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【摘要】 目的 :觀察腦活素(施普善)對(duì)慢性低氧高二氧化碳大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響及大鼠海馬中caspase-3表達(dá)的變化,并探討可能的作用機(jī)制。方法 :篩選八臂迷宮訓(xùn)練后清潔級(jí)的雄性SD大鼠32只,隨機(jī)均分為對(duì)照組、模型組、施普善1 mL/kg組和施普善2.5 mL/kg組。采用八臂迷宮觀察干預(yù)前后大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的變化,Western-blot法檢測(cè)大鼠海馬caspase-3蛋白的表達(dá)。結(jié)果:與對(duì)照組比較,模型組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力下降,海馬中caspase-3明顯增高。與模型組大鼠比較,2種劑量施普善干預(yù)組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯改善,且海馬中caspase-3的表達(dá)減少。結(jié)論:施普善具有改善慢性低氧高二氧化碳大鼠空間學(xué)習(xí)記憶作用,可能與抑制海馬中caspase-3表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 施普善;低氧;高二氧化碳血癥;學(xué)習(xí)記憶;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3;海馬;大鼠
Abstract: Objective: To observe the effects of cerebrolysin on the learning-memory function and the changes of caspase-3 expression in the hippocampus of rats model with chronic hypoxia and hypercapnia,and to explore the probable mechanism. Methods: Thirty-two male S-D rats trained by eight-arm radial maze were pided into four groups: rats in the control group without treatment ;rats in chronic hypoxia and hypercapnia group were placed in the special closed cabin with hypoxia and hypercapnia for 8 hr a day, 6 day a week, 4 weeks and injected intraperitoneally with saline ;the rats in two treating group were injected intraperitoneally with 1 mg/kg and 2.5 mg/kg cerebrolysin, respectively. The learning-memory ability was measured using eight-arm radial maze and the expression of caspase-3 in the hippocampus was decteced with Western-blot.Results: Compared with the control group,the learning-memory ability was declined markedly and the expression of caspase-3 was increased significantly in chronic hypoxia and hypercapnia group. Nevertheless, the improvement of learning-memory and the less caspase-3 expression were observed in rats treated by two doses of cerebrolysin. Conclusion: Cerebrolysin may improve the learning-memory ability in rats with hypoxia and hypercapnia, which may be associated with the inhibition of the expressin of caspase-3 in the hippocampus.
