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關鍵詞:自身抗體;自身免疫性疾病;實踐帶教
自身抗體是指針對自身組織、器官、細胞及細胞成分的抗體,可以是生理性的,也可以是病理性的。正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體,可能參與衰老細胞或凋亡細胞以及自身免疫復合物的清除。病理性自身抗體與自身免疫性疾病關系密切,如果自身抗體的滴度超過某一水平,就可能對身體產生損傷,從而誘發疾病[1]。抗核抗體(ANA)是抗各種核成分的抗體的總稱,是一種廣泛存在的自身抗體,以真核細胞成分作為靶抗原,主要存在于血清中,也可存在于滑膜液、胸腔積液和尿液等其他體液中[2-3]。自身抗體的檢測在自身免疫性疾病(AID)的診斷、病程活動程度預測、療效觀察、指導臨床用藥等各方面具有重要的臨床價值[3]。自身抗體檢測作為免疫學檢驗中的重要分支,雖然實習生在臨床免疫學檢驗理論教學中已有學習,但教材中相關部分內容涉及不深,特別是抗核抗體熒光核型判讀及在自身免疫性疾病中的臨床應用等較為復雜,最終導致大量實習生對該部分內容無法熟練掌握及實踐操作相對較少[4]。現針對此現象,結合筆者在臨床免疫學檢驗多年帶教中的體會,在自身抗體檢測實踐帶教中形成了自己獨有的一套思路和方法。從強化實習生自身抗體檢測相關理論知識以及加強理論聯系實踐技能的系統培訓、加強實驗室檢查結果與臨床案例綜合分析、加強自身抗體檢測實驗室質量控制培訓以及注重前沿知識的講授等方面,讓實習生的理論與實踐有機結合起來,提高他們自身免疫性疾病檢驗專業知識,以更好地為臨床服務[5]。現將實踐教學體會和需要重視的問題總結如下。
1加強自身抗體檢測的理論學習
在臨床檢驗相關學科中,免疫學檢驗的理論與實踐聯系最為緊密,較好掌握免疫檢驗理論知識是學好免疫學的重要前提[5]。自身抗體檢測作為免疫學檢驗的重點、難點,要求實習生有一定的理論基礎。在實習期間,多數實習生是按照帶教教師的指導進行操作,他們并未真正掌握相關實驗原理及實驗目的,所謂知其然而不知其所以然[6]。所以在實驗開始之前,帶教教師應對實習生進行自身抗體檢測總體概述及檢測方法介紹,并對目前主流的間接免疫熒光法、免疫印跡法、酶聯免疫吸附試驗法、化學發光法等的實驗原理、實驗目的以及實驗操作注意事項等進行系統培訓[1]。經過自身抗體檢測前期培訓后,帶教教師有必要每周或每兩周安排至少一次有目的、有計劃的自身抗體檢測相關理論課,便于實習生對自身抗體檢測理論知識的學習和梳理,也為接下來的實踐操作打下堅實的理論基礎[7]。
2加強自身抗體檢測相關技能的提升
2.1自身抗體檢測操作技能提升
實習帶教期間,培養實習生理論與實踐相結合,在實際工作中加強其操作技能、分析和解決問題的綜合能力至關重要[8]。免疫學檢驗本身就是理論和實踐性很強的一門學科,然而實習生在校期間主要是理論學習,實踐相對較少,從而導致實習生的實踐操作能力相對較差。因此,在帶教過程中帶教教師要盡可能多給實習生動手操作機會,讓其充分發揮自己的主觀能動性[8]。帶教期間教師在旁監督,時刻要求實習生按照檢測項目以及儀器的操作標準來執行,確保實驗結果的準確性以及培養實習生規范的操作手法[5]。
2.2自身抗體檢測閱片技能提升
自身抗體的檢測方法主要有間接免疫熒光法、酶聯免疫吸附試驗法、免疫印跡法、化學發光法等[1]。其中,自身抗體熒光形態學內容相對復雜,既是教學重點也是難點,要求實習生多加練習。要求實習生厘清免疫熒光檢測原理,掌握熒光模型各時期形態[9-10]。日常工作中,帶教教師可收集自身抗體相關的熒光圖譜,定期對實習生進行自身抗體熒光形態學培訓和考核,對每次易錯內容進行原因分析,通過將理論聯系實踐,結合實際,不斷積累經驗,讓實習生對常見的自身免疫性疾病特定的熒光核型有個初步認識,養成良好的閱片習慣,以便他們今后走上工作崗位具備一定的基礎[4]。
3加強臨床案例與實驗室檢查結果的綜合分析
3.1案例式教學的意義
在臨床免疫學教學中,帶教教師可結合臨床案例開展教學,這種案例式教學通過將真實的臨床案例貫穿于教學中,激發了實習生對學習的熱情。實習生不僅可以積極討論,還可以鞏固所學免疫學知識,在一定程度上提高了實習生理論與實踐相結合的能力[11]。
3.2典型案例分享
平時帶教教師可收集經典的關于AID的臨床案例,包括系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、自身免疫性肝病、干燥綜合征等。帶教教師可將案例對實習生分享。通過真實、直觀的典型案例,不僅可以提高帶教效果,還易于實習生理解記憶,從而培養他們運用臨床思維解決工作中遇到的實際問題的綜合分析能力等[5]。
4加強自身抗體檢測方面的質量控制培訓
4.1構建實驗室質量控制體系
實驗室的質量控制體系是確保自身抗體檢測時能排除其影響因素的存在而得到準確的檢測結果,確保實驗室內質量控制滿足臨床報告發放的要求[7]。檢驗結果的真實準確性直接關系到臨床的診斷及治療,與患者的生命息息相關。為保證實驗室質量控制效果,必須對實習生進行全面質量控制培訓。
4.2掌握自身抗體檢測質量控制要點
