫效果監(jiān)測(cè)是檢查免疫接種成敗的重要手段，是制定補(bǔ)免計(jì)劃、免疫程序的基礎(chǔ)。實(shí)行常年監(jiān)測(cè)、集中監(jiān)測(cè)和隨機(jī)抽檢監(jiān)測(cè)相結(jié)合的機(jī)制，重點(diǎn)在集中免疫后根據(jù)免疫的進(jìn)度組織開(kāi)展免疫效果的監(jiān)測(cè)，并對(duì)其監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行匯總、評(píng)價(jià)，于5月30日前上報(bào)省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。要做好診斷試劑和相關(guān)用品的訂購(gòu)，以免貽誤監(jiān)測(cè)工作開(kāi)展?？h畜牧獸醫(yī)局將組織免疫抗體監(jiān)測(cè)組，不定期到各村委會(huì)和各飼養(yǎng)場(chǎng)，進(jìn)行抗體隨機(jī)檢測(cè)和效果評(píng)價(jià)，并以監(jiān)測(cè)結(jié)果做為評(píng)價(jià)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫效果的主要依據(jù)。

（六）檢查、督導(dǎo)、驗(yàn)收和總結(jié)

在免疫工作開(kāi)展后，鎮(zhèn)畜牧站要組織有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)及業(yè)務(wù)技術(shù)骨干，到各村委會(huì)、自然村檢查督促免疫工作，及時(shí)發(fā)現(xiàn)存在的問(wèn)題，進(jìn)行階段性總結(jié)和階段性匯報(bào)。免疫工作基本結(jié)束后，每個(gè)村委會(huì)應(yīng)進(jìn)行自我驗(yàn)收或由縣畜牧獸醫(yī)局組織抽查驗(yàn)收。

六、其他要求

（一）對(duì)調(diào)出縣境的非屠宰家禽和非屠宰家畜在調(diào)運(yùn)前2周分別進(jìn)行一次禽流感免疫和口蹄疫免疫。未按規(guī)定免疫的家禽家畜，防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)不得出具動(dòng)物檢疫合格證明（未滿(mǎn)2周齡的雛禽除外）。

（二）盡量減少免疫應(yīng)激反應(yīng)。修訂后的《動(dòng)物防疫法》規(guī)定，因依法實(shí)施強(qiáng)制免疫造成動(dòng)物應(yīng)激死亡的，給予補(bǔ)償，具體補(bǔ)償標(biāo)準(zhǔn)和辦法由國(guó)務(wù)院財(cái)政部門(mén)會(huì)同有關(guān)部門(mén)制定。發(fā)生不良反應(yīng)時(shí)，應(yīng)積極采取救治措施，避免飼養(yǎng)者的損失。同時(shí)耐心做好群眾的思想工作。

第6篇：動(dòng)物免疫的方法范文

關(guān)鍵詞：狂犬??；疫苗接種；傷口處置

【中圖分類(lèi)號(hào)】R529 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1674-7526(2012)04-0029-01

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象：我院2009年1月至2011年1月門(mén)診治療的1688例暴露后狂犬病傷口處置的患者作為研究對(duì)象，進(jìn)行研究。

1.2 研究?jī)?nèi)容：按照中國(guó)疾病預(yù)防控制中心《狂犬病暴露后預(yù)防處置操作指南》(2007)，對(duì)患者進(jìn)行正確的狂犬病預(yù)防處置操作[1],并登記患者的一般情況、傷口情況、動(dòng)物致傷的情況和疫苗注射的情況。

2 結(jié)果

2.1 一般特征:作為研究對(duì)象的1688例患者中，無(wú)一發(fā)生狂犬病免疫失敗的病例，也沒(méi)有發(fā)生狂犬病的患者。其中男性患者905例，占53.61%，女性患者783例，占46.39%?；颊咧心挲g最的10個(gè)月，被犬咬傷腳部；年齡最大85歲，被犬咬傷腳部；其中0-9的424例，占25.11%，10-19歲患者281例，占16.65%，20-29歲198例，占11.72%，30-39歲269例，占1594%，40-49歲187例，占11.07%，50-59歲168例，占995%，60歲以上的有161例，占9.54%。