Key words: Cerebrolysin;hypoxia;hypercapnia;learning-memory;caspase-3;hippocampus;rats
慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者存在不同程度的認(rèn)知功能障礙[1],但其機(jī)制目前尚不清楚。王小同等[2]在一系列研究中,證實(shí)慢性低氧高二氧化碳動(dòng)物模型大鼠存在空間學(xué)習(xí)和記憶障礙。施普善含有85%的游離氨基酸和15%低分子量生物活性肽,極易通過血腦屏障,具有神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用,已廣泛應(yīng)用于癡呆、腦卒中、腦外傷等引起的腦功能障礙治療,取得良好的臨床療效。本研究建立慢性低氧高二氧化碳大鼠模型,觀察施普善對(duì)其學(xué)習(xí)記憶功能障礙的治療作用及腦組織caspase-3蛋白表達(dá)的變化,并探討其可能的機(jī)制。
1 材料和方法
1.1 材料
常壓低氧高二氧化碳艙(溫州醫(yī)學(xué)院肺心病研究室研制),Medlab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)(南京美易科技有限公司),八臂迷宮(溫州醫(yī)學(xué)院神經(jīng)藥理研究所),八臂迷宮飼餌(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院),施普善(Cerebrolysin,奧地利Ebewe藥廠,批號(hào)608260),caspase-3 抗體(Cell Signaling Technology公司),GAPDH優(yōu)質(zhì)內(nèi)參(上??党缮锕こ逃邢薰荆?/p>
1.2 動(dòng)物分組和模型制備
清潔級(jí)SD大鼠(溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)44只,體重280~310 g,經(jīng)八臂迷宮訓(xùn)練淘汰12只。32只大鼠隨機(jī)均分為4組:①對(duì)照組;②慢性低氧高二氧化碳組(模型組);③慢性低氧高二氧化碳施普善(1 mL/kg)干預(yù)組(施普善1 mL/kg組);④慢性低氧高二氧化碳施普善(2.5 mL/kg)干預(yù)組(施普善2.5 mL/kg組)。后3組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后,置于常壓低氧高二氧化碳艙(氧濃度在9%~11%,二氧化碳濃度在5.5%~6.5%,艙內(nèi)溫度23~26 ℃,濕度50%~70%)內(nèi),每天8 h,在入艙前半小時(shí)按規(guī)定劑量分別予以腹腔注射生理鹽水和施普善;其余16 h放置于正常環(huán)境中。每周6 d,連續(xù)4周。
1.3 行為學(xué)測(cè)試
八臂迷宮測(cè)試:訓(xùn)練方法參照文獻(xiàn)[3]方法進(jìn)行訓(xùn)練,稱量自由攝食狀態(tài)下大鼠的體重,訓(xùn)練前大鼠禁食1 d,其后限食1 d,使其體重降至原體重的85%左右,在整個(gè)訓(xùn)練期間限食并維持原體重的85%左右。大鼠在迷宮中預(yù)適應(yīng)2 d,每天1次,第1天在八個(gè)臂中均撒上餌片任其自由攝食餌片10 min,第2天在固定的四臂中散上餌片(1、2、4、7臂),任其在迷宮中尋找食物10 min。訓(xùn)練時(shí),在選定的(1、2、4、7)臂中放置餌片,該次序維持到訓(xùn)練結(jié)束不變,將大鼠放于迷宮中央?yún)^(qū),用小桶蓋住,在迷宮中適應(yīng)15 s后提起小桶放出大鼠,大鼠可以自由選擇任意一臂攝取餌片。大鼠進(jìn)入有餌片的臂并攝取了餌片為一次正確的選擇不做記錄,重新進(jìn)入放餌片的臂稱為工作記憶錯(cuò)誤(working memory error,WME),第一次進(jìn)入不放餌片的臂稱為參考記憶錯(cuò)誤(reference memory error,RME),兩者之和為總的記憶錯(cuò)誤(total memory error,TE)。訓(xùn)練成功的標(biāo)準(zhǔn):連續(xù)5次訓(xùn)練錯(cuò)誤選擇次數(shù)為≤1次,同時(shí)WME必須為零。
