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光色素種類
葉綠體是光合作用的場(chǎng)所類囊體中含兩類色素:葉綠素和橙黃色的類胡蘿卜素(胡蘿卜素和葉黃素),通常葉綠素和類胡蘿卜素的比例約為3:1,chla與chlb也約為3:1,在許多藻類中除葉綠素a、b外,還有葉綠素c、d和藻膽素,如藻紅素和藻藍(lán)素;在光合細(xì)菌中是細(xì)菌葉綠素等。
葉綠素a、b和細(xì)菌葉綠素都由一個(gè)與鎂絡(luò)合的卟啉環(huán)和一個(gè)長(zhǎng)鏈醇組成,它們之間僅有很小的差別。類胡蘿卜素是由異戊烯單元組成的四萜,藻膽素是一類色素蛋白,其生色團(tuán)是由吡咯環(huán)組成的鏈,不含金屬,而類色素都具有較多的共軛雙鍵。
關(guān)鍵詞:梔子(Gardenia jasminoides Ellis);種子;生理;萌發(fā)機(jī)制
中圖分類號(hào):S567.7+9.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2016)18-4726-04
DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2016.18.025
中藥梔子來源于茜草科(Rubiaceae)梔子屬(Gardenia Ellis)植物梔子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果實(shí),其性寒味苦,歸心肺三焦經(jīng);具有泄火除煩、清熱利尿、涼血解毒之功效;用于黃疸尿赤、血淋澀痛、尿血崩漏等病征[1]。梔子屬植物廣泛分布于熱帶及亞熱帶地區(qū)。中國主要分布在長(zhǎng)江以南各地,主產(chǎn)于江西、四川、湖北、福建、湖南、廣西、廣東等省(自治區(qū))?,F(xiàn)代藥理研究證明,梔子的主要活性成分為黃酮類梔子素、三萜類化合物藏紅花素、藏紅花酸及α-藏紅花甙元、環(huán)烯醚萜甙類梔子甙、異梔子甙、去羥梔子甙、山梔子甙等[2]?,F(xiàn)在國內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)于梔子的需求量很大,且不斷上升,具有很好的市場(chǎng)前景[3],所以梔子的栽培面積在不斷擴(kuò)大[4]。但栽培梔子的藥材品質(zhì)不穩(wěn)定,而且品種混雜,田間管理粗放,從而使藥材的質(zhì)量存在隱患。種子萌發(fā)是植物源藥材生長(zhǎng)的開始,是控制藥材質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié),只有培育出良好的種苗才能獲得優(yōu)質(zhì)的藥材。梔子種子的發(fā)芽期為20 d左右,由于發(fā)芽緩慢,容易導(dǎo)致出苗不齊、出現(xiàn)缺苗現(xiàn)象,嚴(yán)重制約了梔子的生產(chǎn),因此梔子優(yōu)良種苗的培育問題亟待解決。試驗(yàn)以不同萌發(fā)階段的梔子種子為材料,探討了梔子種子萌發(fā)過程中可溶性糖、粗脂肪、游離氨基酸、可溶性蛋白、淀粉含量的變化,從植物生理的角度分析梔子種子對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的適應(yīng)性,以期為弄清梔子種子萌發(fā)的生理適應(yīng)機(jī)制提供依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 植物材料及處理 2014年11月在江西省樟樹市采集成熟的梔子種子,除去外果皮和果肉后,將種子漂洗干凈,晾干后選取健康飽滿的種子,放入密封袋內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室。在實(shí)驗(yàn)室里將梔子種子于25 ℃恒溫環(huán)境里浸種1 d;采用濾紙作為發(fā)芽床,30 ℃恒溫?zé)o光照環(huán)境進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。從置床開始,分別取出不同萌發(fā)階段(干種子、吸脹、露白、伸長(zhǎng)、變綠、長(zhǎng)根、長(zhǎng)葉)的適量種子樣品用于各項(xiàng)生理指標(biāo)(可溶性糖、粗脂肪、游離氨基酸、可溶性蛋白、淀粉含量)的測(cè)定。
1.1.2 試劑和儀器 試劑主要有蒽酮、抗壞血酸、苯胼戊三酮、L-亮氨酸、氫氧化鈉、高氯酸、葡萄糖、無水乙醇、無水乙醚;儀器主要是BP211D電子天平(德國賽多利斯集團(tuán)公司,感量0.000 1)、KQ3200超聲波清洗器(昆山超聲儀器廠)、YF-111B高速中藥粉碎機(jī)(瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司)、GZX-9146MBE型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)、HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)、UV-1800紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)、LRH-250-Z振蕩培養(yǎng)箱(廣東省醫(yī)療器械廠)以及培養(yǎng)皿(9 cm×3 cm)、濾紙等。
1.2 測(cè)定方法
1.2.1 可溶性糖含量測(cè)定 采用蒽酮比色法[5]來測(cè)定梔子種子的可溶性糖含量,稱取新鮮種子樣品0.5 g,放入研缽中,研磨勻漿,轉(zhuǎn)移至50 mL燒杯中,去離子水少量多次洗滌研缽,合并洗滌液,用塑料膜封口,在沸水中提取30 min。待冷卻后,將提取液轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中定容,用移液管吸取可溶性糖提取液1 mL放入具塞試管中,重復(fù)3次,加入5 mL 0.1%蒽酮試劑。搖勻后放入沸水中計(jì)時(shí)10 min,流動(dòng)水冷卻20 min。以空白為對(duì)照,用紫外可見分光光度計(jì)在620 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度,通過葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程(文中省略)計(jì)算糖含量,再利用公式計(jì)算樣品的可溶性糖含量。
樣品可溶性糖含量=C×V/(a×W×1 000)×100%,
式中,C為用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程所求出的糖含量(mg),a是測(cè)定時(shí)所加入的提取液體積(mL),V為提取液的總體積(mL),W是所測(cè)樣品的鮮重(g)。
1.2.2 淀粉含量測(cè)定 采用高氯酸法測(cè)定梔子種子的淀粉含量,將提取可溶性糖剩余的殘?jiān)D(zhuǎn)移至50 mL燒杯中,加去離子水20 mL,沸水浴15 min之后加入9.2 mol/L高氯酸,沸水浴15 min,過濾至50 mL容量瓶中,定容,搖勻,即淀粉提取液。吸取淀粉提取液1 mL,轉(zhuǎn)至具塞試管中,分別加5 mL葸酮試劑,沸水浴10 min,流動(dòng)水冷卻20 min,以去離子水為對(duì)照,重復(fù)3次。于620 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度,根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算糖含量,再利用公式計(jì)算樣品的淀粉含量。
樣品淀粉含量=[(C×V/A)/(W×1 000)]×100%×0.9,
式中,C為用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程求出的糖含量(mg),A為吸取樣品液的體積(mL),V是提取液的總體積(mL),W是所測(cè)樣品的鮮重(g)。