2.2 動(dòng)物致傷情況:傷人的動(dòng)物有犬、貓、鼠、果子貍等，其中被貓所傷患者有335例，占19.85%；被犬所傷的有1298例，占76.90%；被果子貍傷者有2例，占0.01%；被鼠傷者34例，占2.01%；因切狗肉切傷手的患者19例，占1.13%。致傷動(dòng)物免疫情況：未經(jīng)免疫的動(dòng)物415例，占24.86%，免疫史不詳?shù)?273例，占75.14%。暴露程度的分級(jí)為：I度暴露402例，占2381%。Ⅱ度暴露812例，占48.10%。Ⅲ度暴露474例，占2809%，暴露的部位分別是：下肢856例，占50.71%，上肢740例，占43.84%，軀干部67例，占3.96%，混合傷（下肢和上肢，下肢和頭部，上肢和頭部）25例，占1.49%。

2.3 免疫處理情況:在被動(dòng)物咬傷的1688例患者中，最快在20分鐘內(nèi)進(jìn)行免疫處理，時(shí)間最長(zhǎng)的在受傷之后8年才來(lái)就診，24小時(shí)內(nèi)就診的有1390人，占82.34%，24-48小時(shí)就診的患者196人，占11.61%，3-10天就診的有65例，占390%，10天之后來(lái)就診的有37例，占2.19%。1688例被咬傷的患者到醫(yī)院進(jìn)行處理的1508例，占89.33%，沒(méi)有處理傷口的180例，占10.67%。全部1688例患者均注射人用狂犬病疫苗，均進(jìn)行注射使用人凍干狂犬疫苗，其中158人注射了人狂犬病免疫球蛋白及抗狂犬病血清，比例為9.36%。

2.4 討論:本次研究的1688例患者中，男性占53.61%，女性占46.39%，男性患者多于女性，可能由于男性活動(dòng)多，和動(dòng)物接觸的機(jī)會(huì)多，受到動(dòng)物的攻擊也多，0-9歲的患者受傷者最多，占25.11%，與該年齡段的孩子喜歡動(dòng)物，逗貓逗狗等，加以自身防御力差，且喜歡戶(hù)外活動(dòng)有關(guān)。因此，需要對(duì)0-9歲年齡段加強(qiáng)看管和教育，防止受傷。

傷人的動(dòng)物犬最多，占76.90%，其次是貓，占19.85%，其中大部分為流浪貓、狗。動(dòng)物致傷與現(xiàn)在人們生活水平的提高，飼養(yǎng)動(dòng)物的人數(shù)增多有關(guān)，越來(lái)越多的人飼養(yǎng)各種各樣的動(dòng)物，因而被傷害的幾率也大大增加；從動(dòng)物面積的情況看，未免疫的占24.86%，免疫史不詳?shù)恼?5.14%，由于目前養(yǎng)犬的數(shù)量上升，犬密度升高，但免疫率地，同時(shí)外觀(guān)健康的犬存在攜帶狂犬病毒的現(xiàn)象，因此相關(guān)部門(mén)應(yīng)提高對(duì)犬的管理及免疫接種，增加犬的免疫比例，減少狂犬病的發(fā)病幾率；受傷后不處理傷口或是處理不當(dāng)事狂犬病發(fā)病的重要原因之一，如果及時(shí)徹底的對(duì)傷口進(jìn)行清洗消毒可以明顯降低發(fā)病率。被動(dòng)物咬傷后24小時(shí)內(nèi)到醫(yī)院就診率達(dá)82.34%，這與近年來(lái)對(duì)加強(qiáng)對(duì)狂犬病的宣傳力度有關(guān)，但當(dāng)天及時(shí)就診率較低，說(shuō)明對(duì)狂犬病的防治知識(shí)還需提高，受傷者的自我保護(hù)意識(shí)不強(qiáng)，同時(shí)也提示了有關(guān)部門(mén)應(yīng)該繼續(xù)加強(qiáng)有關(guān)狂犬病的防治知識(shí)宣傳，普及被動(dòng)物咬傷之后處理傷口的正確方法，是今后工作的重點(diǎn)；1688例患者之中，Ⅲ度暴露474例，占28.09%，但進(jìn)行了抗狂犬病血清和人狂犬病免疫球蛋白注射的患者僅占9.36%，未達(dá)到《狂犬病暴露后預(yù)防處置操作指南》(2007)要求的29．73％，這與注射狂犬病免疫血清之前要做過(guò)敏試驗(yàn)、操作復(fù)雜有關(guān)[2]。而狂 犬病免疫球蛋白價(jià)格偏高，患者的經(jīng)濟(jì)承受能力有就診限，限制了其使用量[3]。所以，加強(qiáng)對(duì)群眾進(jìn)行狂犬病防治的知識(shí)，尤其是動(dòng)物致傷后的治療知識(shí)尤為重要，能夠顯著增加暴露后迅速就診率，暴露后在短時(shí)間內(nèi)到具有高醫(yī)療水平的機(jī)構(gòu)進(jìn)行狂犬病免疫處置。