1.4 caspase-3測(cè)定
大鼠斷頭處死,全腦取出置于冰盤上,依次取出皮層、海馬,去除腦膜和血管,迅速稱重后保存于液氮備用。取部分組織按1:10(密度:體積)加入細(xì)胞裂解液,冰上勻漿,13 000 g離心20 min收集上清液,BCA法測(cè)定蛋白濃度,等量蛋白(20~50μg)經(jīng)12%SDS-PAGE電泳后,電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上,5%脫脂奶粉TBST室溫封閉1 h;加入相應(yīng)一抗(Caspase-3及內(nèi)參抗體GAPDH,1:1 000)4 ℃孵育過夜,TBST洗膜3次;加入HRP標(biāo)記的相應(yīng)二抗(1:10 000)室溫?fù)u床孵育1 h,TBST洗膜3次;ECL試劑作用5 min,X光膠片曝光。沖洗并掃描后結(jié)果用quality one軟件分析雜交條帶灰度值,以GAPDH水平為內(nèi)對(duì)照。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法
組間比較采用單因素方差分析。
2 結(jié)果
2.1 各組八臂迷宮測(cè)試結(jié)果
與對(duì)照組比,模型組大鼠WME錯(cuò)誤次數(shù)和TE明顯增多,差異有顯著性(P
2.2 各組海馬中caspase-3的表達(dá)
如圖2所示。與對(duì)照組比,模型組海馬中caspase-3的表達(dá)明顯增高,差異有顯著性(3.287±0.682 vs 0.523±0.131,P
3 討論
本實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M大鼠的WME,TE的錯(cuò)誤次數(shù)均明顯增加,而RME增加不明顯??梢姡缘脱醺叨趸寄P痛笫笥锌臻g學(xué)習(xí)記憶和工作記憶能力受損,且以短時(shí)記憶受損為著,與臨床上COPD患者的表現(xiàn)相似。
既往研究[4]發(fā)現(xiàn),施普善具有類似神經(jīng)生長(zhǎng)因子樣作用,可重建皮層微管相關(guān)蛋白水平,恢復(fù)神經(jīng)元正常細(xì)胞骨架,增加海馬和皮層樹突分支和突觸密度,影響血腦屏障葡萄糖載體的表達(dá),增加大腦葡萄糖運(yùn)輸,改善神經(jīng)元的能量代謝,從而發(fā)揮其神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)活性。切除海馬穹隆傘造成學(xué)習(xí)記憶功能障礙的大鼠,給予施普善治療后,不僅改善記憶能力,而且改善獲得新信息的能力[5]。本實(shí)驗(yàn)顯示,施普善干預(yù)組大鼠的TE,WME,RME錯(cuò)誤次數(shù)較模型組明顯減少,認(rèn)知功能明顯改善,提示1 mL/kg和2.5 mL/kg兩種劑量施普善具有快速改善慢性低氧高二氧化碳引起的認(rèn)知功能障礙的作用。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí),慢性低氧可導(dǎo)致腦組織結(jié)構(gòu)和功能的損害,細(xì)胞凋亡在其中起著重要作用。喻林升等[6]研究發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,慢性低氧高二氧化碳模型大鼠腦微血管和神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,神經(jīng)元變性、壞死和凋亡,海馬神經(jīng)元的凋亡尤為明顯。徐浩等[7]實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明,慢性低氧高二氧化碳可誘發(fā)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡。已有研究報(bào)道,大鼠學(xué)習(xí)記憶功能受損與海馬神經(jīng)元的凋亡有密切關(guān)系[8]。Barhwal等[9]發(fā)現(xiàn)低氧環(huán)境中雄性Sprague Dawley大鼠水迷宮測(cè)試中工作記憶能力下降,海馬中凋亡蛋白如caspase-3表達(dá)明顯增高。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)模型組大鼠海馬的凋亡因子caspase-3表達(dá)顯著增強(qiáng),而1 mL/kg和2.5 mL/kg兩種劑量施普善干預(yù)組大鼠海馬組織中caspase-3表達(dá)明顯下降??梢姡缘脱醺叨趸荚黾恿舜笫蠛qR組織的細(xì)胞凋亡,而施普善的干預(yù)抑制了大鼠海馬組織的細(xì)胞凋亡,從而減輕海馬組織的損害。
Hartbauer等[10]采用低血清(2%胎牛血清)培養(yǎng)基的雞胚端腦神經(jīng)元細(xì)胞應(yīng)激模型,觀察施普善對(duì)神經(jīng)元活性和程序性細(xì)胞死亡的影響,發(fā)現(xiàn)施普善治療后的培養(yǎng)基中神經(jīng)元,凋亡相關(guān)的染色質(zhì)改變顯著減少,證實(shí)腦施普善的肽類成分具有抗凋亡作用,從而發(fā)揮長(zhǎng)期的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)。Yuan等[11]等研究表明,施普善可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng),尤其通過caspase等因子的激活,從而引起細(xì)胞色素C釋放、Apaf-1復(fù)合體形成等發(fā)揮作用。當(dāng)然,施普善對(duì)于海馬神經(jīng)元抗凋亡的保護(hù)機(jī)制目前仍不清楚,有待進(jìn)一步的研究證實(shí)。
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【摘要】 目的 觀察大蒜素對(duì)阿爾茨海默病(AD)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力和腦組織抗氧化能力的影響。方法 采用 D半乳糖建立AD小鼠模型,大蒜素治療組在造模的同時(shí)皮下注射大蒜素。通過行為學(xué)方法,觀察大蒜素對(duì)AD小鼠記憶能力的影響;測(cè)定各組腦組織中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;常規(guī)HE和鍍銀改良法染色觀察小鼠海馬及皮質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果 模型組與對(duì)照組、大蒜素治療組比較,小鼠記憶功能明顯減退,神經(jīng)細(xì)胞破壞明顯,海馬和皮質(zhì)出現(xiàn)β淀粉樣蛋白沉積及老年斑;大蒜素治療組和對(duì)照組的丙二醛(MDA)含量較模型組顯著降低(P
【關(guān)鍵詞】 大蒜素; 阿爾茨海默病; 行為學(xué);抗氧化能力
大蒜素是大蒜的主要成分,具有抗腫瘤、抗氧化、抗血小板聚集、提高免疫、清除自由基、護(hù)肝、降血脂、降血壓及預(yù)防心血管疾病等生理學(xué)作用〔1〕。因其具有較好的脂溶性,可通過血腦屏障,因此在防治腦血管病方面的作用也備受關(guān)注。研究資料顯示,大蒜素可改善血液流變性、增加腦血流量、清除自由基、改善腦功能及減輕急性腦梗死時(shí)缺血再灌注損傷〔2〕。大蒜素作為一種具有良好發(fā)展前景的天然抗氧化藥物,具有抗氧化延緩衰老的作用〔3〕,同時(shí)對(duì)腦缺血再灌注大鼠海馬神經(jīng)元具有保護(hù)作用〔4〕,而氧化應(yīng)激和海馬神經(jīng)元的損傷是阿爾茨海默病(AD)的主要發(fā)病機(jī)制。本研究采用D半乳糖致小鼠AD模型,從組織形態(tài)學(xué)角度,觀察大蒜素對(duì)AD腦組織的保護(hù)作用及對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用,并對(duì)其抗氧化機(jī)制進(jìn)行初步研究,為臨床應(yīng)用大蒜素防治AD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康昆明雌性小鼠30只,清潔級(jí),體重18~22 g,湖南長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物服務(wù)部提供,批準(zhǔn)號(hào):001847。