目前國內自身抗體檢測在AID臨床應用中已普遍開展,但自身抗體檢測自動化程度相對較低,各個單位采用的檢測儀器不同、試劑不同,結果沒有可比性,導致檢驗人員對檢測結果缺乏準確把握,因此掌握自身抗體檢測質量控制要點至關重要。自身抗體檢測質量控制要點包括分析前(例如:項目編號、運輸、接收離心預處理等)、分析中(例如:實驗操作、主觀判斷等)和分析后(例如:結果判斷、檢驗報告書寫、失控原因分析等)[12],這三部分質量控制做不好都會導致出現錯誤的結果,從而影響檢測數據的真實性。
4.3提高實習生質量控制意識
檢驗實習生對質量控制意識不強,帶教教師應讓實習生學習并掌握自身抗體檢測質量控制理念和方法,嚴格按照實驗室SOP文件操作,控制自身抗體檢測的檢測條件和過程[5]。相關質量負責人必須加強對實習生自身抗體檢測質量控制培訓,培養實習生從一開始實習就意識到質量控制在檢驗科工作中的重要性[12]。
5加強檢驗醫師和臨床醫師的溝通
免疫學檢驗與臨床緊密結合。日常工作中檢驗醫師與臨床醫師要相互交流學習,特別當遇到疑難案例時。如發現某種自身抗體檢測實驗室結果與臨床情況不符時,臨床醫生和檢驗醫生應對患者的臨床癥狀及實驗室相關檢測結果進行充分交流溝通,必要時會診,需要結合患者臨床癥狀、病史、性別、年齡及其他實驗室指標等進行綜合評價,探討患者下一步更好的治療方案[10-13]。此外,在臨床免疫學檢驗專業教師與風濕免疫科醫師進行臨床案例溝通時,應盡可能使實習生參與進來,進一步培養實習生自身抗體檢測結果在臨床自身免疫性疾病診斷中的應用分析能力等,讓實習生知道,檢驗與臨床息息相關以及與臨床溝通的重要性。
6注重前沿知識的講授
俗話說:“授人以魚,不如授人以漁。”帶教教師可通過前沿知識的講授,教會實習生如何獲取專業相關最新知識并運用這些新知識來解決工作中遇到的疑難問題[8]。帶教期間定期為實習生舉辦專題講座至關重要,如自身抗體及自身免疫性疾病(AID)檢測及研究新進展等。帶教教師可向實習生介紹最新文獻及相關專家共識,但自身免疫性疾病(AID)研究內容復雜,實習生理解困難,帶教教師在講課時,要采用合適的教學策略及方法,準確把握教學的重點及難點,循序漸進,由淺入深,方便實習生理解掌握。帶教教師可在每次課后布置相應作業或安排某實習生下次上臺講課,使教師和實習生進行角色互換,讓實習生自己查閱相關書籍或文獻完成作業,這樣不僅可以讓實習生養成主動學習、獨立分析問題的好習慣,還可以不斷提升其專業水平以及激發他們在今后的工作學習中時刻保持積極向上的實踐動力[5-6]。
7加強本科生畢業論文帶教
根據醫學檢驗專業的學科特點、課程性質和學生素質培養要求,將醫學檢驗專業的所有課程劃分為六大類課程群:通識課程、專業基礎課程、臨床醫學課程、專業課程、選修課程和實訓課程。通識課程包括高教部規定的所有基本課程。專業基礎課程又稱基礎醫學課。是醫學檢驗專業的主干學科,包括無機化學、有機化學、分析化學、正常人體解剖學、組織胚胎學、生理學、生物化學、醫學分子生物學、病理學、病理生理學、醫學統計學等。臨床醫學課是醫學檢驗專業的主要學科,它包括內科學、外科學、婦科學、兒科學、診斷學。專業課是醫學檢驗專業的主干學科,包括臨床基礎檢驗、衛生檢驗概論、臨床生化檢驗、分子診斷學、臨床檢驗儀器學、臨床微生物學檢驗、臨床寄生蟲學檢驗、臨床血液學檢驗、臨床免疫學檢驗、臨床輸血學等。選修課程,除了學校目前已經存在的公共選修課和醫藥類選修課以外,還建議開設醫學文獻檢索、治療藥物監測、專業外語、醫學科研設計、細胞病理學檢驗、床旁檢測、實驗室信息系統、試劑盒研發、實驗動物學、檢驗核醫學等選修課,從而拓展學生的專業素質、突出檢驗專業的特色,同時還要嚴格要求專業選修課的最低學分。實訓課程即實習課,應統計出學分,包括軍事訓練、社會實踐、臨床見習、畢業實習、畢業論文(設計)等。
2課程設置
2.1課程的調整與整合
將生理學、病理學、病生學的實驗等基礎醫學實驗課程整合成《機能學實驗》;將無機化學、有機化學和分析化學實驗整合為《醫用化學綜合實驗》;將內、外、婦、兒等臨床課程整合成《臨床醫學概要》。這樣既減輕了繁重的教學任務,也減輕了學生的學習負擔。醫學檢驗技術專業的專業課包括《臨床免疫學檢驗》《臨床微生物學檢驗》《臨床生物化學檢驗》專業基礎課包括《醫學免疫學》《醫學微生物學》《生物化學》等,這些課程之間存在著部分內容重復以及內容銜接不當的問題,以至于學生在學習專業課程時常會遺忘了之前基礎課中所學過的相關知識。為此,老師授課時不得不重復基礎課的內容。因此,建議將專業基礎課與專業課程合并在一起,使學生在學習完專業基礎知識后更好地繼續學習臨床技能。《分析化學》包括化學分析和儀器分析,學時較多,針對現代檢驗技術專業的特點,即已進入儀器檢驗的時代,因此該門課應側重儀器分析的講解,減少化學分析授課的比重。
2.2設置臨床見習期
現有的課程設置與臨床實踐結合的還不夠密切,由于未能很好地讓學生早期接觸臨床,致使部分學生并不知道臨床檢驗報告是什么,不知道檢驗報告上各項指標代表何意,也就更談不上有專業感情。因此,建議在對學生進行專業課教學之前應安排學生在醫院的檢驗科臨床見習一段時間,具體了解檢驗工作的流程,培養學生的感性認識,加深對檢驗知識的印象,達到百聞不如一見的效果。醫學檢驗專業的課程教學應該針對檢驗技師的培養目標,強化檢驗專業的特色,突出檢驗技師崗位的基本能力和基本素質培養,具體表現在檢驗方法學、實驗種類、檢驗項目、技術種類等教學內容的特色和優勢。