1.2.3 粗脂肪含量測(cè)定 用索氏提取法[6]測(cè)定梔子種子中粗脂肪的含量,取稱過重(W1)且烘干的脫脂濾紙,再稱取適量的梔子種子,嚴(yán)密包裹于濾紙中。包裹的樣品在105 ℃烘2 h后干燥,稱重(W2),烘干后的種子盡量保持在0.1 g,然后放在索氏提取器的承受瓶中,加入100 mL乙醚,置于50 ℃水浴中反復(fù)抽提8 h。待脂肪提取完后,取出濾包并在105 ℃下烘1.5 h,使乙醚完全揮發(fā),再放入干燥器冷卻,稱重(W3),至恒重。該測(cè)定重復(fù)3次。利用公式計(jì)算樣品的粗脂肪含量。
樣品粗脂肪含量=(W2-W3)/(W2-W1)×100%。
1.2.4 可溶性蛋白含量測(cè)定 采用考馬斯亮藍(lán)法[7]測(cè)定梔子種子的可溶性蛋白含量,稱取梔子種子樣品0.5 g,置于研缽中,用4 mL去離子水勻漿研磨,轉(zhuǎn)移到離心管中,再用適量去離子水清洗研缽,合并洗液轉(zhuǎn)移至離心管,10 000 r/min離心10 min,取上清液定容至50 mL。再取1.0 mL稀釋液轉(zhuǎn)移至具塞試管中,加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250液,充分混合,放置2 min后在595 nm處測(cè)其吸光度,通過g-球蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程(文中省略)計(jì)算蛋白質(zhì)含量,再利用公式計(jì)算樣品的可溶性蛋白含量。
樣品可溶性蛋白含量=[C×Vt/Vs×Wf×1 000]×100%,
式中,C為用g-球蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程求出的蛋白質(zhì)含量(mg),Vt為提取液體積(mL),Wf為樣品的鮮重(g),Vs為測(cè)定時(shí)加入的提取液體積(mL)。
1.2.5 游離氨基酸含量測(cè)定 采用茚三酮比色法[8]測(cè)定梔子種子的游離氨基酸含量,精密稱取梔子種子樣品0.1 g于研缽中,加入5 mL 95%乙醇勻漿研磨,用適量95%乙醇少量多次洗滌研缽,合并清洗液,定容至25 mL,70 ℃保溫30 min后過濾,用95%乙醇補(bǔ)充減少的體積。取濾液1 mL,加3 mL 0.1%茚三酮和0.1 mL 0.1%抗壞血酸,沸水浴15 min后冷卻至室溫,于580 nm處測(cè)其吸光度,通過g-球蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算蛋白質(zhì)含量,再利用公式計(jì)算樣品的游離氨基酸含量。
樣品游離氨基酸含量=[C×Vt/Vs×Wf]×100%,
式中,C為用g-球蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程求出的蛋白質(zhì)含量(mg),Vt為提取液總體積(mL),Wf為樣品的鮮重(g),Vs為測(cè)定時(shí)加入的提取液體積(mL)。
2 結(jié)果與分析
2.1 可溶性糖含量的變化
可溶性糖是種子發(fā)芽生長(zhǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ),在種子的萌發(fā)過程中,可溶性糖既可以被分解以提供能量,又可以轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)為細(xì)胞的生長(zhǎng)提供原料;梔子種子萌發(fā)階段可溶性糖含量的測(cè)定情況見圖1。由圖1可知,在梔子種子萌發(fā)過程中,可溶性糖的含量發(fā)生了明顯的變化,不同萌發(fā)階段其可溶性糖含量呈升高-降低-升高-降低-升高的變化,整體呈曲線上升趨勢(shì)。具體來看,由萌發(fā)前到長(zhǎng)葉階段整個(gè)萌發(fā)期可溶性糖含量增加了0.308個(gè)百分點(diǎn),其中以生根階段的可溶性糖含量最低,為0.230%;在吸脹階段含量達(dá)到最高,為1.301%,這一階段可溶性糖的含量變化最大;之后的各階段可溶性糖含量均低于吸脹階段,并且在露白、變綠階段又出現(xiàn)明顯下滑,含量分別為0.721%、0.736%,產(chǎn)生的原因可能是在種子萌發(fā)的初始階段,隨著吸脹過程的進(jìn)程,種子內(nèi)發(fā)生了一系列復(fù)雜的生理生化變化,酶的活性增強(qiáng),貯藏物質(zhì)在酶的作用下被分解為簡(jiǎn)單的小分子化合物,從而使可溶性糖含量增加;而在后面的一系列萌發(fā)階段里,可溶性糖多已被利用,用以合成或轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì),如為蛋白質(zhì)合成提供碳骨架和ATP的合成提供底物,并為種子的萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)提供能量,從而導(dǎo)致可溶性糖含量降低[7]。當(dāng)種子長(zhǎng)根后,或者進(jìn)一步有側(cè)根生成時(shí),種子內(nèi)部的物質(zhì)代謝可以自給自足,因此在后面長(zhǎng)葉階段里,可溶性糖含量又呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)。
2.2 淀粉含量的變化
淀粉是種子內(nèi)的大分子物質(zhì),是最重要和分布最廣泛的碳水化合物與營養(yǎng)物質(zhì),在種子成熟后就作為營養(yǎng)物質(zhì)而貯存于種子內(nèi);也可以在萌發(fā)過程中,通過自身的代謝、利用可溶性糖或其他營養(yǎng)物轉(zhuǎn)化而來。種子萌發(fā)時(shí),淀粉在淀粉酶的作用下降解為小分子量的可溶性物質(zhì),同時(shí)釋放出大量的能量供胚吸收利用,所以其含量的變化是種子代謝狀況的重要指標(biāo)。梔子種子萌發(fā)階段淀粉含量的測(cè)定情況見圖2。由圖2可知,梔子種子的淀粉含量很低,干種子僅為0.000 54%;在吸脹階段顯著增加,且淀粉含量達(dá)到最大,為0.001 35%,增加了0.000 81個(gè)百分點(diǎn),此變化表明梔子種子萌發(fā)初期淀粉的代謝水平增強(qiáng),可能是其他營養(yǎng)物質(zhì)降解后轉(zhuǎn)化為淀粉所致;之后的露白階段種子里淀粉含量急劇減少,為0.000 37%;但此后淀粉代謝又增強(qiáng),原貯藏的淀粉被水解為可溶性的碳水化合物供胚生長(zhǎng)所用;隨著胚芽的生長(zhǎng)伸長(zhǎng),淀粉的含量緩慢回升;之后又緩慢下降,至生根階段降至最低,為0.000 08%,說明淀粉被分解代謝后轉(zhuǎn)化為小分子量簡(jiǎn)單的營養(yǎng)物質(zhì),并運(yùn)轉(zhuǎn)到生長(zhǎng)部位,作為構(gòu)成新組織的成分和產(chǎn)生能量的原料了。
2.3 粗脂肪含量的變化
脂肪是種子主要的貯藏營養(yǎng)物質(zhì)之一,它與糖和蛋白質(zhì)共同構(gòu)成細(xì)胞的組成物質(zhì);梔子種子萌發(fā)階段粗脂肪含量的測(cè)定情況見圖3。由圖3可知,梔子種子內(nèi)貯藏的粗脂肪含量較高,為10.54%,這應(yīng)該是其種子生長(zhǎng)所需能量的重要來源。隨著種子的萌發(fā)進(jìn)程,粗脂肪含量呈現(xiàn)降低-升高-降低的變化,在吸脹階段粗脂肪含量大幅減少,為3.79%,可能是在脂肪酶的作用下轉(zhuǎn)化成小分子量物質(zhì)的緣故,從而為胚根的生長(zhǎng)提供物質(zhì)保障和能量需求;以后隨著胚繼續(xù)生長(zhǎng),粗脂肪含量呈不斷升高,到達(dá)變綠階段時(shí)含量達(dá)到最大,為18.75%,個(gè)中原因可能是可溶性糖和淀粉轉(zhuǎn)化為粗脂肪造成的;再以后粗脂肪含量不斷下降,至長(zhǎng)葉階段降至5.07%,說明隨著胚芽的不斷伸長(zhǎng),種子內(nèi)部代謝活動(dòng)也越加旺盛,且組織不斷分化,胚需要更多的能量、營養(yǎng)來供其生長(zhǎng);貯藏的粗脂肪可被分解為脂肪酸和甘油,然后運(yùn)輸?shù)缴L(zhǎng)部位,形成新的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和為呼吸作用提供能量,既可通過乙醛酸循環(huán)轉(zhuǎn)化為糖,又可作為呼吸基質(zhì)被消耗掉,所以粗脂肪是種子萌發(fā)過程里重要的營養(yǎng)物質(zhì)與能量來源。