1.2 藥品與試劑 大蒜素腸溶膠囊(20 mg/粒,湖北金龍福藥業(yè)有限公司,批號(hào)H42022592),D半乳糖由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供(批號(hào)20050422),兔抗P38 MAPK、SABC免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒由武漢博士德有限公司提供,考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒及超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1.3 主要儀器 BX51 系統(tǒng)顯微鏡(Olympus)、微量進(jìn)樣器(上海安亭微量進(jìn)樣器廠)、UV3100PC型紫外可見分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司)。
1.4 動(dòng)物分組及造模 按照改良的Morris法對(duì)60只小鼠進(jìn)行連續(xù)7 d Morris水迷宮定向航行訓(xùn)練〔5〕。每天分上下午2個(gè)時(shí)段,每個(gè)時(shí)段訓(xùn)練2次,并記錄小鼠從放入水槽至找到平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期),若120 s仍找不到平臺(tái),則由實(shí)驗(yàn)者將小鼠放置于平臺(tái)上,逃避潛伏期記為120 s,并讓小鼠在平臺(tái)上休息30 s。根據(jù)訓(xùn)練成績(jī),選擇成績(jī)較好的30只小鼠。按體重分層隨機(jī)分成3組: AD模型組,大蒜素治療組,陰性對(duì)照組。每組10只。AD模型組與大蒜素治療組皮下注射12.5% D半乳糖40 μl,連續(xù)60 d。
1.5 給藥方法 大蒜素治療組在造模的同時(shí)按10 ml/kg進(jìn)行腹腔注射大蒜素腸溶膠囊提取物0.48 g·kg-1·d-1;AD模型組和陰性對(duì)照組給予相同劑量的生理鹽水,連續(xù)60 d。
1.6 水迷宮行為學(xué)檢測(cè) 連續(xù)給藥60 d后,對(duì)小鼠進(jìn)行改良的Morris水迷宮法檢測(cè),記錄小鼠的逃避潛伏期,評(píng)價(jià)各組大鼠記憶能力的改變。
1.7 抗氧化活性檢測(cè) 行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后,用25%的烏拉坦麻醉小鼠后固定于自制的手術(shù)板上,置于解剖盤中,開胸暴露并游離心臟。切開右心房,經(jīng)左心室插入灌流4℃生理鹽水20~30 ml,直至肝臟顏色轉(zhuǎn)白及右心房流出液澄清后,繼續(xù)灌注4%甲醛20~30 ml,取腦組織海馬部組織塊1 cm3 左右,4%甲醛浸泡固定24 h后,做石蠟組織切片。測(cè)定殘余腦組織重量,按重量體積比加4℃生理鹽水制成10%的組織勻漿,離心(2 500 r/min,10 min),取上清液,置4℃?zhèn)溆?。測(cè)定SOD 活力和MDA 含量。
1.8 組織形態(tài)的觀察 分別采用HE染色和鈴木神經(jīng)組織鍍銀改良法〔6〕染色觀察小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞及神經(jīng)原纖維纏結(jié)(NET)。
1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用x±s表示,兩個(gè)樣本比較采用t檢驗(yàn),多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,所有統(tǒng)計(jì)由SPSS17.0軟件處理。
2 結(jié) 果