2.3增設一些有特色的選修課
以加強學生對當前最新技術的了解和應用。如針對檢驗科的大型儀器設備,檢驗人員只需了解儀器性能及常見故障排除。因此,可以將《檢驗儀器維修》這門課程改為選修課或以專題講座形式開出。也可將幾門臨床主干課程中的臨床檢驗儀器集中為臨床檢驗儀器學課程,避免重復講授。為加強實驗室質量控制,開設《臨床實驗室管理》課程,可以將生化、免疫、細胞等質量管理的內容集中起來,不必在多門專業課中重復講授;而針對《臨床實驗室管理》內容比較抽象,可以組織學生在臨床實習期間邊實踐邊學習,其教學效果會更好。
3課程開設順序
課程開設順序總體要求是通識課程、專業基礎課程、臨床醫學課程、專業課程、選修課,這樣依照學科的發展、知識的關聯與銜接來設置。有平行課程時要平衡開課實驗室和教研室的學年工作量。實訓課中的軍事訓練建議在新生入學時安排,以規范學生的行為習慣,養成良好的時間觀念、組織紀律觀念、集體觀念和講求規范及雷厲風行的工作作風,促進校風校紀建設;社會實踐課應安排在每年的寒假和暑假進行;臨床見習時間宜安排在進入專業課之前;畢業實習安排在最后一學年。
4課程學時的設置和教學內容的要求
英文名稱:Journal of Medical Molecular Biology
主管單位:中華人民共和國教育部
主辦單位:華中科技大學同濟學院
出版周期:雙月刊
出版地址:湖北省武漢市
語
種:中文
開
本:大16開
國際刊號:1672-8009
國內刊號:42-1720/R
郵發代號:38-35
發行范圍:國內外統一發行
創刊時間:1978
期刊收錄:
CA 化學文摘(美)(2009)
Pж(AJ) 文摘雜志(俄)(2009)
中國科學引文數據庫(CSCD―2008)
核心期刊:
中文核心期刊(1992)
期刊榮譽:
聯系方式
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訪問辛辛那提兒童醫院醫療中心見聞與啟示
全科醫師實踐技能培訓短期效果評價
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對免疫學理論模塊教學目標的思考
PBL教學法在局部解剖學教學中的應用
關鍵詞:食品,快速檢驗技術,應用,發展
中圖分類號:F416文獻標識碼: A
前言:隨著人們生活水平的提高,各種食品安全問題層出不窮,加強對食品安全的檢測成為有關部門的重中之重。與此同時,食品快速檢驗技術得到了進一步的應用和發展。
1.食品快速檢驗技術的應用的重要性
快速檢驗法的應用有效地提高了食品安全工作者對食品質量的評判能力。這種方法主要針對食品的部分理化指標進行檢測,在對食品質量進行定性的時候相較于以往的感官判斷更準確、合理。借助快速檢驗法,食品安全監督工作者可以準確理性的對食品的安全性進行判斷。如此,避免了感官判斷準確率低的問題,是食品安全監督朝著優質、高效目標發展的重要表現。隨著快速檢驗方法的廣泛使用,食品安全監管體系逐步完善,市場上的不合格的食品可以快速準確的被食品藥品監督管理局的工作者準確識別,為消費者創造了一個安全的食品環境。該方法的實施也對那些非法食品經營者形成了強大的威懾力。檢測箱只是一個小小的箱子,但是它給社會帶來的影響卻是巨大的,它有效地降低了市場上食品的危險性,維護了社會的穩定。
2 食品快速檢驗方法的形式及應用
2.1 試管法
試管法可用速測管顯色半定量或定性對樣品進行快速檢測,可用于亞硝酸鹽、二氧化硫、鼠藥、甲醇等的測定。目前試劑盒也被廣泛應用于現場快速檢測中。如酶聯免疫(ELISA)快速檢測試劑盒應用于食品農藥殘留免疫檢測, 將會成為食品農藥殘留和食品安全質量控制的有效快速檢測手段。目前大多物質的檢測方法都可以試劑盒形式存在,如慢抗試劑盒(如β內酰胺酶檢測試劑盒和總抗生素檢測試劑盒)以及環丙沙星等藥物試劑盒的產品已被廣泛應用于市場中。
2.2 便攜式儀器法
便攜式檢測儀在食品檢驗工作中被廣泛應用,適用于農產品監測站、田間地頭果蔬的檢驗以及商貿批發市場、酒店等處果蔬的檢測。以李培武研究員為首的研究組在國內外首創了黃曲霉毒素B1親和微球快速檢測技術,研制開發出黃曲霉毒素B1專用定量熒光避測儀,該測試儀測試靈敏度和準確度高,最低檢測限達到0.3μg/kg。便攜式儀器具有體積小、重量輕、精度高、快速檢測等優點,也是當前被廣泛應用的快速檢測方法之一,可結合不同技術制備得到檢測儀,應用于各種食品檢測中。
3 生物檢測技術在食品快速檢驗方法中的應用
3.1 免疫學技術
免疫學技術是指抗原與抗體之間的特異性免疫反應,即在體內發生,也可以在體外發生。不同的微生物具有特異的抗原,輔以免疫放大技術制備相應的多克隆抗體或單克隆抗體,就可以鑒別目的微生物存在與否,并較準確地檢測出其含量。目前用于食品安全檢測中的免疫技術主要有酶聯免疫法(ELISA)、免疫磁珠分離技術、免疫力檢測試劑條、免疫乳膠試劑、免疫深沉法或免疫色譜法等。1989年美國食品安全檢驗局就已將免疫技術應用于肉類及家禽的檢驗中,并制定了相關檢驗標準。免疫學技術具有靈敏度高、特異性高、可定量分析、簡便安全等優點,廣泛應用于細菌、霉菌、及細菌和真菌毒素等的檢測中。