此次調(diào)查的1688例患者均主動(dòng)進(jìn)行狂犬病暴露部位的處置，沒(méi)有出現(xiàn)狂犬病發(fā)病，與暴露后及時(shí)按要求對(duì)傷口進(jìn)行處理、接種疫苗與注射人狂犬病免疫球蛋白及抗狂犬病血清存在一定的相關(guān)性.所以，加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物的免疫管理，被咬傷后傷口的處理，疫苗的正確使用，加強(qiáng)對(duì)兒童、學(xué)生及戶(hù)外活動(dòng)多的男性等易被犬等動(dòng)物襲擊的人群狂犬病防治知識(shí)的宣傳力度，是預(yù)防及控制狂犬病發(fā)病率的良好途徑。

參考文獻(xiàn)

第7篇：動(dòng)物免疫的方法范文

[關(guān)鍵詞] 重大動(dòng)物疫病 過(guò)敏死亡 免疫

[中圖分類(lèi)號(hào)] S852.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1003-1650（2013）03-0187-01

免疫接種是預(yù)防、控制動(dòng)物疫病的有效措施。近年來(lái)，我縣按照各種動(dòng)物疫病免疫方案的要求，對(duì)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)采取程序化免疫，散養(yǎng)戶(hù)采取春、秋集中免疫，常年補(bǔ)針相結(jié)合的免疫方法，基本做到了應(yīng)免盡免。但在實(shí)際工作中，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)動(dòng)物免疫過(guò)敏甚至死亡的事例。據(jù)統(tǒng)計(jì)，發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)的過(guò)敏率大約在0，003%左右，致使防疫工作一度陷入畜主怕、防疫員難的困境，給防疫工作帶來(lái)一定的影響。針對(duì)這個(gè)問(wèn)題，近年來(lái)，本人先后與全縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的30多名防疫員進(jìn)行了廣泛的交流，分析其原因，提出以下應(yīng)對(duì)措施和建議：

一、原因分析

1.疫苗運(yùn)輸、保存不當(dāng)

疫苗運(yùn)輸不規(guī)范，少數(shù)鄉(xiāng)、村防疫人員在貯存疫苗時(shí)沒(méi)有達(dá)到要求的溫度范圍，有的甚至未使用疫苗冷藏箱，疫苗取出后在免疫前受到陽(yáng)光照射或在常溫下放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等，從而影響疫苗的效價(jià)甚至過(guò)期失效。

2.防疫時(shí)消毒不嚴(yán)

個(gè)別鄉(xiāng)、村防疫人員不按操作規(guī)程辦事，為了省工省錢(qián)，舍不得用酒精棉球，未做到“一畜一針，一針一棉”的要求，一針打到底，有時(shí)根本不消毒，很可能誘發(fā)疫病甚至導(dǎo)致死亡。

3.防疫員責(zé)任心不強(qiáng)、操作不當(dāng)

疫苗劑量沒(méi)有嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)執(zhí)行，超量或減量注射，注射部位不準(zhǔn)，時(shí)深時(shí)淺；有時(shí)打飛針，形成錯(cuò)位注射或劑量不夠。

4.未按規(guī)定程序接種

按規(guī)定程序重復(fù)接種，是強(qiáng)化免疫應(yīng)答，鞏固免疫效果的有效方法。個(gè)別養(yǎng)殖場(chǎng)有時(shí)對(duì)防疫工作不夠重視，對(duì)免疫程序不懂，對(duì)某些疫苗的保護(hù)期限不知，認(rèn)為接種某一種疫苗就萬(wàn)事大吉，不強(qiáng)化免疫，結(jié)果免疫抗體達(dá)不到應(yīng)有的效果而發(fā)病。