2.4 可溶性蛋白含量的變化
蛋白質(zhì)也是種子內(nèi)貯藏的重要營養(yǎng)物質(zhì),在種子萌發(fā)時(shí)蛋白質(zhì)可水解產(chǎn)生氨基酸,用于新蛋白質(zhì)的合成,從而為種子萌發(fā)和幼苗的生長(zhǎng)提供氮素營養(yǎng);同時(shí)可溶性蛋白含量的提高,還會(huì)增加細(xì)胞的滲透濃度和功能蛋白的數(shù)量,有助于維持細(xì)胞的正常代謝。梔子種子萌發(fā)階段可溶性蛋白含量的測(cè)定情況見圖4。由圖4可知,在梔子種子萌發(fā)過程中,可溶性蛋白含量呈現(xiàn)升高-降低的變化,其中在干種子中的含量?jī)H為0.098%,而在變綠階段含量達(dá)到1.320%,升高了1.222個(gè)百分點(diǎn),可能原因是胚乳的生理活動(dòng)尚未加強(qiáng),代謝水平弱,胚細(xì)胞伸長(zhǎng)所需的養(yǎng)料和能量需求較少,貯藏蛋白開始降解,加之部分淀粉和可溶性糖轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì),使蛋白質(zhì)的含量急劇增加。此后含量迅速下降,至長(zhǎng)葉階段含量最低,為0.002%,比干種子含量還低了0.096個(gè)百分點(diǎn)。這反映出長(zhǎng)葉階段種子內(nèi)的代謝活動(dòng)較強(qiáng),不斷伸長(zhǎng)的胚根和后期的組織分化、長(zhǎng)出葉片等對(duì)可溶性蛋白的需求迅速增加,促使貯藏蛋白大量水解,而根系此時(shí)還不能從土壤中吸收新的氮元素來補(bǔ)充所致。
2.5 游離氨基酸含量的變化
氨基酸是生物機(jī)體的眾多生物活性物質(zhì)之一,是構(gòu)建細(xì)胞、修復(fù)組織的基礎(chǔ)材料;氨基酸對(duì)植物的營養(yǎng)貢獻(xiàn)不只是提供氮源,還對(duì)植物的生理代謝產(chǎn)生不可低估的影響,如氨基酸具有減輕環(huán)境重金屬離子對(duì)植物的毒害作用;梔子種子萌發(fā)階段游離氨基酸含量的測(cè)定情況見圖5。由圖5可知,梔子種子在不同的萌發(fā)階段游離氨基酸的含量變化十分明顯,如在干種子時(shí)含量為0.092 5%,而到了吸脹階段則含量最高,為0.265 0%,升高了0.172 5個(gè)百分點(diǎn);但到露白階段,游離氨基酸含量又急劇下降,變?yōu)?.019 8%,而此時(shí)的可溶性蛋白含量呈明顯增加的趨勢(shì),有可能是游離氨基酸被用來合成了蛋白質(zhì)緣故,并且至伸長(zhǎng)階段仍然很低;不過到變綠階段急劇升高,為0.226 0%,此時(shí)種子內(nèi)部的淀粉和可溶性糖的含量都有所降低,極有可能是轉(zhuǎn)化為游離氨基酸的緣故;到生根階段又降到低位,并且是整個(gè)種子萌發(fā)階段里最低的水平,游離氨基酸含量只有0.002 6%,此時(shí)種子內(nèi)部物質(zhì)代謝旺盛,胚根和葉片的生長(zhǎng)都消耗了大量的氨基酸;之后至長(zhǎng)葉階段含量才略有上升,此時(shí)可溶性蛋白的含量不斷下降,可能有部分蛋白質(zhì)被水解而補(bǔ)充了氨基酸緣故。
3 小結(jié)與討論
種子內(nèi)的淀粉、粗脂肪、可溶性糖含量的變化反映了種子內(nèi)可利用態(tài)物質(zhì)和能量的供應(yīng)基礎(chǔ)水平[9],而可溶性蛋白有一部分是參與各種代謝的酶類,其含量的變化是了解植物代謝狀況的一個(gè)重要指標(biāo)[10]。測(cè)定植物體內(nèi)游離氨基酸含量對(duì)研究植物在不同條件下及不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期氮代謝的變化以及植物對(duì)氮素的吸收、運(yùn)輸、同化及營養(yǎng)狀況等都有著重要意義。植物體內(nèi)的生理指標(biāo)反映了植物的生存狀態(tài),不同環(huán)境因素對(duì)這些指標(biāo)有著不同的影響,通過對(duì)這些指標(biāo)的探討,可以推斷體內(nèi)多種生理反應(yīng)的機(jī)制[11]。試驗(yàn)結(jié)果表明,梔子種子萌發(fā)過程中,隨著種子吸水量的增加,各種酶被激活,粗脂肪首先被分解利用,轉(zhuǎn)化為其他營養(yǎng)物質(zhì),隨后可溶性糖、淀粉、游離氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)在相關(guān)酶的作用下也逐步分解,為胚的生長(zhǎng)提供氮源、碳源和能量,蛋白質(zhì)最后被動(dòng)員。它們?cè)谥参锓N子內(nèi)的分布與變化反映了植物種子萌發(fā)階段營養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)轉(zhuǎn)情況,而且在種子萌發(fā)階段中起著重要的調(diào)控作用[12]。其中氨基酸存在2個(gè)大量積累的階段,可能是為后期的組織生長(zhǎng)準(zhǔn)備物質(zhì)基礎(chǔ);而粗脂肪的分解可視為種子萌發(fā)的標(biāo)志。
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[10] 彭方仁,郭 娟,徐柏森,等.木本植物營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)研究進(jìn)展[J].植物學(xué)通報(bào),2001,18(4):445-450.
沼氣工程是一項(xiàng)以農(nóng)村畜禽養(yǎng)殖糞便和農(nóng)作物秸稈等廢棄物為原材料,以獲取再生能源并解決環(huán)境污染問題為目的的農(nóng)村能源工程[1-3]。通過微生物厭氧發(fā)酵,產(chǎn)生以甲烷為主的沼氣作為再生燃料;同時(shí)降解消耗其原材料中的有機(jī)質(zhì),從而減少環(huán)境污染。為達(dá)到污染治理的目的,相關(guān)沼氣工程還有一個(gè)重要的延伸環(huán)節(jié),即發(fā)酵尾產(chǎn)物沼渣、沼液的去向問題。經(jīng)過發(fā)酵過程,雖然尾產(chǎn)物中有機(jī)質(zhì)顯著下降,但尾產(chǎn)物仍含有豐富的N、P、K和微量元素,以及維生素、氨基酸等活性成分[4-5]。因而,有機(jī)肥是當(dāng)前沼渣、沼液的理想消化方向?,F(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中,化肥已成為保證作物產(chǎn)量的決定性因素。但由于過度使用化肥而帶來的水體富營養(yǎng)化等環(huán)境問題,以及蔬菜、大米等食品質(zhì)量下降問題也相當(dāng)突出。利用有機(jī)肥改良土壤環(huán)境,改善食品質(zhì)量是當(dāng)前農(nóng)業(yè)發(fā)展的新趨勢(shì)[11]。近年來,有關(guān)沼液在生菜、西紅柿和玉米等農(nóng)作物栽培中的應(yīng)用研究也時(shí)有報(bào)道。
