微課課題研究方案精選(九篇)

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第1篇：微課課題研究方案范文

【關(guān)鍵詞】 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌 復(fù)方磺胺甲口惡唑 替卡西林/克拉維酸 頭孢哌酮/舒巴坦 聯(lián)合藥敏

In vitro antibacterial activity of compound sulfamethoxazole combined

ABSTRACT Objective To evaluate the antibiotic effects of SMZ/TMP combined with TIPC/CA， CPZ/SB respectively against 30 Stenotrophomonas maltophilia. Methods The protocol was designed by checkerboard method and the MIC of two groups antibiotics against 30 Stenotrophomonas maltophilia was determined by dilution method and the FIC index was calculated according to MIC results. Results The in vitro antibacterial activity of MICs of combinations were lower than those of 3 drugs tested alone. The range of the FIC index was mainly between 0～1. Conclusion The FIC index indicated that synergism and additivity of SMZ/TMP combined with TIPC/CA， CPZ/SB respectively against 30 Stenotrophomonas maltophilia.

KEY WORDS Stenotrophomonas maltophilia; Compound sulfamothoxazole; Ticarcillin/clavulanic acid; Cefoperazone/sulbactam; FIC

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)是需氧、非發(fā)酵的革蘭陰性桿菌，該菌廣泛分布于自然界，為主要的條件致病菌和院內(nèi)感染的病原菌之一，多發(fā)生于老年人且長期使用廣譜抗生素和進行侵入性治療患者的呼吸道標(biāo)本中。此菌對常用的抗生素有較高的耐藥性，且對亞胺培南天然耐藥，臨床治療非常困難，病死率較高。復(fù)方磺胺甲口惡唑、替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦敏感性雖然相對好些，但其耐藥性仍在20%以上［1］，這三種藥物臨床上單獨使用時療效不理想，而采用聯(lián)合用藥可提高療效。本文擬探討復(fù)方磺胺甲口惡唑分別與替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用的體外抗菌活性，為臨床聯(lián)合用藥，減少耐藥菌株提供實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 菌株

30株嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌來源于臨床標(biāo)本，其中痰28株，膽汁引流物2株，經(jīng)VITEK重新鑒定確認(rèn)。質(zhì)控菌為銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.2 培養(yǎng)基

水解酪蛋白(MH)液體培養(yǎng)基(中國藥品生物制品檢定所)。

1.3 抗菌藥物

復(fù)方磺胺甲口惡唑［甲氧芐啶∶磺胺甲基異口惡唑(1∶19)］(天津金章科技發(fā)展有限公司配制)，替卡西林/克拉維酸，中美史克公司(批號166746，純度94%，含替卡西林3g，克拉維酸0.2g)，頭孢哌酮/舒巴坦，Pfizer制藥有限公司(批號55839229，純度93%，頭孢哌酮/舒巴坦為2∶1)。

1.4 儀器

比濁儀(法國BioMerieux公司產(chǎn)品)；連續(xù)微量加樣器和八道微量加樣器均為美國Eppendorf公司產(chǎn)品)；96孔平板(天津金章科技發(fā)展有限公司)。

2 方法和結(jié)果

2.1 菌懸液配制

從已分純并過夜新鮮培養(yǎng)的細(xì)菌平板上挑取4～5個菌落，接種于MH肉湯中增菌6h，菌液用3ml肉湯以比濁儀校正濁度至1.5×108CFU/ml，再以MH肉湯稀釋至1.5×105CFU/ml。

2.2 抗菌藥物儲備液配制

替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦用pH6.0的PBS緩沖液配成最終濃度為1920μg/ml的抗生素儲備液。

2.3 方法

用微量肉湯稀釋法測3種抗生素對30株嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的最低抑菌濃度(MIC)，判斷標(biāo)準(zhǔn)按美國CLSI/NCCLS(2005年)標(biāo)準(zhǔn)。微量液體平板棋盤法：每種藥物最高濃度為其MIC的2倍，倍比稀釋到其MIC的1/16，分別沿?zé)o菌微孔板橫軸、縱軸加不同濃度的兩種藥物的MH肉湯50μl，再將1.5×105CFU/ml菌液100μl加入孔中，37℃過夜培養(yǎng)，觀察結(jié)果，記錄單獨應(yīng)用2藥的最低抑菌濃度MIC甲藥單用和MIC乙藥單用，并選擇最佳組合效應(yīng)時兩藥聯(lián)合應(yīng)用時各自的MIC甲藥聯(lián)用和MIC乙藥聯(lián)用，以計算FIC指數(shù)。