5.免疫注射后未進(jìn)行觀(guān)察，出現(xiàn)過(guò)敏癥狀后未及時(shí)搶救

個(gè)別鄉(xiāng)、村防疫人員粗心大意，免疫注射后不給畜主說(shuō)明情況，讓其觀(guān)察動(dòng)物的反應(yīng)，或者動(dòng)物過(guò)敏反應(yīng)后未及時(shí)搶救，延誤有效搶救時(shí)機(jī)導(dǎo)致死亡。

二、主要對(duì)策

1.把好疫苗運(yùn)輸與貯存關(guān)

1.1嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)貯存運(yùn)輸疫苗，做到防高溫、防暴曬，防疫時(shí)將疫苗裝入盛有冰袋的冷藏箱內(nèi)，避免高溫和陽(yáng)光直射。分類(lèi)保存疫苗，一般凍干苗-10～15℃，滅活苗2～8℃保存。

1.2防疫員把好注射前消毒關(guān)。按照“一畜一針，一針一棉”的要求，搞好免疫時(shí)的消毒，禁止一針多畜不按規(guī)定消毒。

1.3防疫員把好注射劑量關(guān)。按照不同畜種、年齡、體重等按規(guī)定劑量進(jìn)行接種，杜絕超量或減量注射，疫苗啟封后要按12小時(shí)內(nèi)使用，不得隔日再用。

1.4把好接種部位關(guān)。嚴(yán)格按照疫苗種類(lèi)規(guī)定的注射部位注射，不得錯(cuò)位注射，禁止打飛針和不按規(guī)定的部位、深度注射。

1.5防疫員把好過(guò)敏搶救關(guān)。對(duì)個(gè)別家畜免疫注射后出現(xiàn)氣喘、呼吸加快、發(fā)抖等過(guò)敏反應(yīng)，盡快使用腎上腺素、地塞米松等抗過(guò)敏藥物搶救。

各鄉(xiāng)鎮(zhèn)要認(rèn)真貫徹落實(shí)國(guó)務(wù)院關(guān)于“地方各級(jí)政府對(duì)防疫工作負(fù)總責(zé)，政府主要領(lǐng)導(dǎo)是第一責(zé)任人，分管領(lǐng)導(dǎo)是主要負(fù)責(zé)人”的防疫工作責(zé)任制，提高認(rèn)識(shí)，組織協(xié)調(diào)各相關(guān)部門(mén)做好秋防的各項(xiàng)工作。要督促落實(shí)防疫所需器械、疫苗、監(jiān)測(cè)、過(guò)敏反應(yīng)死亡和撲殺補(bǔ)貼等各項(xiàng)防控工作經(jīng)費(fèi)。要逐級(jí)落實(shí)工作責(zé)任，認(rèn)真執(zhí)行重大動(dòng)物疫情舉報(bào)核查、免疫效果監(jiān)測(cè)、免疫檔案管理等重大動(dòng)物疫病防控工作管理制度，做到重大動(dòng)物疫病防控工作科學(xué)化、規(guī)范化、制度化。要及時(shí)組織開(kāi)展秋防督察，查找工作中存在的問(wèn)題并及時(shí)予以解決，總結(jié)工作中積累的好的經(jīng)驗(yàn)及時(shí)予以推廣，保證各項(xiàng)免疫措施能夠落到實(shí)處，防疫工作能夠扎實(shí)有效開(kāi)展。要充分認(rèn)識(shí)秋防工作的重要性和緊迫感，切不可麻痹大意，決不能掉以輕心，要精心組織，全面做好華亭縣重大動(dòng)物疫病集中免疫工作，落實(shí)責(zé)任，強(qiáng)化督查，全面做好免疫工作。

參考文獻(xiàn)

[1]王雪玲，原林，劉鐵龍.動(dòng)物疫病免疫失敗的原因及主要對(duì)策[J].河南畜牧獸醫(yī)，綜合版.2012年，第9期3頁(yè)33-35頁(yè)；