關(guān)于沼液在水稻生產(chǎn)中應(yīng)用的報(bào)道很多,但所得結(jié)論卻差異很大。多數(shù)研究認(rèn)同沼液施肥可以減輕病蟲害,提高水稻產(chǎn)量和質(zhì)量,但張進(jìn)等卻發(fā)現(xiàn)沼液完全代替化肥施用對(duì)水稻生長(zhǎng)及產(chǎn)量形成是不利的。另外,也有不少研究認(rèn)為沼液浸種可以提高水稻種子的萌發(fā),并提升幼苗質(zhì)量。相關(guān)報(bào)道集中于不同沼液浸種時(shí)間對(duì)種子萌發(fā)的影響,但適宜的浸種時(shí)間尚無定論,如李駿等[17]認(rèn)為以12~36h為宜,丁麗則認(rèn)為以24~44h為宜。有關(guān)適宜浸種沼液濃度的研究較少。李駿等[17]的浸種實(shí)驗(yàn)中并未對(duì)沼液進(jìn)行稀釋,而魏章煥等則提出純沼液浸種效果不如稀釋液〔V(沼液)∶V(水)=1∶1〕。上述研究結(jié)果的差異除了因?yàn)椴糠謱?shí)驗(yàn)條件粗糙、精確度有限以外,也可能與不同來源的沼液本身質(zhì)量存在較大差異有關(guān)。相關(guān)沼液濃度和浸種時(shí)間的不確定性給沼液在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用帶來諸多困擾。為進(jìn)一步明確沼液在水稻浸種過程中的應(yīng)用價(jià)值及其使用方法,該研究在室內(nèi)環(huán)境因素精確控制條件下,研究不同沼液濃度對(duì)水稻浸種效果的差異??紤]到不同來源的沼液在組成成分和濃度上存在較大差異,文中列出了此次實(shí)驗(yàn)所用沼液的基本理化參數(shù),以便后續(xù)不同沼液間的比較。
1材料與方法
1.1實(shí)驗(yàn)材料采用水稻日本晴品系(yzasativa),人工選取飽滿種子作為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)所用沼液來自上海林海生態(tài)技術(shù)股份有限公司下屬富民農(nóng)場(chǎng)沼氣工程點(diǎn)。沼液基本理化性質(zhì):pH值為7.14,電導(dǎo)率為5.88mS•cm-1,ρ(COD)為37878.8mg•L-1,總氮、總磷、總鉀、銅和鋅的質(zhì)量濃度分別為1569.1、1757.1、1367.5、130.1和219.0mg•L-1。
1.2浸種及萌發(fā)過程以去離子水稀釋沼液,獲得2%、5%、10%、25%、50%和100%(純沼液)濃度梯度(相當(dāng)于總氮質(zhì)量濃度為31.4、78.5、156.9、392.3、784.6和1569.1mg•L-1)。依次量取稀釋后的沼液50mL于小燒杯中,每杯放入20顆種子,攪動(dòng)使其完全浸入液體中。每組沼液濃度設(shè)置5個(gè)重復(fù),同時(shí)設(shè)純水處理作為對(duì)照。為防浸種過程中沼液殘余微生物耗氧而導(dǎo)致水稻種子缺氧,將小燒杯置于氣浴恒溫振蕩器(SHZ-82A,金壇)中旋轉(zhuǎn)培養(yǎng),設(shè)定溫度為30℃,轉(zhuǎn)速為150r•min-1。24h后將沼液倒掉,種子轉(zhuǎn)移至光照培養(yǎng)箱(新苗GZX-250BS-Ⅲ,上海)內(nèi)催芽。種子放入玻璃培養(yǎng)皿中,上下各鋪1層濾紙,每日早晚2次以去離子水濕潤(rùn)濾紙,并以無明顯積水為準(zhǔn)。培養(yǎng)箱設(shè)定t(光)∶t(暗)=12h∶12h,〔光〕照度為6000lx,溫度保持在30℃。
1.3萌發(fā)指標(biāo)測(cè)定自催芽開始后每隔24h調(diào)查萌發(fā)種子數(shù),以幼芽伸出2mm以上為萌出依據(jù)。參考CHIAPUSIO等[20]的萌發(fā)速率指數(shù)(S)分析不同處理間種子萌出的快慢,具體計(jì)算公式:S=(N1/1+N2/2+N3/3)/(N1+N2+N3)。其中,N1、N2和N3分別為催芽開始后第24、48和72h時(shí)萌出的種子數(shù)。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在該實(shí)驗(yàn)條件下,自催芽開始3d后不再有新的種子萌出,即在實(shí)驗(yàn)第3天從每皿中選出3株長(zhǎng)勢(shì)最佳的幼苗(50%沼液處理取全部幼苗),測(cè)定其莖長(zhǎng)、莖粗、根數(shù)和總根長(zhǎng)等形態(tài)學(xué)參數(shù)。鑒于該實(shí)驗(yàn)所得萌發(fā)率與已有報(bào)道差異很大,該實(shí)驗(yàn)自催芽初始和3d后分別測(cè)定培養(yǎng)材料的呼吸速率。具體測(cè)定以CIRAS-2光合測(cè)定系統(tǒng)聯(lián)合土壤呼吸室(PPSystems,美國)進(jìn)行,每組沼液處理隨機(jī)取3個(gè)皿,將全部材料(包括萌發(fā)的幼苗和未萌發(fā)的種子)轉(zhuǎn)移至呼吸室中,以大氣為氣源,控制流速為200mL•min-1,測(cè)定溫度為室溫(28℃)。期間保持材料表面濕潤(rùn),待儀器穩(wěn)定后讀出CO2摩爾分?jǐn)?shù)差值〔x(CO2)〕。測(cè)定結(jié)束后稱量材料鮮重,并以此換算出單位質(zhì)量材料每小時(shí)的呼吸量。計(jì)算方式:呼吸速率=x(CO2)×氣體流速×10-3/24.7×60/鮮重。其中,24.7為28℃和標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下空氣的平均摩爾體積,L•mol-1;60為時(shí)間單位換算率,min•h-1。待測(cè)材料鮮重呼吸速率(以CO2計(jì))單位為μmol•g-1•h-1。最后將每皿幼苗的芽(莖葉)和根自基部切開,烘干至恒重后稱量并換算為單株平均干重。
1.4數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)不同沼液濃度處理間以單因素方差分析和Duncan多重比較法統(tǒng)計(jì)分析指標(biāo)差異顯著性,指標(biāo)變化趨勢(shì)與沼液濃度間相關(guān)性以Pearson雙尾檢驗(yàn)進(jìn)行分析。試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差形式表示。
2結(jié)果與分析
2.1不同濃度沼液浸種對(duì)水稻種子萌發(fā)率和萌發(fā)速率的影響圖1顯示,日本晴水稻種子萌發(fā)率很高,經(jīng)純水浸種可達(dá)98%,其萌發(fā)速度也很快。24h沼液浸種對(duì)日本晴水稻種子萌發(fā)率和萌發(fā)速率未產(chǎn)生促進(jìn)作用。2%~5%沼液對(duì)水稻種子萌發(fā)率無顯著影響。但10%及更高濃度的沼液使水稻種子萌發(fā)率急劇下降(P<0.05),25%和50%沼液處理萌發(fā)率分別僅為對(duì)照的50%(P<0.05)和3%(P<0.05),純沼液處理無種子萌發(fā)(P<0.05)。沼液浸種同樣降低了水稻種子的萌發(fā)速率。除2%沼液處理水稻種子萌發(fā)速率較對(duì)照無顯著變化(P>0.05)外,更高濃度沼液浸種后水稻種子萌發(fā)速率呈顯著下降趨勢(shì)(圖1)。其中,5%沼液處理S值較對(duì)照下降27%(P<0.05),10%~25%沼液處理S值分別較對(duì)照下降57%~76%(P<0.05),50%沼液處理S值僅為對(duì)照的1%(P<0.05)。
2.2不同濃度沼液浸種對(duì)水稻形態(tài)學(xué)參數(shù)的影響催芽開始后72h內(nèi),純水浸種的對(duì)照幼苗芽長(zhǎng)可達(dá)3.6cm(圖2)。2%沼液浸種后水稻幼苗芽長(zhǎng)與對(duì)照相比無顯著差異(P>0.05)。5%及以上濃度沼液浸種后水稻幼苗芽長(zhǎng)隨沼液濃度的升高呈線性下降。其中,5%和50%沼液浸種處理芽長(zhǎng)分別較對(duì)照下降16%(P<0.05)和86%(P<0.05)。粗出現(xiàn)小幅下降,但較對(duì)照差異不顯著(P>0.05)。僅50%沼液處理較對(duì)照下降28%(P<0.05)。對(duì)照水稻幼苗平均根數(shù)為4.3條•株-1(圖2)。2%沼液浸種后水稻幼苗單株根數(shù)可達(dá)5.0條•株-1,較對(duì)照增加15%(P<0.05)。隨著沼液濃度的升高,這種促進(jìn)作用隨即消失。5%沼液浸種后單株水稻幼苗根數(shù)比對(duì)照下降12%(P>0.05)。10%~50%沼液浸種使單株水稻幼苗根數(shù)急劇下降,僅為對(duì)照的23%(P<0.05),即每株只有1條根。純水浸種條件下單株水稻平均總根長(zhǎng)為8.4cm(圖2)。除2%沼液浸種處理單株總根長(zhǎng)與對(duì)照無顯著差異外(P>0.05),更高濃度沼液浸種對(duì)水稻幼苗單株總根長(zhǎng)整體呈抑制趨勢(shì)。其中,5%沼液處理單株總根長(zhǎng)較對(duì)照下降28%(P<0.05),10%~25%處理較對(duì)照下降69%~76%(P<0.05)。50%沼液處理單株總根長(zhǎng)為對(duì)照的5%(P<0.05)。