2.4 FIC指數(shù)計算與判讀標(biāo)準(zhǔn)

FIC指數(shù)=MIC甲藥聯(lián)合MIC甲藥單用+MIC乙藥聯(lián)合MIC乙藥單用

FIC指數(shù)≤0.5為協(xié)同作用，＞0.5～1為相加作用，＞1～2為無關(guān)作用，＞2拮抗作用。

3 結(jié)果

3.1 MIC值

復(fù)方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸或頭孢哌酮/舒巴坦單用與聯(lián)合應(yīng)用對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的MIC結(jié)果見Tab.1。從Tab.1可見，SMZ/TMP分別與TIPC/CA或CPZ/SB聯(lián)用后，MIC均顯著低于單獨應(yīng)用，表明抑菌作用增強。

3.2 藥物濃度累積抑菌率

復(fù)方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸或頭孢哌酮/舒巴坦單用與聯(lián)合應(yīng)用濃度累積抑菌百分率曲線見Fig.1及Fig.2。

3.3 FIC

復(fù)方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸或頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用的FIC指數(shù)分布見Tab.2。復(fù)方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸聯(lián)合應(yīng)用，F(xiàn)IC范圍主要在0～1以協(xié)同和相加為主；與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用，F(xiàn)IC范圍主要在0.5～1以相加為主。

4 討論

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌是全球關(guān)注的8種多重耐藥菌株之一。由于其外膜通透性低，可誘導(dǎo)型β內(nèi)酰胺酶L1、L2的存在、主動外排系統(tǒng)及變異迅速等多種耐藥機制，對多數(shù)抗生素天然耐藥，治療相當(dāng)困難。復(fù)方磺胺甲口惡唑?qū)κ塞溠抗佯B(yǎng)單胞菌的敏感性較高，但該藥為抑菌劑，單用易產(chǎn)生耐藥性。最近的研究表明，其耐藥性有明顯增加趨勢［2］，并與Ⅰ型整合子的存在有關(guān)［3］。成，已廣泛應(yīng)用。磺胺增效劑可與二氫葉酸還原酶(DHFR)相互作用，而磺胺甲口惡唑則與二氫喋啶氨苯甲酸(dihydropteroate)合成酶(DHPS)相互作用，使細(xì)菌DNA合成受阻，抑制細(xì)菌的生長。1972年首先報告了革蘭陰性細(xì)菌中由質(zhì)粒介導(dǎo)的Tmpr耐藥性。這是對磺胺增效劑不再敏感的DHFR所引起的。此種新的DHFR與染色體DHFR無關(guān)，其來源和多數(shù)革蘭陰性菌中獲得性DHFR的來源均不清楚。目前在革蘭陰性兼性厭氧桿菌中已發(fā)現(xiàn)了16種不同型別的耐藥性DHFR。其中許多與轉(zhuǎn)座子或DNA序列組件有關(guān)。

近年來，細(xì)菌耐藥性的逐年上升和耐藥性快速傳遞已經(jīng)成為臨床感染性疾病治療的難題。文獻報道Ⅰ型整合子和磺胺耐藥基因的存在是導(dǎo)致磺胺耐藥的主要原因［4］。整合子是細(xì)菌基因組中可移動性遺傳物質(zhì)，Ⅰ型整合子可以整合一個或多個耐藥基因盒，從而形成多重耐藥，它介導(dǎo)的耐藥機制傳播的快，能增加磺胺的MIC［4］，表明復(fù)方磺胺甲口惡唑的應(yīng)用會受到一定限制。所以單用藥物往往不能有效控制感染，從而使聯(lián)合用藥成為必然。Zelenitsky等［5］報道對于嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌感染，單獨應(yīng)用時復(fù)方磺胺甲口惡唑的敏感性最高，抗菌藥物合理聯(lián)合應(yīng)用后對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的抑菌作用顯著優(yōu)于單一的抗生素應(yīng)用。