第8篇：動(dòng)物免疫的方法范文

一、提高養(yǎng)殖技術(shù)，提升養(yǎng)殖環(huán)境是做好動(dòng)物防疫工作的基礎(chǔ)條件

科學(xué)證明，不同的養(yǎng)殖環(huán)境、養(yǎng)殖方式和管理程序，不僅對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)起決定性作用，而且對(duì)動(dòng)物的抗病能力會(huì)產(chǎn)生不同的影響，更重要的是密切關(guān)系到動(dòng)物疫病的發(fā)生與傳播。如當(dāng)今畜禽實(shí)行高密度飼養(yǎng)，大大提高了飼養(yǎng)效率和經(jīng)濟(jì)效益，促進(jìn)了畜牧業(yè)的高速發(fā)展；但是也帶來(lái)了另一方面問(wèn)題，在這種飼養(yǎng)方式條件下，動(dòng)物的抗病能力顯著下降，疫病傳播和發(fā)生的機(jī)會(huì)大大增加。所以提高養(yǎng)殖技術(shù)，提升養(yǎng)殖環(huán)境對(duì)做好動(dòng)物防疫工作意義重大。

1.堅(jiān)持規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化的生產(chǎn)方式，不斷提高生豬養(yǎng)殖的生產(chǎn)水平

適度規(guī)模的飼養(yǎng)，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)操作可以使品質(zhì)提高、成本下降、生產(chǎn)率提升。

2.建立和執(zhí)行與動(dòng)物防疫要求相適應(yīng)的畜牧業(yè)生產(chǎn)管理制度

從生產(chǎn)管理角度，動(dòng)物防疫技術(shù)和畜牧業(yè)生產(chǎn)相結(jié)合，要通過(guò)形成生產(chǎn)制度，把動(dòng)物防疫要求溶入到畜牧業(yè)生產(chǎn)的各個(gè)階段。

3.堅(jiān)持科技創(chuàng)新，有效提高新技術(shù)應(yīng)用的能力，提升養(yǎng)殖業(yè)科技水平

科技進(jìn)步是養(yǎng)發(fā)展的根本動(dòng)力，在養(yǎng)殖發(fā)展過(guò)程中，不僅要發(fā)揮了自身已有的科技優(yōu)勢(shì)，更是把科技創(chuàng)新作為重要指導(dǎo)方針貫徹始終。積極引進(jìn)國(guó)內(nèi)外先進(jìn)技術(shù)和生產(chǎn)設(shè)備，將其推廣應(yīng)用到生豬生產(chǎn)中，積極探索發(fā)酵床養(yǎng)殖、高床飼養(yǎng)、人工授精、早期斷奶、育種改良、飼料配方、生物能利用等新型養(yǎng)殖技術(shù)，有效解決養(yǎng)殖技術(shù)瓶頸，提升生豬養(yǎng)殖的科技水平。

二、隔離消毒是做好動(dòng)物防疫工作的重要環(huán)節(jié)

動(dòng)物疫病傳播有三個(gè)環(huán)節(jié)：傳染源、傳播途徑、易感動(dòng)物。在動(dòng)物防疫工作中，只要切斷其中一個(gè)環(huán)節(jié)，動(dòng)物傳染病就失去了傳播的條件，就可以避免某些傳染病在一定范圍內(nèi)發(fā)生，甚至可以撲滅疫情、最終消滅傳染病。但對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)來(lái)說(shuō)，不能只注重通過(guò)免疫手段保護(hù)易感動(dòng)物這個(gè)層次，只有同時(shí)做好消毒隔離工作，消滅傳染源切斷傳播途徑，才是防止重大動(dòng)物疫情發(fā)生的最關(guān)鍵措施。

1.建立人員，物品隔離制度

生產(chǎn)區(qū)內(nèi)禁止非本場(chǎng)生產(chǎn)、管理人員出人；外來(lái)人員出人需經(jīng)獸醫(yī)批準(zhǔn)，進(jìn)人生產(chǎn)區(qū)人員必須換鞋、更衣、洗手、紫外線(xiàn)消毒。凡生產(chǎn)區(qū)內(nèi)的工具、物品、固定使用，不得隨便帶離場(chǎng)外使用。必須進(jìn)人生產(chǎn)區(qū)的車(chē)輛、物品應(yīng)視種類(lèi)不同作必要的消毒處理方可進(jìn)入。嚴(yán)禁將活畜禽、生肉類(lèi)帶人場(chǎng)內(nèi)，已出場(chǎng)動(dòng)物及產(chǎn)品嚴(yán)禁返回生產(chǎn)區(qū)。引人種用動(dòng)物或商品動(dòng)物，必須隔離飼養(yǎng)一個(gè)月后，確認(rèn)健康才能進(jìn)人生產(chǎn)區(qū)。