2.1 大蒜素AD模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響 改良的Morris水迷宮記錄小鼠的潛伏期,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,AD模型組小鼠的潛伏期(54.25±4.34) s,明顯長(zhǎng)于大蒜素治療組(6.67±1.81) s和陰性對(duì)照組(12.18±3.94) s,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。
2.2 MDA、SOD測(cè)定 大蒜素治療組和陰性對(duì)照組MDA 含量較AD模型組顯著降低(P
2.3 小鼠海馬區(qū)域切片HE染色和鈴木神經(jīng)組織鍍銀改良法染色結(jié)果 HE染色結(jié)果顯示,AD模型組海馬區(qū)腦組織可見小膠質(zhì)細(xì)胞增多,神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞散失,排列不成行,組織疏松;大蒜素治療組海馬區(qū)腦組織可見神經(jīng)細(xì)胞普遍細(xì)長(zhǎng),細(xì)胞排列較規(guī)整;陰性對(duì)照組海馬區(qū)腦組織神經(jīng)細(xì)胞排列整齊,少數(shù)細(xì)胞濃染,見圖1。鈴木神經(jīng)組織鍍銀改良法染色結(jié)果示,模型組海馬區(qū)腦組織切片可清楚看到大量NET;大蒜素治療組海馬區(qū)腦組織切片錐體細(xì)胞顯示清晰,均未見到NET;對(duì)照組海馬區(qū)腦組織切片中錐體細(xì)胞顯示清楚,形態(tài)正常,未見NET,見圖2。表1 大蒜素對(duì)AD模型小鼠腦組織SOD活性和MDA 含量比較
3 討 論
AD是發(fā)生在老年期或老年前期的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性漸行性退行性疾病,以腦細(xì)胞內(nèi)NFT 、細(xì)胞外老年斑(SP) 以及大量神經(jīng)元丟失為主要病理特征〔7〕。國(guó)內(nèi)外研究證實(shí),自由基引起的氧化損傷是不同病因誘發(fā)神經(jīng)退行性疾病的共同通路〔8〕。大量的自由基能夠損傷生物大分子使蛋白質(zhì)、DNA和脂質(zhì)過氧化,致使神經(jīng)細(xì)胞凋亡和缺失,導(dǎo)致學(xué)習(xí)和記憶障礙,進(jìn)而導(dǎo)致或加重AD。
大蒜素又名大蒜新素,化學(xué)名為二烯丙基三硫化物,其結(jié)構(gòu)式為CH2=CH-CH-S-S-S-CH2-CH=CH2,是大蒜的主要有效成分。藤田勛等〔〕研究表明大蒜素的抗氧化活性部位是S(O)SCH2CH=CH2基團(tuán),其中烯丙基位的氫與抗氧化活性有關(guān)。有研究表明,大蒜素對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有明顯保護(hù)作用〔9〕,其機(jī)制可能與提高抗氧化酶活性,抗脂質(zhì)過氧化損傷及抗炎作用有關(guān)〔10〕。本研究表明大蒜素能改善AD模型小鼠學(xué)習(xí)能力和記憶功能,有效地清除腦組織過氧化代謝產(chǎn)物MDA,增強(qiáng)SOD的活性,提高了機(jī)體的抗氧化能力。因此,可以推斷大蒜素可以用來(lái)早期干預(yù)或預(yù)防AD,改善AD患者認(rèn)知、記憶等臨床癥狀。
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2011年,在唐總的正確領(lǐng)導(dǎo)和大力支持下,在文浩、向勇、涂純敏三位經(jīng)理的引導(dǎo)下,在技術(shù)部、售后服務(wù)部、前臺(tái)廖菲的配合下和組員及各同事的鼎力相助下,我快速的融入公司并且急速與公司同步成長(zhǎng)成為前線工作人員。
2011年,在公司全方位的步入正規(guī)和本地易購(gòu)網(wǎng)站(bendiyigou.com)日點(diǎn)擊率pv向5萬(wàn)沖刺時(shí),作為工作人員的我應(yīng)該為公司盡一份微簿之力,因此特?cái)M定以下幾點(diǎn):
一、業(yè)務(wù)部的專業(yè)化服務(wù)