2.3不同濃度沼液浸種對(duì)水稻幼苗生物量的影響沼液浸種對(duì)水稻幼苗生物量的影響見圖3。2%沼液浸種后水稻幼苗芽生物量較純水浸種的對(duì)照略有增加,但差異不顯著(P>0.05,圖3)。更高濃度沼液處理水稻幼苗芽生物量隨沼液濃度的升高呈線性下降。其中,5%沼液處理水稻幼苗芽生物量較對(duì)照下降22%(P<0.05),50%沼液處理芽生物量較對(duì)照下降83%(P<0.05)。不同濃度沼液浸種均顯著降低了水稻幼苗根生物量(圖3)。其中,2%和5%沼液浸種后水稻幼苗根生物量較對(duì)照分別下降27%和40%(P<0.05),10%~50%沼液浸種使根生物量下降62%~86%(P<0.05)。芽/根生物量比值進(jìn)一步證實(shí)沼液浸種對(duì)水稻幼苗根的抑制作用大于對(duì)芽的抑制作用(圖3)。這表現(xiàn)為不同濃度沼液處理水稻幼苗芽/根生物量比值均高于對(duì)照,其中2%~25%沼液浸種后幼苗芽/根比值上升31%~44%,50%沼液處理芽/根比值較低、中濃度沼液處理有所下降,但仍比對(duì)照高8%。
2.4沼液浸種濃度與水稻萌發(fā)參數(shù)的相關(guān)性分析由單因素方差分析可知,不同濃度沼液處理間上述測(cè)定指標(biāo)均存在顯著差異(表1)。其中,水稻種子萌發(fā)率,萌發(fā)速率,幼苗芽長(zhǎng)、根數(shù)、總根長(zhǎng)、芽生物量和根生物量的差異均達(dá)極顯著水平(P<0.001),另外,幼苗莖粗和芽/根生物量比值的差異也達(dá)顯著水平(P<0.05)。由相關(guān)性檢驗(yàn)可知,上述多數(shù)指標(biāo)的變化趨勢(shì)與處理沼液濃度呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。其中,水稻種子萌發(fā)率,萌發(fā)速率,幼苗芽長(zhǎng)、根數(shù)、總根長(zhǎng)、芽生物量和根生物量分別與沼液濃度之間在α=0.001水平上相關(guān)極顯著,莖粗與沼液濃度之間在α=0.01水平上相關(guān)顯著。僅芽/根生物量比值與沼液濃度之間的相關(guān)性未達(dá)顯著水平。
2.5不同濃度沼液浸種對(duì)水稻材料呼吸速率的影響沼液浸種24h后,即催芽剛開始且僅部分水稻種子露白時(shí),不同濃度沼液處理呼吸作用就已發(fā)生顯著變化。其中,2%沼液浸種后水稻種子呼吸速率與純水浸種的對(duì)照無顯著差異(P>0.05,圖4),但5%沼液處理種子呼吸速率較對(duì)照增加4.6倍(P<0.05)。更高濃度沼液處理下,水稻種子呼吸速率變化幅度有所下降,10%處理呼吸速率較對(duì)照提高2.8倍(P<0.05),25%沼液處理較對(duì)照仍提高1.3倍(P>0.05),但50%沼液處理水稻種子呼吸速率被抑制,比對(duì)照降低21%(P>0.05)。催芽72h時(shí),對(duì)照水稻材料(主要為幼苗)呼吸速率較催芽初始(種子)上升約3倍(圖4)。催芽72h時(shí)所有沼液處理水稻呼吸速率均顯著低于同期對(duì)照,其中,2%~10%沼液處理呼吸速率較對(duì)照下降30%~32%(P<0.05),25%沼液處理較對(duì)照下降48%(P<0.05),50%沼液處理較對(duì)照下降63%(P<0.05)。
3討論與結(jié)論
提出問題:種子萌發(fā)需要哪些適宜的環(huán)境條件?
收集信息:農(nóng)民伯伯在播種之前,往往會(huì)先將土壤疏松。并讓土壤保持一定的濕度,然后才往土壤播種,隔一段時(shí)間之后,種子就會(huì)紛紛從土壤里面開始萌發(fā)出來。我們經(jīng)常會(huì)看到,在溫暖的日子里,種子萌發(fā)的速度要遠(yuǎn)比寒冷的日子里萌發(fā)快得多。疏松土壤的主要目的,可能是為了讓土壤中有充足的空氣。保持一定的濕度,主要是為了給種子的萌發(fā)提供一定的水分。溫暖的日子。種子萌發(fā)更快,可能是種子萌發(fā)需要適宜的溫度的緣故。
假設(shè):種子萌發(fā)時(shí)需要適量的水分、適宜的溫度和充足的空氣。
實(shí)驗(yàn)器材:多粒小麥種子(或豌豆等)、清水、8只培養(yǎng)皿(可用碗、碟代)、4張濾紙、冰箱
實(shí)驗(yàn)操作:在4只培養(yǎng)皿中,分別鋪上濾紙,再分別編為1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)和4號(hào)。然后往3號(hào)和4號(hào)培養(yǎng)皿加入適量的清水,往2號(hào)培養(yǎng)皿加滿清水,而1號(hào)培養(yǎng)皿不加清水。于是往培養(yǎng)皿分別加入10粒種子。用另外的培養(yǎng)皿將裝有種子的培養(yǎng)皿覆蓋。然后將4號(hào)培養(yǎng)皿放入冰箱(如果無冰箱,可將4號(hào)皿放入密閉容器中,再將此容器沉沒于冷水中)里(冷藏室3%-6%),1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)培養(yǎng)皿放人常溫的房間里(常溫一般指氣溫20℃~25℃),最后觀察種子的萌況。
實(shí)驗(yàn)記錄:
分析論證:
提示:比較分析上列“觀察到的現(xiàn)象”,作出結(jié)論:“種子萌發(fā)時(shí)需要適量的水分、適宜的溫度和充足的空氣?!?/p>
說明:
當(dāng)愛情的種子在你心中萌發(fā)……姑娘,總有那么一天,你會(huì)對(duì)僅僅與女友交往感到不那么愜懷,似乎生活中還缺少點(diǎn)什么,而且顯得十分重要,急待充
實(shí)。也許你已經(jīng)到了那樣一個(gè)微妙的年齡;驟然對(duì)小伙子產(chǎn)生某種異乎導(dǎo)常的變態(tài)心理,抑或有那么一位小伙子特別惹你喜愛。似乎他有一種魔力吸引你去親近他;你也巴不得他那對(duì)傳神的眼睛不時(shí)地望著你,乃至使你產(chǎn)生樂不可支的。然而,當(dāng)你與他正面相逢時(shí),你又會(huì)靦腆地躲避他的目光,羞澀感油然而生,覺得此時(shí)此刻就同一個(gè)小伙子親昵未免輕佻。其實(shí),愛情的種子已在你心中萌發(fā)。這說不上什么罪孽,不過過早的熱戀往往鑄成大錯(cuò)。
愿你珍惜愛情的活力!
大多數(shù)姑娘在她們作為成年女性覓求終身伴侶之前,多因不適度的熱戀,無謂地消耗了自身的最寶貴的愛情活力。至于青梅竹馬的愛情那又該另當(dāng)別論。也許你會(huì)問我:“難道我就不應(yīng)當(dāng)有男朋友嗎?我們是志同道合,情趣相投、不會(huì)做出任何傷風(fēng)敗俗的事。我倆的悄悄話要比姑娘們之間的饒舌有價(jià)值得多……”即便如此,但有一點(diǎn)你必須明白:在一切具有人之本能的青年人之間,其熱戀爆發(fā)之速往往出乎人之意料,導(dǎo)致相互間的友誼失去存在的可能一一這里不是兩性之間的真正友誼一一只可能是所謂的志同道合。如果有誰真的向往愛情一一尋求一位誠實(shí)的男朋友,當(dāng)然,這里的他應(yīng)該是專一的和忠誠的;而你首先應(yīng)具有自知之明、毅力和自我犧牲精神。如果你在這些方面還很欠缺,就該先練練自制力。另外,請(qǐng)你相信:愛情的活力并非取之不盡,用之不竭。你必須珍惜它,將它留給將要同你結(jié)婚的丈夫,留給你未來的孩子。過早的熱戀只會(huì)過多地消耗你的愛情活力。雖然你內(nèi)在的無形的感情沖動(dòng)要比小伙子的內(nèi)心激越來得強(qiáng)烈,但小伙子本能的有形的感情沖動(dòng)卻要比你的外官反應(yīng)強(qiáng)烈得多。女孩子也許不可能知道男孩子在成熟過程中的生理特征。因此,作為姑娘適時(shí)地變得精明些,最好還是獨(dú)身處世,度過這人生的岔口。
愿你珍惜神圣的一吻!