2.各飼養(yǎng)場(chǎng)應(yīng)根據(jù)自身的生產(chǎn)方式、主要存在的疫病、消毒劑和消毒設(shè)備設(shè)施的種類(lèi)等因素因地制宜地制定消毒程序。飼養(yǎng)舍應(yīng)每天進(jìn)行打掃、清洗、保持舍內(nèi)整潔、干燥，并經(jīng)常性進(jìn)行滅鼠和滅蠅、滅蚊工作，同時(shí)應(yīng)搞好場(chǎng)內(nèi)綠化。病死動(dòng)物應(yīng)深埋或高溫處理，病死動(dòng)物的糞便實(shí)行封閉性堆積發(fā)酵。

三、免疫預(yù)防是動(dòng)物防疫工作的重中之重

在一定的范圍內(nèi)，只要消除了某種病原的易感動(dòng)物，就能防止這種病原引起的動(dòng)物疫病。消除易感動(dòng)物的方法，除了加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高動(dòng)物本身的體質(zhì)外，按照免疫程序給動(dòng)物普遍接種相應(yīng)的疫苗，是最重要、最有效的辦法。

1.具體給當(dāng)?shù)貏?dòng)物接種幾種疫苗，除了國(guó)家要求強(qiáng)制免疫的，可根據(jù)當(dāng)?shù)匕l(fā)生動(dòng)物疫病的種類(lèi)、發(fā)展趨勢(shì)和周?chē)鷦?dòng)物疫病流行態(tài)勢(shì)來(lái)確定。免疫過(guò)程中，要注意疫苗的質(zhì)量、免疫操作的規(guī)范性。

2.注重做好免疫監(jiān)測(cè)工作，免疫監(jiān)測(cè)利用血清中抗體水平動(dòng)態(tài)和消長(zhǎng)規(guī)律，可優(yōu)先選擇疫苗，并可對(duì)多種疫苗進(jìn)行合理制定免疫程序，避免不同種疫苗相互干擾，達(dá)到全面免疫。

四、疫病控制是防止疫病擴(kuò)散的重要手段

隨著形勢(shì)的發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)中散戶(hù)逐漸淡出，規(guī)?；?、集約化養(yǎng)殖逐漸占領(lǐng)市場(chǎng)。動(dòng)物發(fā)病概率加大，疫病發(fā)生在所難免，針對(duì)畜禽各類(lèi)疫病的出現(xiàn)，要做到“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早診斷和早處置”。

1.出現(xiàn)疾病先兆應(yīng)及時(shí)發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物發(fā)病都有先兆，任何病都有潛伏期，僅是潛伏期長(zhǎng)短而已，一旦發(fā)現(xiàn)動(dòng)物疫病或疑似傳染病時(shí)，必須立即向當(dāng)?shù)孬F醫(yī)行政主管部門(mén)報(bào)告。

2.對(duì)發(fā)病畜禽及早診斷，疫情診斷一般要符合三個(gè)指標(biāo)：臨床指標(biāo)、病理指標(biāo)、病原學(xué)指標(biāo)。而是在診斷發(fā)病原因的基礎(chǔ)上，有目的、有針對(duì)性地用藥，這樣才能起到事半功倍的效果，避免無(wú)目的地濫用藥物。

第9篇：動(dòng)物免疫的方法范文

【摘要】 目的 觀(guān)察 FTS提高正常動(dòng)物、荷瘤動(dòng)物及免疫缺陷型動(dòng)物自然殺傷性細(xì)胞（NK）活性的作用。方法 用正常動(dòng)物、荷瘤動(dòng)物及免疫缺陷型動(dòng)物模型皮下注射不同劑量的FTS后，取其脾NK細(xì)胞測(cè)定其對(duì)靶細(xì)胞（L929）的殺傷能力。結(jié)果 FTS 2.5mg/kg、1.25mg/kg能夠顯著地增加正常小鼠及免疫力低下模型小鼠的NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷能力（P