業(yè)務(wù)員的拉訂單的方式應(yīng)該有所改變,不應(yīng)該像以前那樣去做業(yè)務(wù),我們應(yīng)該更專業(yè)化,這個(gè)專業(yè)化我的建議是體現(xiàn)在這幾個(gè)方面:第一,與去訪客戶做交談之前一定要對(duì)客戶做全面而深入的了解,如果對(duì)客戶了解的甚少,那么在探討和溝通的時(shí)候就會(huì)又很大的問題,經(jīng)常就會(huì)莫名其妙的丟失客戶;第二,我們應(yīng)該知道客戶的問題所在,客戶的問題就是我們的希望,因?yàn)橹灰覀兡軒椭蛻艚鉀Q他們所遇到的難題,客戶就有很大的可能和我們簽單,如有的客戶說(shuō)以前也做過推廣但效果不好,我們就要清楚這個(gè)客戶是像要找一個(gè)推廣效果好的推廣商,那么我們就可以說(shuō)出我們與其它的推廣不同的地方,而最重要的是要說(shuō)明我們的推廣效果。讓他們信服我們一定能給他們帶來(lái)他們想要的結(jié)果;第三,業(yè)務(wù)員還應(yīng)該對(duì)本地易購(gòu)的產(chǎn)品和服務(wù)有更深入的了解,這樣業(yè)務(wù)員才能根據(jù)客戶的要求快速的向客戶推出公司相關(guān)的產(chǎn)品和服務(wù);第四,業(yè)務(wù)員應(yīng)該準(zhǔn)時(shí),守時(shí),把客戶作為自己心目中的上帝。第五,帶新人學(xué)會(huì)如何找客戶?如何打電話?如何與客戶交談?如何介紹公司?如何專業(yè)的介紹業(yè)務(wù)?不能少于5次;特別是在電話營(yíng)銷的時(shí)侯,一定讓主管當(dāng)著新人的面給客戶打電話。讓新人學(xué)習(xí)該怎么說(shuō),說(shuō)些什么。而且我們公司的經(jīng)理基本都是從業(yè)務(wù)員做起的,都是非常優(yōu)秀的業(yè)務(wù)員,他們比主管有更豐富的經(jīng)驗(yàn)。在帶新人的時(shí)侯,經(jīng)理更應(yīng)該教授新人如何做。
當(dāng)然這些都是專業(yè)化服務(wù)的最基本的要求,其實(shí)還有很多需要業(yè)務(wù)員自己去整理和歸納,在這里作為我個(gè)人計(jì)劃的一部分像公司提出一些意見,希望公司越來(lái)越興旺。
二、公司的制度化管理
在2011年公司為了提高業(yè)務(wù)量并加強(qiáng)員工的管理,曾試著通過分組和拿提成的方法來(lái)提高員工的工作積極性和公司的業(yè)務(wù)量,但是實(shí)行一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn):組與組之間,成員與成員之間是提高彼此的積極性,然而后來(lái)我們又發(fā)現(xiàn)了一些不好的效果。成員之間因?yàn)闃I(yè)務(wù)的關(guān)系彼此之間的合作關(guān)系大大不如以前了。導(dǎo)致成員之間經(jīng)常因一些小事而不和,而且最重要的是因?yàn)楹献鞒隽诵﹩栴},因此當(dāng)然業(yè)務(wù)量的增加不如預(yù)先估計(jì)的那么好。顯然公司在管理層面上是有些問題的,世界500強(qiáng)的大公司之所以能做的比其他公司好,最主要的原因就是因?yàn)楣芾砟J缴媳绕渌靖鼊僖换I。而其中對(duì)業(yè)務(wù)員的管理更顯得重要,因?yàn)橐粋€(gè)公司的銷售做的好,公司才有利可圖,而銷售又與業(yè)務(wù)員有至關(guān)重要的聯(lián)系。故我認(rèn)為公司應(yīng)該擬定一套層次化、責(zé)任制具有執(zhí)行力的制度,并加強(qiáng)對(duì)業(yè)務(wù)員的培訓(xùn)和管理。對(duì)這個(gè)制度我的看法是:首先應(yīng)該把公司的員工劃分到各個(gè)部門,對(duì)每個(gè)部門來(lái)說(shuō),進(jìn)行專業(yè)化的培訓(xùn),這樣分工明確公司的效率才會(huì)提高,而且各個(gè)部門應(yīng)該設(shè)立一個(gè)負(fù)責(zé)人,負(fù)責(zé)各個(gè)部門的工作安排和人員調(diào)動(dòng)。并每個(gè)月由負(fù)責(zé)人舉行各個(gè)部門的部門會(huì)議,并把討論結(jié)果和建議向唐總匯報(bào),同時(shí)唐總只須下達(dá)指示和看其結(jié)果給予評(píng)價(jià)或者追究責(zé)任實(shí)行獎(jiǎng)懲。還可以通過一些獎(jiǎng)勵(lì)機(jī)制來(lái)提高員工的責(zé)任心和積極性,如全勤獎(jiǎng)等。