未成熟的果實(shí)是不能采摘的,同樣,未成熟的人也不宜步入情場(chǎng)。戀愛、親吻,這究竟意味著什么?“親吻是傷風(fēng)敗俗的”,這已是無稽之談。然而,許多青年人拿“吻”當(dāng)兒戲,還自鳴得意,滿不在乎:一個(gè)真正聰明的姑娘,她定然會(huì)有完全不同的想法:“吻”是傾慕的象征,是愛情的標(biāo)志。配偶之間的“吻”,好比訂終身的海誓山盟,是白頭偕老的愛情的序幕,吻是心田的感情激蕩在外形上的體現(xiàn),蘊(yùn)藏著無限深沉的愛,如果你貿(mào)然賜之一“吻”,卻不是發(fā)自肺腑的愛情,而是由于好奇或一時(shí)所致,這豈不是十足的輕狂?難道你就沒有見過有的人,不正是由于那輕浮的一“吻”,使得原本十分珍貴的東西喪失了真正的價(jià)值?也許多數(shù)姑娘聽見此話會(huì)付之一笑:何必把這愛情的一“吻”,這極樂的片刻看得如此可怕?她們殊不知由于輕浮,把神圣的“吻”變成了廉價(jià)的商品。她們也不相信一個(gè)姑娘的童貞會(huì)因此遭到傷害。事實(shí)上,哪怕是一個(gè)特別好追逐姑娘的小伙子,他對(duì)一個(gè)自尊而善于應(yīng)酬的女子也不得不尊重幾分。要知道一旦這些小伙子成熟之后,他們也絕不會(huì)賞識(shí)那些易被劫得一“吻”的明日黃花。
姑娘,練練自制力吧!
縱使你確有必要也虔誠地想找個(gè)對(duì)象了,而且察知某某是忠誠地而不是表面地愛你,他尊重你而不企圖戲弄你,那你也該緩行,練練你的自制力,耐心地等一等。為了雙方都獲得純潔而高尚的愛情,無論是你還是他,在戀愛時(shí)期都該過獨(dú)身生活,直至各自漸漸成熟起來。讓時(shí)間證明你們的愛情是否經(jīng)得起考驗(yàn)。
關(guān)鍵詞:牽牛;種子萌發(fā);海水脅迫
中圖分類號(hào):S681.6;S604+.1;Q948.113 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2012)04-0747-03
2009年國務(wù)院審議通過了《江蘇沿海地區(qū)發(fā)展規(guī)劃》,拉開了江蘇省沿海新一輪開發(fā)的帷幕。江蘇省擁有海域?yàn)┩棵娣e6.873×105 hm2,占全國總數(shù)的1/4以上,而且每年繼續(xù)以2.00×103~3.33×103 hm2的速度淤漲。按照灘涂圍墾規(guī)劃,江蘇省近期將圍填1.80×105 hm2,遠(yuǎn)期圍填將達(dá)到4.67×105 hm2。新墾土地將大力發(fā)展先進(jìn)制造業(yè)、新能源產(chǎn)業(yè)、現(xiàn)代服務(wù)業(yè)和現(xiàn)代農(nóng)業(yè)。與此相適應(yīng)的園區(qū)綠化也開始引起人們的重視,篩選、引種、繁育具有一定耐鹽堿性的植物是圍墾園區(qū)綠化的重要任務(wù)之一。
牽牛[Pharbitis nil(L.)Choisy]系旋花科(Convolvulaceae)牽牛屬(Pharbitis Choisy)一年生蔓性纏繞草本花卉植物。其蔓生莖細(xì)長(zhǎng),約長(zhǎng)3~4 m,全株多密被短剛毛;葉互生,全緣或具葉裂;聚傘花序腋生,1朵至數(shù)朵花,花冠喇叭型,花瓣邊緣的變化很多,花色鮮艷美麗,有紅色、粉色、玫紅、白色、紫色、藍(lán)色、雙色系列等;蒴果球型,成熟后開裂,種子粒大,黑色或黃白色,壽命很長(zhǎng)[1];花期6~10月,朝開午謝。牽牛原產(chǎn)于南美洲,中國各地都有栽培[2],性喜溫暖、向陽環(huán)境,耐熱,也耐半陰,不耐寒,怕霜凍,入秋則枯,對(duì)土壤要求不嚴(yán),較耐旱,耐鹽堿及土壤瘠薄環(huán)境,但在濕潤(rùn)肥沃壤土中生長(zhǎng)好,為夏秋季常見的蔓性草花。野生牽牛多生于山野灌叢中及村邊、路旁、河谷、果園和山坡等地,適應(yīng)性極廣;園林應(yīng)用上因其枝蔓秀麗、花大、花繁、色艷麗且適應(yīng)性強(qiáng)、栽培容易而廣為種植,是城鄉(xiāng)庭院常見的觀賞植物,可做小庭院及居室窗前遮陰、陽臺(tái)小型棚架、庭院籬垣的美化植物,也可盆栽為叢狀或植為地被。近年來,人們對(duì)牽牛的化學(xué)成分、藥理作用等方面進(jìn)行了研究[3],對(duì)其提取液作為新型植物源藥物進(jìn)行了初步探討[4],并對(duì)同屬近親種的種子萌發(fā)特性開展了研究[5,6],但關(guān)于鹽堿脅迫下牽牛種子萌發(fā)的研究未見報(bào)道。試驗(yàn)利用不同濃度的海水溶液處理牽牛種子,分析牽牛種子對(duì)海水溶液的耐受能力,以期為牽牛的鹽堿土栽培打下理論基礎(chǔ)。
1材料與方法
1.1材料
供試的牽牛種子于2010年9月采自連云港師范高等專科學(xué)校校園內(nèi),選取發(fā)育良好、子粒飽滿種子備用。海水由江蘇省海洋生物技術(shù)重點(diǎn)試驗(yàn)室提供,鹽度為18.2‰(海水密度計(jì),上海華晨醫(yī)用儀表有限公司),用去離子水將海水配制成濃度(體積分?jǐn)?shù))分別為1%、3%、5%、10%、20%、30%、40%、50%的海水溶液。
1.2方法
1.2.1種子預(yù)處理牽牛的種子為硬實(shí)種子,用濃硫酸處理1 h 后[7],再用自來水沖洗干凈,備用。
1.2.2方法將鋪有2層濾紙的干凈培養(yǎng)皿作為發(fā)芽床,每個(gè)培養(yǎng)皿中整齊放置50粒種子,分別加入1%、3%、5%、10%、20%、30%、40%、50%的海水溶液,每個(gè)處理的加入量以潤(rùn)濕濾紙為宜,另設(shè)去離子水為對(duì)照(CK)。每個(gè)處理重復(fù)3次,置于25 ℃的恒溫箱內(nèi)無光培養(yǎng),并適時(shí)適度補(bǔ)充相應(yīng)濃度的海水。從試驗(yàn)的第二天開始觀察記錄種子萌發(fā)的數(shù)量及生物量(根長(zhǎng)+芽長(zhǎng))。幼根伸出的長(zhǎng)度約為種子長(zhǎng)度等長(zhǎng)時(shí)視為發(fā)芽,發(fā)芽數(shù)連續(xù)3 d不增加則視為發(fā)芽結(jié)束。
1.2.3種子萌發(fā)參數(shù)的計(jì)算及數(shù)據(jù)處理由于參試的牽牛種子在第五天后各處理的發(fā)芽數(shù)不再增加,并且在第二天牽牛種子的發(fā)芽數(shù)最多,因此,牽牛種子發(fā)芽率=培養(yǎng)第五天種子的累計(jì)萌發(fā)數(shù)/參試種子數(shù)×100%;發(fā)芽勢(shì)=第二天種子萌發(fā)的總數(shù)/參試種子數(shù)×100%;發(fā)芽指數(shù)=∑(逐日發(fā)芽種子數(shù)/對(duì)應(yīng)發(fā)芽日);活力指數(shù)=發(fā)芽指數(shù)×(根長(zhǎng)+芽長(zhǎng))。利用Mocrosoft Excel 2000和SPSS 11.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析與作圖處理。
2結(jié)果與分析
2.1海水脅迫對(duì)牽牛種子發(fā)芽率的影響
不同濃度海水處理對(duì)牽牛種子萌發(fā)的影響結(jié)果見表1、圖1,從表1、圖1可見,在20%濃度以下的海水處理范圍內(nèi),牽牛種子的發(fā)芽率先略微下降后緩慢升高,到20%濃度時(shí),牽牛種子發(fā)芽率已經(jīng)恢復(fù)到與對(duì)照處理基本持平的水平;當(dāng)濃度進(jìn)一步提高,達(dá)30%及以上后,牽牛種子的發(fā)芽率開始降低,但20%濃度的海水處理發(fā)芽率與對(duì)照差異仍不顯著;超過30%以后,開始出現(xiàn)顯著差異。
2.2海水脅迫對(duì)牽牛種子發(fā)芽勢(shì)的影響
在10%海水濃度以下時(shí),牽牛種子的發(fā)芽勢(shì)隨著海水濃度的升高呈現(xiàn)出小幅下降后再升高的趨勢(shì),到10%濃度時(shí)發(fā)芽勢(shì)超過了對(duì)照,形成一個(gè)小高峰(圖2),但與對(duì)照相比差異不顯著(表1);當(dāng)海水濃度大于10%以后,隨著濃度的增加,發(fā)芽勢(shì)開始逐漸下降,且均與對(duì)照差異顯著。