【關(guān)鍵詞】 血清胸腺因子；NK；L929；抗腫瘤

【Abstract】 Objective Observation the FTS to enhance the normal animal， the Dutch lump animal and the immunodeficiency animal nature killing germ cell （NK） active function.Methods After the normal animal， the Dutch lump animal and immunodeficiency animal model hypodermic injection different dosage of FTS， take its the spleen NK cell to determine it to the target cell （L929） kill capability.Results FTS 2.5mg/kg，1.25mg/kg can obviously increase the normal mouse and the immunity low model mouse’s NK cell to the target cell kill capability （p< 0.01）.Conclusion FTS can enhance the NK cell activeness， has function which the anti-tumor and the immunity strengthen.

【Key words】 FTS;NK;L929;anti-tumor

血清胸腺因子（thymulin，F(xiàn)TS）是胸腺組織中由9個(gè)氨基酸殘基組成的小分子肽，是一類(lèi)具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的多肽［1］，自然殺傷細(xì)胞（NK）具有抗腫瘤、抗感染和免疫調(diào)節(jié)功能［2］，是抗腫瘤的免疫監(jiān)視作用中的第一道防線(xiàn)［3］，因此，NK活性的提高對(duì)于機(jī)體的抗腫瘤能力的提高是有很積極作用的，本文通過(guò)研究FTS對(duì)不同模型動(dòng)物NK細(xì)胞活力的影響，了解FTS的免疫調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 血清胸腺因子（批號(hào)060821，由深圳市翰宇生物工程有限公司提供），其純度為>96%，凍干粉末，冷凍保存，臨用前取FTS 1mg，加1ml消毒生理鹽水稀釋為1mg/ml的原液，供皮下注射用。陽(yáng)性對(duì)照藥為胸腺肽，凍干粉末，20mg/支（黑龍江迪龍藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)20061001）；環(huán)磷酰胺，針劑，10mg/10ml（山西普德藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)20060203）；0.1%中性紅染液；細(xì)胞溶解液（50%醋酸+50%乙醇）；0.25%胰酶；RPMI-1640培養(yǎng)液。

1.2 瘤株 小鼠H22，取接種于小鼠的腹腔第7天的瘤株，配成106/ml瘤細(xì)胞懸液，接種于小鼠前肢腋窩皮下0.2ml/鼠。

1.3 靶細(xì)胞（L929） 實(shí)驗(yàn)前一天換液，用0.25%胰酶消化后，用含10%小牛血清的RPMI-1640稀釋成1×105/ml。

1.4 動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)用體重18～20g的SPF級(jí)雄性昆明小鼠，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK京（2005-2006），均由中國(guó)藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼養(yǎng)觀(guān)察2天后使用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室為無(wú)菌空氣二級(jí)過(guò)濾，人工日光燈12h自動(dòng)照明，恒溫、恒濕送風(fēng)，溫度22～24℃，相對(duì)濕度40%～45％。鼠籠具為塑料盒，不銹鋼絲蓋。

1.5 免疫缺陷型動(dòng)物模型 用18～20g的昆明小鼠稱(chēng)重后皮下注射環(huán)磷酰胺，劑量為80mg/kg，給藥體積0.1ml/10g，5天后稱(chēng)重，將體重降低的小鼠隨機(jī)分組用于實(shí)驗(yàn)。

1.6 劑量設(shè)置 根據(jù)藥效曲線(xiàn)結(jié)果設(shè)置劑量為高、中、低三個(gè)劑量組，小鼠給藥劑量2.5、1.25、0.63mg/kg，給藥體積為0.1ml/10g。陽(yáng)性對(duì)照藥胸腺肽，臨用前配成13mg/ml，小鼠皮下0.1ml/10g，劑量為130mg/kg。空白對(duì)照用NS，藥液臨用時(shí)根據(jù)動(dòng)物個(gè)體體重調(diào)整給藥體積。