其次公司向前發(fā)展,就應(yīng)該越來(lái)越細(xì)致了,不能還像剛成立那樣去經(jīng)營(yíng),應(yīng)該考慮的更細(xì)致,更專業(yè)了,這個(gè)細(xì)致和專業(yè)不是說(shuō)說(shuō)就算了的,重要的是讓客戶感受到,這樣才好吸引更多的客戶。因此,這就要我們大家一起探討我們的服務(wù)那里還有不足的地方。再次對(duì)于業(yè)務(wù)員來(lái)說(shuō),這個(gè)管理是最重要的,我的建議是業(yè)務(wù)員上崗之前應(yīng)該對(duì)我們公司和服務(wù)有深刻的了解,因此之前一定要進(jìn)行好培訓(xùn)。應(yīng)把一些業(yè)務(wù)做的好的員工作為帶頭人,帶領(lǐng)整個(gè)業(yè)務(wù)員隊(duì)伍的發(fā)展,可以讓他們傳授經(jīng)驗(yàn),當(dāng)然他們的作為帶頭人是業(yè)務(wù)精英,公司應(yīng)該采取獎(jiǎng)勵(lì)機(jī)制,這樣公司就會(huì)朝著業(yè)務(wù)精英的方向發(fā)展??傊镜陌l(fā)展一定要體現(xiàn)制度化和專業(yè)化了,到目前為止推廣效果基本上達(dá)到了預(yù)期的效果了,關(guān)鍵就在于公司服務(wù)的質(zhì)量上了,也就是說(shuō)人們都知道了本地易購(gòu),關(guān)鍵是人們對(duì)你的服務(wù)質(zhì)量的認(rèn)可了,所以重在提高服務(wù)的品質(zhì)了。
三、技術(shù)部的熱忱服務(wù)
技術(shù)部主要負(fù)責(zé)給公司做網(wǎng)頁(yè)和提供網(wǎng)絡(luò)技術(shù)方面的處理工作,是公司的幕后英雄,有不可替代的作用。技術(shù)部在給客戶做網(wǎng)頁(yè)的時(shí)候經(jīng)常會(huì)遇到客戶的反復(fù)的修改要求,在這里我們要知道客戶是上帝,我們應(yīng)該盡量滿足客戶的要求,我們要不厭其煩,直到達(dá)到客戶滿意的效果為止,當(dāng)然我們作為網(wǎng)頁(yè)方面的專業(yè)人員,有很多方面的知識(shí)客戶可能并不了解,對(duì)與客戶提出的無(wú)理要求,我們同樣要不厭其煩的向客戶解釋清楚,直到讓客戶知道這一切都是為了客戶好,只有這樣才能保證我們的客戶,同時(shí)也達(dá)到了一個(gè)很好的宣傳效果。
技術(shù)部的工作人員,在網(wǎng)站制作方面懶散,不管是什么樣的網(wǎng)站都應(yīng)該同等對(duì)待,像網(wǎng)站小的話,應(yīng)該按時(shí)按量的完成,直到客戶的認(rèn)可和滿意。一個(gè)網(wǎng)站的制作到結(jié)束,技術(shù)部都沒有一個(gè)至始至終的人。總是喜歡脫脫拉拉,這樣的做法即給業(yè)務(wù)人員帶來(lái)很不滿的情緒。這樣即影響業(yè)績(jī)的發(fā)展,同時(shí)也給客戶帶來(lái)不好的效益和口碑。所以希望唐總好好給技術(shù)部工作人員分配一下工作,同時(shí)也為了整個(gè)公司的發(fā)展,因?yàn)榧夹g(shù)部可是我們公司幕后最大的功臣。 1
2011年業(yè)務(wù)員個(gè)人工作計(jì)劃相關(guān):
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這些都是我對(duì)公司提出的一些小小的意見,這些意見出現(xiàn)在我的個(gè)人計(jì)劃書之中是要說(shuō)明空洞的計(jì)劃書還不如寫一點(diǎn)建議,至少能給公司帶來(lái)一些實(shí)際作用。當(dāng)然在2011年里我的計(jì)劃其實(shí)很簡(jiǎn)單,首先就是我希望我所負(fù)責(zé)的工作都要出色完成,并更加積極的配合大家一起把公司的業(yè)務(wù)搞上去;其次就是我要更好的提升自己,多學(xué)一些與公司發(fā)展有關(guān)的知識(shí);再次就是我要改正自己在工作中做的不好的地方,并希望得到同事的批評(píng)和指正;最后就是我要和同事和睦相處,互相配合。真心的祝愿我們的公司在唐總的領(lǐng)導(dǎo)下越來(lái)越紅火。
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2011年業(yè)務(wù)員個(gè)人工作計(jì)劃相關(guān):