3.2 分子生物學技術
3.2.1 DNA探針技術DNA探針技術又稱核酸探針技術和分子雜交技術,是指能與特定核苷酸序列發生特異互補雜交,雜交后又能被特殊方法檢測的已知被標記(同位素或非同位素標記)的核苷酸鏈。廣泛用于食品中致病菌和病原體檢驗等方面。基因探針法具有準確性和靈敏度高,針對性強,檢測快速等特點。
3.2.2 PCR技術
聚 合 酶 鏈 式 反 應 技 術 簡 稱 P C R(Polymerase Chain Reaetion)技術,是一種能夠在生物體外快速擴增特定基因或DNA序列的方法,早期應用于基因克隆和轉基因檢測,后來被廣泛應用于食品快速檢驗中,并且被認為是食源性致病菌快速和準確的檢測方法。PCR技術可用于大腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌及其他食品中致病菌的檢測。PCR技術結合其他技術形成一種穩定、靈敏、易操作且成本低廉的技術。
3.2.3 基因芯片技術
基因芯片又稱生物芯片技術,是指將大量DN段(即探針分子)固定于支持物上后與標記的樣品分子進行雜交,通過探針分子上雜交信號的強度檢測出樣品分子數量及序列信息。主要用于基因檢測工作,可用于食品中常見致病菌的檢測。
3.3 生物傳感器技術
生物傳感器技術是由生物識別系統和信號轉換器組成,通過酶、抗原、抗體、微生物、核酸等生物活性物質作為識別元件,電化學、信號放大裝置或場效應管、壓電晶體等傳感器把待測物濃度轉為電信號,再根據電信號測出待測物濃度。該檢測方法經濟、簡便,不需要預處理;具有專一性強、靈敏度高、選擇性及抗干擾能力強;體積小,方便攜帶,可實現現場檢測和連續在線監測;操作系統簡單、容易實現自動分析,準確度高;樣品用量小,響應快,敏感材料可反復使用;此外生物傳感器可得到的信息量大。生物傳感器可用于食品中蛋白質、糖、氨基酸以及食品添加劑等多方面領域。
3.4 代謝學技術
代謝學技術是指利用微生物代謝的理論,通過對其生長過程中相關底物和代謝產物和電阻抗的變化特性進行檢測,從而達到微生物檢測目的的方法。
3.4.1 電阻抗技術
生物電阻抗測量,簡稱阻抗技術,是通過測量微生物代謝引起的培養基電特性變化來測定樣品微生物含量的一種快速檢測方法。微生物在培養過程中,生理代謝作用使培養基中的電惰性物質,如碳水化合物、類脂、蛋白質等轉化為電活性物質,如乳酸鹽、醋酸鹽等,使培養基的電阻發生變化,電阻性增強,電阻抗降低,由此可判定微生物在培養基中的生長繁殖情況。陳廣全等人采用該法檢測食品中沙門氏菌。
3.4.2 微熱量計
技術微熱量計技術是通過測定微生物生長時產生熱量的變化檢出和鑒別微生物。微熱量計具有恒溫精度高、檢測靈敏、操作簡單等特點,特別適用于熱效應小和緩慢的生物過程的研究和檢測。
3.4.3 放射測量技術
放射測量技術是用14C標記微生物生食品快速檢驗技術的應用及研究進展長繁殖過程中所利用的碳水化合物等代謝底物,并測量微生物代謝產生的14CO2含量,從而判斷微生物的量。該方法用于檢測細菌,具有快速、準確等特點。
4 總結
綜上所述,食品快速檢驗方法種類繁多,具有較好的特異性、高效性和準確性,且檢測快速等優點,但是不管是哪一種檢測方法都具有一定的局限性,非生物檢測方法,不具有特異性操作相對生物檢測法復雜等缺點;生物檢測法雖然生物特異性高,操作方便簡單,但其成本相對較高,且當待測物中含有與目標菌競爭性物質時可能會出現假陽性等缺陷。因此,若要達到食品快速檢驗技術的完善,就必須在發展新技術的同時,也要加強對現有的技術綜合利用的研究,以使食品檢測技術達到理想的效果。
參考文獻
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馬弋,1977年12月生于浙江省金華市。華中科技大學同濟醫學院碩士。現任職于湖北省疾病預防控制中心衛檢所,湖北省衛生檢驗專業委員會秘書。研究方向為食品安全風險監測及微生物學檢驗。曾在SCI及國內核心期刊上公開發表專業論文20余篇,參編著作1本,參與起草國家食品安全標準3個,獲湖北省及武漢市科技成果獎各1次。
近年來,食品安全事件的頻繁出現給廣大消費者的生命安全與健康,不斷帶來風險和精神恐慌,食品安全現已成為不可忽視的重要公共衛生問題。2009年頒布的《中華人民共和國食品安全法》明確規定了各級檢測機構在食品安全事件處理中的重要職責,這就要求相關人員不僅必須具食品安全保障的基本能力,還應具應對各類食源性致病菌引起的突發公共衛生事件的監測、檢驗能力,為食品安全預警提供科學的技術支持。與傳統的微生物檢測方法相比,一些更加快速,準確的新方法正在逐步普及。特別是一些生化和分子生物學儀器的使用,既節省了人力成本和時間,也提高了檢測的靈敏度和準確性。為了進一步的了解食源性致病菌的流行病學特點及實驗室檢測,我們邀請到湖北省疾病預防控制中心的馬弋老師,請他與大家共同分享解決食源性致病菌檢測問題的成功經驗。
記者:常見的食源性致病菌檢測項目有哪些?請舉例說明一些常見食源性致病菌的特點及其致病機理?