2.3海水脅迫對(duì)牽牛種子發(fā)芽指數(shù)的影響
不同濃度海水處理對(duì)牽牛種子發(fā)芽指數(shù)的影響結(jié)果見圖3,由圖3所示,隨著海水濃度的升高,牽牛種子的發(fā)芽指數(shù)先下降,再緩慢上升,到10%濃度時(shí)達(dá)到最高值,但此時(shí)的發(fā)芽指數(shù)還是低于對(duì)照的水平,且差異顯著(表1)。當(dāng)海水濃度超過10%后,發(fā)芽指數(shù)開始顯著下降。
2.4海水脅迫對(duì)牽牛種子活力指數(shù)的影響
不同濃度海水處理對(duì)牽牛種子活力指數(shù)的影響結(jié)果見圖4,由圖4所示,在10%海水濃度以下時(shí),隨著海水濃度的升高,牽牛種子的活力指數(shù)同樣呈先下降后上升的趨勢(shì),在10%濃度時(shí)達(dá)到最高值,并且超過了對(duì)照,呈顯著水平差異;當(dāng)海水濃度大于20%后,牽牛種子的活力指數(shù)隨著海水濃度的增加而下降。但在20%濃度時(shí),活力指數(shù)仍超過了對(duì)照,且差異顯著(表1)。
3討論
發(fā)芽率是體現(xiàn)種子萌發(fā)質(zhì)量的直觀指標(biāo),在30%海水濃度以下,海水對(duì)牽牛種子的發(fā)芽率影響不大,即使海水濃度達(dá)到50%,牽牛種子的發(fā)芽率仍有85%,說明牽牛對(duì)海水的耐受性較強(qiáng)。發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽指數(shù)是展示種子萌發(fā)活力的兩個(gè)重要指標(biāo)。在1%~10%海水濃度范圍內(nèi),牽牛種子的發(fā)芽勢(shì)隨海水濃度升高呈現(xiàn)總體上升的趨勢(shì),并且在10%濃度時(shí)略微超過對(duì)照;發(fā)芽指數(shù)與發(fā)芽勢(shì)的情況基本相同,在10%濃度時(shí)達(dá)到高峰,但比對(duì)照略低。說明在10%濃度以內(nèi),海水對(duì)牽牛種子萌發(fā)活力雖有一定的影響,但影響不大。活力指數(shù)可以更全面地分析種子的萌發(fā)能力[8],試驗(yàn)結(jié)果表明,海水濃度達(dá)10%時(shí),牽牛種子的活力指數(shù)達(dá)到最高,而且遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了對(duì)照;即使海水濃度達(dá)到20%,牽牛種子的活力指數(shù)也還是超過了對(duì)照,并且差異顯著。綜合以上試驗(yàn)結(jié)果,筆者認(rèn)為牽牛種子能耐受海水脅迫的濃度在20%(鹽度為18.2‰)以內(nèi)。至于各項(xiàng)指標(biāo)中低濃度海水處理的結(jié)果比對(duì)照略低的原因,或許是統(tǒng)計(jì)上的誤差造成的。
20%左右濃度的海水對(duì)牽牛種子萌發(fā)的影響不大的主要原因,應(yīng)是牽牛種子仍然可以從這些較低濃度的海水中吸收一定的水分供種子萌發(fā)所致;但當(dāng)海水濃度進(jìn)一步升高時(shí),牽牛種子萌發(fā)的各項(xiàng)指標(biāo)開始下降,主要原因是高濃度的海水對(duì)牽牛種子形成了滲透脅迫和離子脅迫[9],造成植物細(xì)胞出現(xiàn)質(zhì)壁分離、離子失衡和營養(yǎng)缺失等情況而影響到種子萌發(fā)。
分布在中國的旋花科植物有23個(gè)屬,其中3個(gè)屬包含有鹽生植物[10],占中國鹽生植物總屬數(shù)的1.5%,這3個(gè)屬分別是打碗花屬(Calystegia R. Br)、番薯屬(Ipomoea L.)和腺葉藤屬(Stictocardia Hall. f.),它們基本上分布在廣東、福建、臺(tái)灣等省的沿海地區(qū)。南北沿海均有分布的僅為腎葉打碗花[C. soldanella(L.)R. Br.],但其在綠化上價(jià)值不大。試驗(yàn)結(jié)果表明,牽牛也具有較強(qiáng)的耐鹽堿特性,可以通過馴化后作為沿海灘涂或圍墾區(qū)的垂直綠化植物進(jìn)行應(yīng)用。
參考文獻(xiàn):
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關(guān)鍵詞海藻浸提液;小白菜;種子萌發(fā);濃度
中圖分類號(hào) S634.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739(2011)02-0124-02
海藻是海洋中分布最廣的生物,從微小的單細(xì)胞生物到長(zhǎng)達(dá)數(shù)十米的巨藻,種類繁多,有綠藻門、褐藻門、藍(lán)藻門、紅藻門等,這些藻體中含有豐富的海藻多錆蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)以及具有特殊功效的生理活性物質(zhì)。海藻酸是一種重要的抗逆物質(zhì),在生物體內(nèi)既可以作為結(jié)構(gòu)成分,又可用于提供能量,而且是許多生物的抗逆代謝物。海藻肥是一類純天然、無毒、無副作用的新型肥料,其富含氨基酸、礦物質(zhì)、多糖、維生素及生理活性物質(zhì),具有提高作物產(chǎn)量、改善作物品質(zhì)和增強(qiáng)作物的抗旱、耐寒、抗病性等功效,并對(duì)蔬菜中農(nóng)藥和化肥的積累、殘留有明顯地降低作用,是農(nóng)產(chǎn)品無公害生產(chǎn)中一種理想的肥料[1-3]。海藻肥料作為新一代天然海洋生物肥,具有多種高活性成分和營養(yǎng)元素,有明顯的增產(chǎn)效果和極強(qiáng)的抗逆作用,將以其在環(huán)境保護(hù)、經(jīng)濟(jì)效益方面的突出表現(xiàn)而應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。
相對(duì)于常規(guī)肥料,海藻肥不僅能顯著地促進(jìn)作物根系發(fā)育,提高植物光合作用,而且還能促進(jìn)果品早熟,大大改善農(nóng)作物品質(zhì),特別是對(duì)蔬菜、瓜果、花卉等經(jīng)濟(jì)作物,應(yīng)用效果更為顯著[4]。在當(dāng)前形勢(shì)下,深入開展海藻提取物類肥料的研究和應(yīng)用在中國具有特殊的意義。中國海藻資源非常豐富,既有天然生長(zhǎng)的大型藻類,又有人工養(yǎng)殖的海藻。中國又是農(nóng)業(yè)大國,作物品種豐富,地域廣闊,有巨大的市場(chǎng)潛力和應(yīng)用前景。海藻提取物屬于純天然、綠色、環(huán)保的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,其研究和應(yīng)用必將對(duì)我國的農(nóng)業(yè)發(fā)展產(chǎn)生巨大的促進(jìn)作用[5-6]。該文通過海藻浸提液對(duì)小白菜種子萌發(fā)的促進(jìn)作用研究,以為其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
供試海藻浸提液由實(shí)驗(yàn)室自行制備,將海藻置于一定濃度的碳酸鈉溶液中,加熱解離后,過濾除去不溶性組分,得到海藻浸提液;供試蔬菜為小白菜。
1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)
試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理,即海藻浸提液300倍(A)、500倍(B)、1 000倍(C)液,以清水處理作對(duì)照(CK)。3次重復(fù)。
1.3試驗(yàn)方法
種子、濾紙及培養(yǎng)皿均預(yù)先用1%氯酸鈉溶液消毒,而后分別置于不同濃度的海藻浸提液中浸種24 h,浸種后各處理取30粒種子,平放在鋪有直徑為10 cm濾紙的培養(yǎng)皿中,自然晾干后播種。記錄發(fā)芽種子數(shù),生長(zhǎng)18 d后,記錄苗高、根長(zhǎng)、根數(shù)、幼葉數(shù)及葉面積。
2結(jié)果與分析
2.1不同處理對(duì)小白菜種子發(fā)芽率的影響