1.7 給藥方法 分別取接種H22瘤株24h后的昆明小鼠，健康動(dòng)物及免疫缺陷型動(dòng)物各50只，均分為5組，分別按高、中、低3個(gè)劑量注射FTS，對(duì)照組注射N(xiāo)S，用胸腺肽做陽(yáng)性對(duì)照，均皮下注射給藥，每天給藥1次，共給藥14天。

1.8 小鼠脾NK細(xì)胞的制備 將給藥后的小鼠斷頸放血，取脾置于無(wú)血清RPMI-1640培養(yǎng)液中去雜質(zhì)，研磨成單個(gè)細(xì)胞后用100目篩及200目篩過(guò)濾，將濾液1000rpm，5min離心，去上清，除紅細(xì)胞后，用無(wú)血清RPMI-1640培養(yǎng)液洗1次，最終用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液配成0.5×107/ml。

1.9 檢測(cè)指標(biāo) 用酶標(biāo)儀在490nm測(cè)定各組的OD值，殺傷率%=靶細(xì)胞OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值/靶細(xì)胞OD值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較用t檢驗(yàn)。

2 方法與結(jié)果

將L929細(xì)胞加入96孔板，100μl/孔，37℃，5% CO2培養(yǎng)4h，使其貼壁，然后實(shí)驗(yàn)孔每孔加入100μl脾NK細(xì)胞，對(duì)照孔加入無(wú)血清RPMI-1640培養(yǎng)液100μl，37℃，5% CO2培養(yǎng)24h，取出，棄上清，用NS洗3次，濾紙吸干。加入中性紅100μl/孔，37 ℃， 30min，棄上清，用NS洗3次，加入細(xì)胞裂解液100μl/孔，混勻后，用490nm測(cè)各孔的OD值。

2.1 FTS對(duì)正常小鼠NK細(xì)胞活性的影響 制備實(shí)驗(yàn)到期的正常小鼠的脾NK細(xì)胞，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。表1 FTS對(duì)正常小鼠NK細(xì)胞活性（略）注：與對(duì)照組比較，*P

由表1可見(jiàn)，與NS組比較，F(xiàn)TS 2.5mg/ml可以極顯著地增強(qiáng)正常小鼠NK細(xì)胞的活性，而胸腺肽沒(méi)有顯著的增強(qiáng)作用。

2.2 FTS對(duì)免疫缺陷型小鼠NK細(xì)胞活性的影響 制備實(shí)驗(yàn)到期的免疫缺陷型小鼠的脾NK細(xì)胞，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。表2 FTS對(duì)免疫缺陷型小鼠NK細(xì)胞活性的影響 （略）注：與對(duì)照組比較，**P

由表2可見(jiàn)，與NS組比較，F(xiàn)TS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以極顯著地增強(qiáng)免疫缺陷型小鼠NK細(xì)胞的活性，而胸腺肽的增強(qiáng)作用較弱，與對(duì)照組比差異無(wú)顯著性。

2.3 FTS對(duì)荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性的影響 制備實(shí)驗(yàn)到期的H22荷瘤小鼠的脾NK細(xì)胞，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。表3 FTS對(duì)荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性的影響 （略）注：與對(duì)照組比較，**P

由表3可見(jiàn)，F(xiàn)TS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以對(duì)荷瘤小鼠NK細(xì)胞的活性表現(xiàn)出極顯著的增強(qiáng)作用，而胸腺肽沒(méi)有顯著的增強(qiáng)作用。3 結(jié)論

由實(shí)驗(yàn)1～3可知，F(xiàn)TS各劑量間呈現(xiàn)量效關(guān)系，高、中劑量組可以顯著地增強(qiáng)免疫缺陷型小鼠、荷瘤小鼠及正常小鼠NK細(xì)胞的殺傷能力（P

【參考文獻(xiàn)】

1 JF Bach， M Dardenne， JM Pleau. Biochemical characterization of a serum thymic factor.Nature， 1977， 266（3）:55-56.

2 P Merlino， JA Marsh. Evidence for the direct action of thymulin on avian NK cells. Develop Comp Immunol，2001，25:337-343.

3 P Merlino， JA Marsh. Evidence for the direct action of thymulin on avian NK cells. Develop Comp Immunol， 2001， 25:337-343.

4 左增艷，柳鐘勛.新型生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、當(dāng)歸多糖（ASDP）抗腫瘤作用及對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2000，16（10）:545-546.