馬弋:常見的食源性致病菌檢測項目主要分為定量檢測和定性檢測,定量檢測主要是針對一些衛生指標菌,它能反映出食品受到污染的程度,例如細菌總數和大腸菌群的檢測;而定性檢測的致病菌一般都是在某一類食品中不得檢出的,不同的食品容易受到污染的致病菌也有所不同,比如說禽類食品容易受到沙門氏菌的污染,沙門氏菌是一種常見的腸道病原菌,全世界已發現的血清型有2500多種,不產生外毒素,有較強的內毒素,并有一定的侵襲力,個別菌還能產生腸毒素,其中傷寒沙門氏菌能夠引起腸熱癥為主的傷寒,副傷寒,是我國《傳染病防治法》中規定報告的乙類傳染病之一,而非傷寒沙門氏菌則會引起胃腸炎和敗血癥。與此同時,嬰幼兒奶粉及米粉中的阪崎腸桿菌的安全性問題,近年來已成為全球關注的焦點,2008版的國家標準GB/T4789《食品衛生微生物學檢驗》就把它作為新增菌納入進去,它主要引起嬰兒患上腦膜炎,壞死性小腸結腸炎、菌血癥和嚴重的神經系統后遺癥。此外,海產品中以副溶血性弧菌最為常見,該菌進入人體后會在消化道內迅速繁殖生長,產生大量的腸毒素。患者會出現劇烈腹痛、腹瀉,嘔吐和發熱,大多數患者會中度脫水,如果搶救不及時,患者會因為嚴重脫水而有生命危險。
記者:結合您多年來微生物檢驗經驗您覺得微生物檢驗的難點及核心要素主要體現在哪些方面?
馬弋:我個人覺得最大的難點及核心是對致病菌的定量檢測,因為致病菌長期與人類共存,大部分致病菌都是我們腸道內常見的菌群,大多都是條件致病菌,只有達到一定的量,超過了一定的發病閾值才引起發病,所以食物中檢出陽性致病菌并不一定發病,而且食物的一些加工過程也可以殺滅致病菌,所以定量的概念很重要。由于細菌的生長和環境密切相關,數量是不斷在發生變化的,所以最難的還是定量。再一個就是細菌的耐藥性,現在由于抗生素的濫用,導致臨床醫生很難選擇合適的抗生素對病人進行救治,所以在監測致病菌的同時最好能對其耐藥譜進行一個檢測。如果只做定性檢測,難點在于檢測方法的靈敏度,這跟檢驗人員的經驗,培養基的質量,儀器設的使用等因素相關。
記者:鑒于食源性致病菌的上述特性,其檢測技術也需要不斷更新以滿足檢測高要求,那么未來一段時間內,檢測技術的發展方向是什么?
馬弋:與傳統的檢測方法相比較,新型的微生物檢測技術正向快速的分子生物學技術,免疫學技術,代謝技術、基因指紋圖譜技術,自動化儀器、生物傳感器等方向發展。
記者:在此您能否介紹幾種新的檢測方法?
馬弋:新型快速檢測技術:
1、API手工生化鑒定系統:最常見的有用于革蘭氏陰性桿菌鑒定的API20E。
2、以免疫學方法建立的快速檢測技術:免疫測定法的代表技術是ELISA技術,是抗原或抗體吸附到固相載體上作為一種試劑,來檢測標本中有無相應的抗體或抗原的一種方法。ELISA具有高度的特異性和敏感性,幾乎所有可溶性的抗原抗體反應系統均可檢測。與免疫熒光技術相比,ELISA敏感性高,不需特殊設,結果觀察簡便。
3、分子生物學方法鑒定系統:是從分子生物學水平上研究生物大分子特別是核酸結構及其組成部分。在此基礎上建立的眾多檢測技術中,核酸探針和聚合酶鏈反應,以其敏感,特異,簡便、快速的特點成為世人矚目的生物技術革命的新產物,除了可用于初篩檢測,由于其具有高特異性和敏感性,也可直接用于微生物的鑒定。
4、自動化儀器。
半自動微生物鑒定系統:是由微量生化檢測系統發展而來。其原理是將各種不同的生化反應組成專一鑒定試劑條(或板)。經培養后用光電讀數器自動讀數,將數據自動傳送到計算機,由計算機分析處理,并打印結果分析報告。這一類的鑒定系統主要有:ATB(法國梅里埃公司),BIOLOG(美國BIOLOG)等,半自動微生物鑒定系統除了鑒定微生物外,也可進行藥敏試驗。
Vitek全自動細菌鑒定系統:采用光電技術,電腦技術和細菌八進位制數碼鑒定相結合。對各反應孔底物進行光掃描,動態觀察反應變化,一旦試卡內終點指示孔到達臨界值,指示反應完成,系統將最后一次判讀的結果所得生物數碼與菌種庫標準菌生物模型相比較,經矩陣分析得出鑒定值和鑒定結果,并自動打印報告。
首都醫科大學附屬北京天壇醫院實驗診斷中心就是這樣一個從事健康評價、高危預測和個體化診斷的綜合平臺。健康評價即我們常說的健康體檢,高危預測是指對基因檢測結果和家族史等信息進行綜合分析后所提出的易發生疾病人群的提示。個體化診斷是綜合當代科學理論及技術手段,結合中醫辨證的理論,對個體進行全面分析后得出的針對個體的評價和診斷,從而指導個體化醫療建立實驗室健康評估體系。