從圖1可以看出,海藻浸提液處理對(duì)小白菜種子發(fā)芽率有明顯的促進(jìn)作用。隨著稀釋倍數(shù)的增加,與CK相比,處理A、B、C發(fā)芽率分別提高31.5%、29.7%、22.2%,其中以處理A的效果最好。
2.2不同處理對(duì)小白菜根長(zhǎng)的影響
從圖2可以看出,海藻浸提液處理對(duì)小白菜根長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用。隨著稀釋倍數(shù)的增加,與CK相比,處理A、B、C的根長(zhǎng)分別增長(zhǎng)13.3%、18.1%、35.0%,其中以處理C的效果最好。
2.3不同處理對(duì)小白菜根數(shù)的影響
從圖3可以看出,海藻浸提液處理對(duì)小白菜根數(shù)上有明顯的增加作用。隨著稀釋倍數(shù)的增加,與CK相比,處理A、B、C的根數(shù)分別增加39.6%、45.0%、59.2%,其中以處理C的效果最好。
2.4不同處理對(duì)小白菜幼葉數(shù)的影響
從圖4可以看出,海藻浸提液處理對(duì)小白菜幼葉有明顯的促進(jìn)生長(zhǎng)作用。隨著稀釋倍數(shù)的增加,與CK相比,處理A、B、C的幼葉數(shù)分別增加11.5%、16.4%、12.5%,其中以處理B的效果最好。
2.5各處理對(duì)小白菜種子幼葉面積的影響
從圖5可以看出,海藻浸提液對(duì)小白菜幼葉面積有明顯的促進(jìn)作用。隨著稀釋倍數(shù)的增加,與CK相比,幼葉面積分別增長(zhǎng)12.4%、190.3%、114.5%,以處理B的效果最好。
3結(jié)論與討論
試驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)過海藻浸提液處理的小白菜,其各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)均比對(duì)照有顯著的提高,其中在幼葉面積這項(xiàng)指標(biāo)上,以稀釋500倍液處理的效果最顯著,可以推廣使用。為充分發(fā)揮海藻肥肥效的最佳施用方案,包括施用時(shí)間、次數(shù)、濃度和方法,以及海藻肥能否完全替代化肥施用等,有待繼續(xù)深入研究。
4參考文獻(xiàn)
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1、發(fā)育成熟的種子,在適宜的環(huán)境條件下開始萌發(fā);
2、經(jīng)過一系列生長(zhǎng)過程,種子的胚根突破種皮,向下生長(zhǎng),形成主根;
3、胚軸的細(xì)胞也相應(yīng)生長(zhǎng)和伸長(zhǎng),把胚芽連同子葉一起推出土面;
4、胚芽伸出土面,形成莖和葉,子葉隨胚芽一起伸出土面,展開后轉(zhuǎn)為綠色,進(jìn)行光合作用;
5、胚芽的幼葉張開行使光合作用;
6、子葉枯萎脫落;
關(guān)鍵詞:殼寡糖;小麥;種子萌發(fā);幼苗生長(zhǎng);影響
中圖分類號(hào):S482.8;S512.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2012)16-3431-02
Effect of Chito-Oligosaccharide on Seed Germination and Seedlings Growth of Wheat
YUAN Jian-ping1,LI Guo-h(huán)ui2,WANG Shu-min1,GAO Yong-chuang1
(1.College of Life Science, Langfang Normal University, Langfang 065000, Hebei,China;
2. Zhuozhou Bureau of Agriculture, Zhuozhou 072750, Hebei,China)
Abstract: Treating wheat seeds and seedlings with different concentrations of chito-oligosaccharide, the effects of chito-oligosaccharide on wheat seed germination and seedlings growth were discussed. 0.10 μg/mL of chito-oligosaccharide could promote the growth of the bud and root as well as improve the amylase activity of wheat seed obviously, and increase chlorophyll content and root activity of wheat seedling. On the other hand, 10.00 μg/mL of chito-oligosaccharide showed inhibition effect on the amylase activity of wheat seed. These results showed that chito-oligosaccharide had some effects on the growth of wheat and could play great practical value in wheat production.
Key words: chito-oligosaccharide; wheat; seed germination; seedlings growth; effect
殼寡糖(Chito-oligosaccharide)在生物制藥、抗腫瘤、提高動(dòng)物免疫力等醫(yī)藥領(lǐng)域具有不容忽視的作用;在調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)、提高植物抗病力等方面也有廣闊的應(yīng)用前景[1,2]。試驗(yàn)利用不同濃度的殼寡糖溶液處理小麥種子和幼苗,研究其對(duì)小麥種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響,以期為殼寡糖更好地應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料
供試小麥品種:輪選987(購于廊坊市廣陽區(qū)中愛種子公司)。殼寡糖:由廊坊師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室制備并提供。
1.2 試驗(yàn)方法
將小麥種子用0.1%的高錳酸鉀溶液消毒5 min,然后迅速用去離子水沖洗,用濾紙吸干種子表面的水分[3]。挑選大小一致的種子,分別用濃度為10.00、1.00、0.10、0.01 μg/mL的殼寡糖溶液室溫下浸種24 h,同時(shí)以去離子水浸種作為空白對(duì)照。將處理后的種子播種,出土后分別用清水及上述4種濃度的殼寡糖溶液進(jìn)行葉面噴施,每24 h噴灑1次。
1.3 測(cè)定項(xiàng)目及方法
1.3.1 種子根長(zhǎng)、芽長(zhǎng)的測(cè)定 分別取各試驗(yàn)組處理過的種子200粒,置于鋪有2層濾紙的托盤中,上蓋4層紗布,置于種子萌發(fā)箱中25 ℃恒溫培養(yǎng),種子萌發(fā)第四天測(cè)量種子的芽長(zhǎng)和根長(zhǎng)。
1.3.2 淀粉酶粗酶液的提取及活力測(cè)定 分別于浸種后0、1、2、3 d隨機(jī)稱取各試驗(yàn)組種子1.0 g,加入25 mL pH 6.4檸檬酸緩沖液,低溫迅速研磨,4 ℃、
3 000 r/min離心15 min,上清液即為淀粉酶原液。采用3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定淀粉酶的活性[4]。
1.3.3 葉綠素含量及根系活力的測(cè)定 待小麥幼苗長(zhǎng)出3片葉時(shí),稱取葉片1.0 g,采用Arnon法測(cè)定幼苗葉片的葉綠素含量[5];稱取小麥根樣品0.5 g,采用TTC法測(cè)定幼苗的根系活力[4]。
2 結(jié)果與分析
2.1 殼寡糖對(duì)小麥種子根長(zhǎng)、芽長(zhǎng)的影響