實驗室在保障人類健康上的作用越來越重要,社會性、標準化國際性是對先進實驗室提出的要求。國際上對醫學實驗室從技術能力、管理能力等不同的角度上進行評價。近年來,國際醫學界非常重視醫學實驗室的質量管理國際標準化組織頒布了《醫學實驗室質量和能力專用要求》,即lS015189,以推動全球實驗室標準化,規范化建設,2004年中國合格評定國家實驗室認可委員會將此標準引進了國內,并把它作為一個與國際接軌的方法進行執行,幾年來,我國僅有8個實驗室通過認可。北京天壇醫院實驗診斷中心負責人康熙雄教授不但在專業領域是頂尖學者,而且具有很強的管理能力,他所領導的北京天壇醫院實驗診斷中心是首批被認證的實驗室,這意味著北京天壇醫院實驗診斷中心在臨床標本檢測,藥品評估等方面已經實現國際互認,患者拿到此處出具的檢驗報告單在國外也同樣有效。
為了發展和不斷提高,天壇醫院實驗診斷中心堅持發展科研,不斷探索,在與相關專家反復研討后,先后在健康評價體系和檢測方法的研究等方面承擔國家和地方的課題7項,建立了新生兒,少年、青年、壯年、老年以及女性的生長不同期所需要的評價體系,深入研究個體化診斷。
今年天壇醫院實驗診斷中心承辦2007年全國現代免疫診斷方法暨高通量檢測技術臨床研究發展論壇,討論了在健康評價手段和檢測方法等方面的國內外新進展。來自全國21個省市自治區的近400名代表們歡聚一堂討論了世界本行業最新話題。會議中,通過互聯網實現了國內專家與美國專家的實時在線討論,引進美國同行的思路,引進他們在技術和管理等方面的先進經驗。
實驗診斷中心負責人康熙雄,現任首都醫科大學附屬北京天壇醫院實驗診斷中心主任、主任醫師、教授、博士生導師、首都醫科大學臨床檢驗診斷學系主任,中國檢驗醫師協會副會長、全國診斷學指導委員會主任委員、中國實驗室管理協會常務委員、中國衛生部標準化委員會檢驗分會委員。
“以前,我們只認識到人體2000個功能基因,醫院檢驗科只能提供幾十個到上百個檢驗項目,進入21世紀,我們已經認識到人體的功能基因約有3萬個,這就對我們檢驗科提出了一個問題,我們到底要檢查幾項? 200個?還是2000個?還是兩萬個?同時,我們獲取到近萬個參數,又該如何處理這些信息,并通過這些信息來評價患者健康和疾病狀態呢?這些都是我們要討論和研究的。”
康熙雄教授多年從事臨床檢驗診斷學,臨床免疫病、腫瘤的診斷和治療等工作,曾在東京大學參加腫瘤基因治療,在神經系統自身免疫性疾病,自身免疫性腎病等自身免疫病及腫瘤的臨床診治方面積累了豐富的經驗,2002年康教授提出“個體化診斷系統的建立和臨床應用”的研究方向,并利用分子生物學等各種前沿方法學,進行“藥物代謝基因組學、臨床蛋白組學、臨床代謝組學、功能蛋白相互作用疾病診斷模型”等多方位的實驗診斷學臨床應用研究,主編出版了《臨床電泳》《臨床蛋白質組學》《臨床免疫學》等多部專著,多篇論文被SCI收錄。目前,在他的積極籌劃下,以天壇醫院實驗診斷中心為基地,搭建起包括多種先進儀器設備蛋白質飛行質譜檢測儀、高效液相色譜、凝膠成像系統、基因芯片儀、懸浮微陣列檢測儀、熒光定量實時在線核酸擴增儀、流式細胞儀、蛋白芯片檢測儀、芯片點樣儀、細胞培養系統等)的共享性的臨床蛋白質組學檢測平臺、基因檢測平臺、細胞培養平臺、為開展臨床科研工作提供了良好的條件,也具備了應對嚴重生物性災害的應急能力。
2003年的SARS考驗著每一個醫藥工作者,為保護人民大眾的健康,檢驗工作更不能有任何閃失,在SARS過后更應該如此,SARS期間,康教授領導天壇醫院實驗診斷中心承擔了863子課題“傳染性非典型肺炎流行病學特征及其早期快速診斷技術應用”的研究,并總結抗擊SARS過程中實驗室診斷經驗,先后主編出版了《SARS實驗室診斷》(人民衛生出版社)、《“非典”的實驗室檢測及診斷》(科技出版社),于2003年7月參加國際SARS研討會并作大會發言得到國際組織和專業團體的關注,也得到總理的肯定和市政府的嘉獎。
醫學研究生的培養是醫學人才培養體系的重要組成部分,隨著我國社會經濟的發展,對醫學研究生的培養提出了新的要求。由于基礎研究與臨床實踐相結合是醫學發展的必然趨勢,無論是臨床醫生還是基礎研究人員都認識到加強臨床與基礎結合的重要性[2],因此,在醫學教育過程中采取基礎與臨床相結合的培養模式,為醫學人才培養體系的創新和改革提供了新的思路。
基礎醫學是我校重點建設學科,和其他醫學院校相似,我校的基礎醫學研究生在招生、培養和就業中存在生源欠佳、培養模式和課程設置不合理、學科發展薄弱、就業渠道不暢等問題[M]。如果采取基礎與臨床相結合的模式進行培養,將有助于提高基礎醫學研究生的綜合醫學研究素質,拓寬學術視野和就業途徑。
但是,在培養過程中如何做到臨床醫學與基礎醫學有機融合,以及在基礎醫學各學科和專業中的具體操作措施,還是一個值得探討和研究的課題。近年來,針對我校基礎醫學研究生教育中曾存在的基礎研究與臨床實踐脫節等情況,我們在導師選拔、課程設置和學位論文課題等方面注重基礎與臨床的有機結合,積極探索基礎醫學研究生培養模式的理論創新和實踐改革,并取得了初步成效,進一步推動和加強了我校基礎醫學教師與臨床一線醫技人員的交流和融合,提高了基礎醫學研究生的培養質量。
1增強基礎研究人員與臨床醫技人員的交流,組建聯合導師組
為了保證基礎醫學研究生解決臨床實際問題的學術視野和科研技能,在師資力量配備上注重基礎醫學教師和臨床醫技人員的交叉與融合。我們利用學校附屬醫院的資源組建了臨床與基礎相結合的師資隊伍,根據研究方向,由基礎醫學教師和相關臨床醫技人員組建聯合導師組。
例如,聯合神經外科、骨科和腦外科等臨床科室的教師組建人體解剖與組織胚胎學專業導師組,聯合醫學檢驗科、感染科等科室的教師組建病原生物學和免疫學專業導師組,聯合病理科、腫瘤科和ICU等科室的教師組建病理學與病理生理學專業導師組,聯合放射科、核醫學等臨床科室的教師組建放射醫學專業導師組。導師組根據學生人學前的專業基礎、研究方向及學生的研究興趣,制定基于臨床實踐與基礎研究相結合的個性化培養方案,在基礎導師和臨床導師的共同指導下,完成學位論文選題、課題設計及實施,并且保證每個研究生可以在與研究方向相關的臨床科室調研、實習或實踐,充分依托臨床醫學專業資源為基礎醫學人才培養服務。
2調整課程設置
為了適應社會發展趨勢,近年來我們在研究生課程設置方面進行了優化調整。首先,調整了公共課考試方式和授課學時,在對中國特色社會主義理論與實踐研究和自然辯證法等課程的考試方式進行改革的基礎上,減少了英語和計算機應用課程的授課學時(分別從〗〇8學時和54學時縮減為72學時和36學時)。
基于網絡信息環境中的文獻檢索教學內容和方式的新變化,醫學信息檢索與應用課程由25學時縮減為18學時。公共課的調整為學生提供了更多專業實踐的學習時間。專業基礎課的設置方面,僅保留了高級生物化學、高級免疫學、細胞生物學、細胞培養技術、醫學科研方法學等共同基礎課程,其他課程由學生和導師組根據學生入學前所學專業及課程、研究方向等因素共同商定,實現了基于學生個人基礎和不同專業、方向培養目標的個性化培養。
在基礎課程的教學實踐中,我們注重加強科研實驗技能的訓練以及基礎課程與臨床課程的整合,多開設臨床問題相關的專題實驗,傳授更多的技術方法,以提高學生解決臨床問題的基礎醫學科研能力。
3加強基礎醫學與臨床實踐的學術交流,鼓勵基于臨床問題的選題研究
醫學研究的深人發展離不開基礎研究人員與臨床醫生的溝通。我們既鼓勵基礎研究人員深人臨床實踐一線尋找有意義的研究課題,也重視臨床一線醫技人員通過自己的臨床實踐經驗為基礎醫學教學和研究提供豐富的素材。為此,我們定期組織基礎醫學教學和研究人員、臨床醫技人員、研究生進行學術交流會,就肝炎、腫瘤、心血管疾病、代謝性疾病、神經退行性疾病、糖尿病、衰老、感染與免疫等重大疾病及基礎與臨床研究專題展開經驗交流并探討相關問題,最終實現以發現和解決臨床問題為導向的有效溝通和共同攻關。
在這種交流中,基礎醫學教學和研究人員以及研究生可以敏銳地從臨床中發現自己所要研究的問題,且可以得到臨床實踐人員的積極反饋,真正做到基礎研究與臨床實踐的協同發展,并促進醫學研究逐漸深人,從而創新了研究生培養模式[5,6]。
4促進基礎醫學各學科整合及與臨床醫學的融合,加強學科建設
基礎醫學作為醫學各學科的重要支撐,加強其學科建設非常必要。為了充分實現基礎醫學與臨床醫學之間的交叉融合,我們首先在基礎醫學各學科之間進行了整合:將原有的人體解剖學和組織胚胎學兩個學科合并,將生理學、病理生理學整合為人體機能學,將微生物學、寄生蟲學和免疫學整合為病原生物學與免疫學。此外,我們還建設了由人體解剖、組織胚胎、病理解剖及病原生物等標本模塊組成的人體科學教育中心和生命科學教育中心,作為醫學人才培養、基礎醫學研究與臨床實踐緊密結合的重要基地,有效實現了學科間科學研究和教學資源的整合,促進了基礎醫學內部各學科和人才培養體系的協調發展。同時,在學科群組建、教師申報科研課題和研究生培養過程中建立“以健康和疾病為基礎,以解決實際臨床問題為導向”的基礎醫學研究和人才培養新模式,結合學校相關政策支持,注重基礎醫學教師和研究生的個人發展,不斷提高自身專業知識和科研素質,提升基礎醫學的學科整體發展水平。
資料與方法
實驗對象:實驗標本來自天津市泰達醫院體檢中心、天津市第三中心醫院及天津市腫瘤醫院的被檢者。正常對照組100例,男53例,女47例,年齡29~56歲,為健康的體檢者;上消化道出血確診人群44例,男24例,女20例,年齡44~78歲;下消化道出血的確診人群56例,男26例,女30例,年齡54~91歲。
實驗方法:各種檢測方法的操作按試劑盒說明書進行。每1份標本在相同條件下用3種方法檢測,記錄測定結果,用于對比分析。
結果
用蒸餾水和抗凝的新鮮全血配制一定濃度的血紅蛋白溶液,用3種方法進行靈敏度的檢測。見表1。
血紅蛋白膠體金法和轉鐵蛋白膠體金法靈敏度幾乎相同,而化學法敏感性相對較低。
構建量化模型標本。見表2。
血紅蛋白濃度0mg/L,結果均為陰性,說明pH不對其產生影響。血紅蛋白濃度相同時,pH不同時發生了變化,且pH越小(酸度越大)影響越大。
血紅蛋白膠體金法檢測結果。見表3。
血紅蛋白濃度14000和7000由于濃度太高產生后代現象,但酸度越大影響越小,說明鹽酸破壞部分血紅蛋白。
轉鐵蛋白膠體金法檢測結果。見表4。
轉鐵蛋白在pH 1~5時與空白對照(蒸餾水)相比均受到影響,但與血紅蛋白膠體金法,影響有所減小。
健康體檢者和內鏡確診的消化道出血患者糞便標本結果。見表5。
試驗結果與臨床診斷對比分析。見表6和表7。
討論
從以上結果可以看出,化學法對血紅蛋白的檢出最低濃度10mg/L,而血紅蛋白和轉鐵蛋白膠體金法靈敏度比化學法高得多,其檢出最低濃度為0.2mg/L,最高檢出濃度可達2000mg/L,當人血紅蛋白濃度>2000mg/L時,測試結果出現假陰性,與楊新原等1報道的膠體金法檢測便隱血的后帶現象相符。這種現象主要是由免疫學中抗原抗體反應的原理引起的。其原理基于免疫學抗原抗體反應,亦遵循pH抗原抗體反應特點,抗原抗體比例合適反應最充分。若抗原極度過剩則無反應物形成,稱為后帶現象。過量大出血糞便中血紅蛋白濃度過高,致使反應體系抗原過剩,便隱血試驗出現假陰性
結果。化學法試劑屬匹拉米洞法,利用匹拉米洞當作呈色指示劑,在酸及過氧化氫(H2O2)的作用下,與血紅蛋白反應,產生經鹽酸作用過的血紅蛋白對改良的匹拉米洞化學法、血紅蛋白膠體金法、轉鐵蛋白膠體金法與蒸餾水相比均受到影響。產生這種結果的原因有兩個:pH紫藍紫紅的顏色。
的影響或(和)鹽酸本身的影響。鹽酸為酸性物質,對于抗原抗體的結合可能有一定的影響,將表中各管各取出一部分加入適量NaHCO3粉劑,調整各管至中
性(用pH值試紙測),再用3種方法進行檢測,結果不發生改變。調整了pH值后結果仍與沒有調整pH值前的結果相同,說明不是pH過低影響的,而是鹽酸破壞了的抗原結構造成的,這種破壞是不可逆性的。通常所謂的胃酸即指鹽酸,其分泌濃度約150mmol/L,在胃液和食物等其他物質混合后有所下降2。正常胃液的pH值0.9~1.8。所以檢測嘔吐物和胃液隱血時,也應考慮到胃液中酸性成分的影響,最好采用化學法測定。
健康人對照組在正常飲食情況下留取糞便標本,血紅蛋白膠體金法、轉鐵蛋白膠體金法、Hb、Tf聯合檢測法陽性均為1例,檢出率1%,而化學法檢出9例(含與其他3種方法重疊陽性1例)。經隨訪得知,該患者留取糞便前一天鼻出血,部分血液吞咽入胃。其他8例陽性者,與正常入食的肉類、蔬菜相關聯,屬于假陽性。本組約有半數消化道出血患者糞便隱血未被檢出。其原因可能有:①糞便中血紅蛋白含量太高,出現“后帶現象”,造成假陰性結果;②出血后,紅細胞在腸道停留時間久,血紅蛋白被消化酶降解或被細菌充分分解消化,使其免疫原性喪失;③患者血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不匹配的原因3。轉鐵蛋白膠體金法:44例上消化道出血患者糞便隱血34例陽性,檢出率77.3%;56例下消化道出血患者糞便隱血檢出44例陽性,檢出率78.6%。聯合檢測上、下消化道出血患者糞便檢出率分別為86.4%、89.3%。研究表明轉鐵蛋白與糞便混懸液在37℃孵育4小時后4,其抗原性無明顯改變,而血紅蛋白抗原活性已喪失65%,由此可見轉鐵蛋白在腸道內抗菌能力強,自身穩定性高于血紅蛋白5,還可以克服被檢標本中的血紅蛋白在胃腸道內滯留時間過長而被分解或破壞,使其失去原有的免疫原性而出現的“假陰性”結果,因此,轉鐵蛋白膠體金法是提高消化道出血檢出率的良好指標。
由于糞便混有血液與檢測其他液體中的血紅蛋白有所不同,因此欲獲得高符合率結果,必須遵照操作規程和說明書使用,在糞便樣本的多部位或多次取樣。從而提高消化道出血、消化道腫瘤病變及潰瘍出血的檢出率,為臨床提供其準確可靠出血診斷依據,但臨床仍需綜合相關檢查及患者的臨床癥狀對消化道的出血作出準確判斷。
參考文獻
1楊新原,沈紅霞.膠體金法檢測便隱血的后帶現象[J].現代醫藥衛生,2009,25(6):907.
2黃彩英,苗春生,車欣.膠體金法檢測便隱血的后帶現象[J]. 標記免疫分析與臨床,2008,15(1):60-61.
3羅本麗,劉體全.臨床檢驗基礎[M].北京:人民衛生出版社,2003:186.